肠道菌群的荧光检测试剂盒制造技术

本发明专利技术是一种利用纳米磁珠提纯粪便样品结合荧光流式细胞术检测肠道菌群的方法。在本发明专利技术中，提供了针对艰难梭菌、沙门氏菌、志賀氏菌、空肠弯曲菌、肠出血性大肠杆菌、肠炎弧菌和鼠疫杆菌的特异性DNA探针序列，利用偶联于探针序列上的荧光物质，通过微流控技术检测肠道菌群。本发明专利技术的检测方法具有快速，准确，灵敏度高等优点。

Fluorescence detection kit for intestinal flora

The invention relates to a method for purifying fecal samples with nano magnetic beads and detecting intestinal flora by fluorescence flow cytometry. In the present invention, specific DNA probe sequences for Clostridium difficile, Salmonella, Shigella, Campylobacter jejuni, Escherichia coli, Vibrio enteritidis and Yersinia pestis are provided, and fluorescent substances coupled to probe sequences are used to detect intestinal flora by microfluidic technology. The detection method of the invention has the advantages of fast, accurate and high sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
肠道菌群的荧光检测试剂盒
本专利技术属于生物诊断和检测领域，涉及一种肠道菌群的分子生物学检测方法，特别是涉及一种利用DNA荧光探针的检测技术、检测菌群DNA的试剂盒及应用。
技术介绍
在人体肠道中定居有大量细菌，即"肠道菌群"，这些肠道菌群被认为在人体中具有重要的作用，能极大的影响人体身体健康，是许多慢性疾病，如肥胖症、糖尿病等的重要诱因。最新的研究表明，肠道菌群的变化与帕金森等神经退行性疾病，甚至抑郁症等都有密切的关系，调整肠道菌群可能是一个新的治疗此类疾病的方向。因此，建立准确，快速的肠道菌群的检测系统和方法具有重要意义。现有的肠道菌群检测中，标本的采集基本为新鲜粪便样品。肠道菌群的研究方法主要有传统法和分子生物学的方法。传统法的培养法和镜鉴法是早期的肠道菌群研究方法。其中细菌的实验室培养，耗时长，并且肠道菌群的种类繁多，在实验室中难于快速高效地培养，为检测增加了难度。分子生物学技术检测粪便中细菌基因组DNA，是当前研究人体肠道菌群的重要方法。对DNA的检测方法，目前常采用的是对目标基因进行PCR扩增，对扩增产物进行定性，检测肠道菌群中目标DNA的存在与否，来判断被检测的细菌是否本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的核酸，包括SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9、或SEQ ID No.10。

【技术特征摘要】
2017.06.22 CN 20171048214721.分离的核酸，包括SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4、SEQIDNo.5、SEQIDNo.6、SEQIDNo.7、SEQIDNo.8、SEQIDNo.9、或SEQIDNo.10。2.DNA探针，其特征在于，为权利要求1所述的分离的核酸。3.DNA荧光探针，其特征在于，为3’端或者5’端的碱基上偶联有荧光物质的分离的核酸，所述分离的核酸选自SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4、SEQIDNo.5、SEQIDNo.6、SEQIDNo.7、SEQIDNo.8、SEQIDNo.9、或SEQIDNo.10；优选所述的荧光物质为Alexa488；优选所述的荧光物质偶联在分离核酸的5’端。4.一种肠道菌群的检测试剂盒，其特征在于，含有一种或多种权利要求3所述的DNA荧光探针；优选，所述检测试剂盒进一步含阳性对照探针；优选所述阳性对照探针是能结合肠道细菌共有序列的DNA探针，其3’端或5’端结合有荧光物质；优选所述阳性对照探针的序列为GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA；优选，在所述核酸序列5’端连接Alexa488荧光染料；优选，所述检测试剂盒进一步含有用于悬浮结合了DNA荧光探针后的细菌DNA的PBS溶液；优选，所述检测试剂盒进一步含有用于悬浮提取获得的细菌DNA的重悬液；优选所述重悬液的组成为：10mMTris‐HCl，pH8；优选，所述检测试剂盒进一步含有用于提取细菌DNA的试剂；优选，所述检测试剂盒进一步包含纳米磁珠悬浮提取核酸的试剂：裂解液、清洗液和磁珠；优选所述裂解液的组成为：500mMTris，16mMEDTA，10mMNaCl，pH9.0；优选所述清洗液的组成为：100mMTris‐HCl，pH7.5，1.5MLiCl，1mMEDTA；优选所述磁珠为表面包覆硅质膜的磁珠，优选为的磁珠。5.一种肠道菌群的检测方法，其特征在于，将细菌DNA与权利要求3所述的DNA荧光探针杂交；优选，在杂交之后利用荧光流式细胞技术进行检测；优选，所述检测方法进一步包括细菌DNA的提取操作；优选，将细菌DNA用重悬液制成混悬物，分为8等分，其中的7份分别加入针对7种细菌的权利要求3的DNA荧光探针，另一份加入阳性对照探针...

【专利技术属性】
技术研发人员：李莉，
申请(专利权)人：李莉，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA