口蹄疫病毒抗原的多步连续集成纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种口蹄疫抗原的多步连续集成纯化方法，是从BHK‑21悬浮细胞培养的口蹄疫病毒液中多步连续集成纯化得到口蹄疫抗原，包括经离心澄清、超滤浓缩和/或深层过滤澄清后的离子交换层析等步骤。该多步连续集成纯化方法，使用深层过滤技术结合PEG沉淀法去除口蹄疫超滤浓缩液中的部分杂蛋白成分，再根据口蹄疫抗原表面所带电荷的差异性，应用离子交换层析和疏水层析进行多步层析纯化的工艺。本发明专利技术可用于高纯度口蹄疫抗原的制备，对超滤浓缩液的单次处理量可达900ml，纯度可达到90％，适用于要求纯度大于90％的口蹄疫抗原的大规模生产，并可根据生产规模进行扩缩，用于生产高纯度抗原的精制口蹄疫疫苗。

Purification of Foot and Mouth Disease Virus Antigen by Multi-step Continuous Integration

The invention discloses a multi-step continuous integration purification method for foot-and-mouth disease antigen, which is a multi-step continuous integration purification method from foot-and-mouth disease virus liquid cultured by BHK 21 suspension cells to obtain foot-and-mouth disease antigen, including steps of centrifugal clarification, ultrafiltration concentration and/or ion exchange chromatography after deep filtration clarification. This multi-step continuous integrated purification method uses deep filtration technology combined with PEG precipitation method to remove part of the impurity proteins in foot-and-mouth disease ultrafiltration concentrate. According to the difference of charges on the surface of foot-and-mouth disease antigen, ion exchange chromatography and hydrophobic chromatography are applied to the multi-step purification process. The invention can be used for the preparation of high purity foot and mouth disease antigen. The single treatment capacity of ultrafiltration concentrate can reach 900 ml, and the purity can reach 90%. It is suitable for mass production of foot and mouth disease antigen with purity higher than 90%. It can be expanded according to the production scale and used for the production of purified foot and mouth disease vaccine with high purity antigen.

【技术实现步骤摘要】
口蹄疫病毒抗原的多步连续集成纯化方法
本专利技术属于生物医药领域中的疫苗制备，涉及一种悬浮培养的口蹄疫病毒抗原的多步连续集成纯化方法。
技术介绍
口蹄疫(Foot-and-MouthDisease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDiseaseVirus，FMDV)引起的牛、猪和羊等偶蹄动物感染的一种急性、热性、高度接触性传染病。口蹄疫以口腔黏膜、舌面、唇、鼻镜、蹄部和乳房皮肤发生水疱和溃烂为特征，平均致死率仅为1％，但是被感染动物100％发病，且传播效力极高，使实际的畜产量锐减。口蹄疫一旦爆发将造成巨大的经济损失，因此世界各国对该病的研究极为重视。鉴于其危害之大，影响范围之广，口蹄疫被世界动物卫生组织(OIE)列为A类烈性传染病之首。目前，用于预防口蹄疫的疫苗为灭活口蹄疫病毒疫苗。传统的口蹄疫疫苗的制备方法是用BHK21细胞进行活病毒悬浮培养，将病毒液进行离心或过滤，去除细胞碎片，对收获的口蹄疫病毒液进行灭活处理，将灭活后的口蹄疫病毒液直接用作口蹄疫疫苗。该方法生产的疫苗由于抗原纯度较低(纯度一般为12.5％)，杂质含量较高(主要是宿主细胞蛋白质及DNA)，存在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种口蹄疫抗原的多步连续集成纯化方法，是从BHK‑21悬浮细胞培养的口蹄疫病毒液中多步连续集成纯化得到口蹄疫抗原，其特征在于，包括经离心澄清、超滤浓缩和/或深层过滤澄清后的离子交换层析等步骤。

【技术特征摘要】
1.一种口蹄疫抗原的多步连续集成纯化方法，是从BHK-21悬浮细胞培养的口蹄疫病毒液中多步连续集成纯化得到口蹄疫抗原，其特征在于，包括经离心澄清、超滤浓缩和/或深层过滤澄清后的离子交换层析等步骤。2.根据权利要求1所述多步连续集成纯化方法，其特征在于，所述离子交换层析为阴离子交换层析，层析柱选用DiamondQMustang阴离子交换层析柱，紫外检测波长为280nm。3.根据权利要求1或2所述多步连续集成纯化方法，其特征在于，在离子交换层析后还有疏水层析步骤；优选的，所述疏水层析的层析柱选用DiamondPhenylMustang疏水层析柱，紫外检测波长为280nm。4.根据权利要求1-3任一所述多步连续集成纯化方法，其特征在于，所述离心澄清具体为：将口蹄疫病毒培养液在3000-8000rpm下离心15-30min，取上清即为澄清液。5.根据权利要求1-4任一所述多步连续集成纯化方法，其特征在于，所述超滤浓缩具体为：用切向流超滤浓缩对离心澄清获得的澄清液进行超滤浓缩得到浓缩液，浓缩倍数为10-60倍，截留分子量为300-500KDa。6.根据权利要求1-5任一所述多步连续集成纯化方法，其特征在于，所述深层过滤澄清采用深层过滤滤膜澄清或采用PEG沉淀澄清。7.根据权利要求1-6任一所述多步连续集成纯化方法，其特征在于，所述深层过滤澄清为深层过滤滤膜澄清，对超滤浓缩得到的浓缩液用深层滤芯以100-300L/h的恒定流速进行澄清过滤，膜堆进出口压差控制在0.5MPa以内，得到浓缩澄清液。8.根据权利要求1-7任一所述多步连续集成纯化方法，其特征在于，所述深层过滤澄清为PEG沉淀澄清，向超滤浓缩得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈光达，张宇坤，刘国英，许静杰，范秀丽，张贵刚，韩四娥，史文瑞，纪燕，魏学峰，郭建军，亢和平，泰鹏，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15