The invention provides a pCasPA/pACRISPR dual plasmid system, which is characterized by including at least one of pCasPA plasmid and pACRISPR plasmid. The pCasPA plasmid can express Cas9 protein and lambda Red recombination system, and the pACRISPR plasmid can express sgRNA. The invention can (1) efficiently and rapidly knock out the genes of various strains of Pseudomonas aeruginosa; (2) efficiently and rapidly insert genes into the genomes of various strains of Pseudomonas aeruginosa. The technology has broad application prospects in the treatment of Pseudomonas aeruginosa infection, drug target discovery, drug development and physiological research of Pseudomonas aeruginosa.
【技术实现步骤摘要】
一种pCasPA/pACRISPR双质粒系统及其应用
本专利技术涉及一种pCasPA/pACRISPR双质粒系统及其应用。
技术介绍
铜绿假单胞菌是一种常见的革兰氏阴性菌，它广泛存在于环境中，例如泥土、水、植物和人体中，会引起糖尿病、严重创伤、囊肿纤维化、癌症和艾滋病等患者的感染，是一种常见的临床病原菌。绿脓杆菌的感染很难治疗，这很大程度上是由于其低渗透外膜屏障与耐药结节细胞分化(resistance-nodulation-celldivision，RND)家族多药耐药外排泵的协同作用，使得铜绿假单胞菌具有较强的多重耐药性。近年来，铜绿假单胞菌的感染情况日益严重，因此迫切需要寻找新型药物靶标和开发新型药物。基因组编辑和基因筛选技术是研究细菌致病性和抗药性的重要手段，对发现新的药物靶标具有重要意义。目前使用的传统铜绿假单胞菌基因组编辑技术主要基于同源重组双交换的方法。但是该方法操作过程复杂，效率低下，是一件非常费时费力的工作，大大限制了基因的研究工作。近年来最新开发的CRISRP/Cas9系统是一种新型基因组编辑技术，极具革新生命体中基因组修饰与突变技术的潜力。该系...
【技术保护点】
1.一种pCasPA/pACRISPR双质粒系统，其特征在于，包含pCasPA质粒和pACRISPR质粒中的至少一种，所述的pCasPA质粒能够表达Cas9蛋白和λ‑Red重组系统，所述的pACRISPR质粒能够表达sgRNA。
【技术特征摘要】
1.一种pCasPA/pACRISPR双质粒系统，其特征在于，包含pCasPA质粒和pACRISPR质粒中的至少一种，所述的pCasPA质粒能够表达Cas9蛋白和λ-Red重组系统，所述的pACRISPR质粒能够表达sgRNA。2.如权利要求1所述的pCasPA/pACRISPR双质粒系统，其特征在于，所述的pCasPA质粒包含λ-Red重组系统基因片段、Cas9蛋白基因片段以及ParaB启动子DNA片段，Cas9蛋白和λ-Red重组系统都受到阿拉伯糖启动子ParaB的调控。3.如权利要求1所述的pCasPA/pACRISPR双质粒系统，其特征在于，所述的pCasPA质粒包含sacB基因片段，所述的pACRISPR质粒包含sacB反向筛选基因片段。4.如权利要求1所述的pCasPA/pACRISPR双质粒系统，其特征在于，所述...
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