利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法技术

本发明专利技术公开一种利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，其中，所述利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法包括将泡囊假单胞菌菌种进行发酵，制成菌液，所述菌液OD600浓度为0.8‑1.5；将所述菌液喷洒于待修复土壤中，翻地、起垄；在起好的田垄上开槽，喷洒所述菌液，种植烟草幼苗；按常规管理，定期收割烟草后，重新翻地，喷洒所述菌液，种植香雪球种子；按常规管理，定期处理香雪球。本发明专利技术提供的方法可修复镍污染土壤，同时种植经济效益高。

Phytoremediation of Nickel Contaminated Soil by Pseudomonas vesicularis

The invention discloses a method for promoting phytoremediation of nickel contaminated soil by using Pseudomonas vesicles. The method includes fermenting the strains of Pseudomonas vesicles to produce a bacterial liquid, the OD600 concentration of which is 0.8 to 1.5, spraying the bacterial liquid into the soil to be remediated, turning over the ground and ridging up, and getting ridged. Slotting on the ridge of the field, spraying the fungus liquid, planting tobacco seedlings; according to conventional management, after regular harvest of tobacco, plough the ground again, spray the fungus liquid, planting snowball seeds; according to conventional management, regular treatment of snowball. The method provided by the invention can repair nickel-contaminated soil and has high economic benefit for planting.

【技术实现步骤摘要】
利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法。
技术介绍
工业生产过程中排放的废水、废气和废渣，农业生产中施用的化肥、农药和除草剂都可能导致土壤重金属污染。当土壤中的重金属浓度达到一定数值时，种植的植物体中吸收重金属，人们再通过直接或间接食用，造成体内重金属积累。到重金属浓度过于高时，植物受到重金属胁迫作用，难以生存。现有技术中，采用富集植物将土壤中的重金属富集于植物体内，以降低土壤中的重金属含量，但是富集植物通常为杂草等，不具有经济效益的植物体，收获后仅能进行填埋或焚烧处理。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提供一种利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，以克服现有的富集植物经济效益差的问题。为实现上述目的，本专利技术提出一种利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，包括：步骤一，将泡囊假单胞菌菌种进行发酵，制成菌液，所述菌液OD600浓度为0.8-1.5；步骤二，将所述步骤一中制备的菌液喷洒于待修复土壤中，翻地、起垄；步骤三，在起好的田垄上开种植槽，在所述种植槽内喷洒所述步骤一中制备的菌液，种植烟草幼苗；步骤四，按常规管理，定期收割烟草后，重新翻地，喷洒所述步骤一制备的菌液，种植香雪球种子；步骤五，按常规管理，定期处理香雪球。优选地，所述步骤一具体包括：将泡囊假单胞菌菌种放入液体培养基进行发酵，制成所述菌液，每升所述液体培养基包括：明胶胨15-18g，胰蛋白胨10-13g，硫酸钾10-13g，氯化镁1-2g，琼脂15-20g，甘油100-120ml，以及水。优选地，所述步骤二中以垄距为1.2米，垄宽1米，垄高0.3米起垄。优选地，在所述步骤二和所述步骤三中，所述菌液的喷洒量为0.5mL-2mL/m2。优选地，所述步骤三包括：在起好的田垄上开深5-10cm，宽10-15cm的所述种植槽，向所述种植槽中喷洒所述步骤一中制备的菌液，以株行距为0.5m*1.2m种植所述烟草幼苗，并覆膜。优选地，所述烟草幼苗的根部浸泡所述菌液后植入所述种植槽中。优选地，所述步骤四中，所述香雪球种子经2％高锰酸钾消毒，用无菌水将种子冲洗干净，再经所述菌液浸泡1-1.5h，然后播种。优选地，在所述步骤四中，7-8月对烟草进行收割，烟草收割后，种植香雪球，次年3月上盆定植。优选地，所述方法还包括：对所述步骤四中收割的烟草进行分类处理，摘取烟叶除去主叶脉，将所述主叶脉、烟草根茎填埋处理。优选地，所述步骤五包括：按常规管理，3月收割所述香雪球的花茎，将所述香雪球的茎、叶、根填埋处理。在本专利技术中，通过泡囊假单胞菌吸收待修复土壤中的重金属离子、改变金属离子价态、分泌蛋白固化重金属离子，从而有利于降低土壤中游离的重金属离子；通过泡囊假单胞菌新陈代谢作用减小重金属污染对种植植物的胁迫作用，可增加烟草、香雪球的生物量，加大植物对重金属离子的固定总量；通过种植重金属富集植物烟草和香雪球，将土壤中的重金属离子固定于植物体内，以减小土壤中的镍离子含量；同时烟草是一种经济植物，香雪球本身能作为观赏植物，以增加经济效益；烟草和香雪球成长期相配合，可实现轮种。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。图1为本专利技术利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法一实施例的流程示意图。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。另外，本专利技术各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。本专利技术提出一种利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，包括：步骤S1，将泡囊假单胞菌(Pseudomonasvesicularis)菌种进行发酵，制成菌液，所述菌液OD600浓度为0.8-1.5；具体地，将30-50ml的液体培养基放入摇瓶中，再用接种环将泡囊假单胞菌菌种放入摇瓶中，28℃，280rpm活化8h，放入4℃冰箱保存备用；取活化的泡囊假单胞菌菌种放入液体培养基进行发酵，制成菌液，放入分光光度计，测定OD600浓度为0.8-1.5，发酵完成。每升液体培养基包括：明胶胨15-18g，胰蛋白胨10-13g，硫酸钾10-13g，氯化镁1-2g，琼脂15-20g，甘油100-120ml，以及无菌水。当然本领域技术人员也可以根据需要放置一定量的抗生素，以减小发酵过程中，杂菌的侵入。步骤S2，将所述步骤S1中制备的菌液喷洒于待修复土壤中，翻地、起垄；具体地，待修复的土壤为镍超标土壤。将所述步骤S1中制备的菌液以0.5mL-2mL/m2喷洒于待修复土壤中后，进行翻地，能使菌液与表层土壤混合。以垄距为1.2米，垄宽1米，垄高0.3米起垄，有利于烟草的生长。泡囊假单胞菌通过表面吸附、囊泡内沉淀吸附一部分重金属离子；泡囊假单胞菌的新陈代谢作用，使得金属离子价态改变，从而有利于植物吸收；通过分泌蛋白与重金属离子结合，从而固化一部分重金属离子，有利于降低土壤中游离的重金属离子，以减小重金属污染对所种植物的胁迫作用。优选地，喷洒所述菌液一周后，进行步骤S3，使得菌液中的泡囊假单胞菌在待修复土壤中大量繁殖。步骤S3，在起好的田垄上开槽，喷洒所述步骤S1中制备的菌液，种植烟草幼苗；具体地，在起好的田垄上开深5-10cm，宽10-15cm的种植槽，向所述种植槽中以喷洒量为0.5mL-2mL/m2喷洒所述菌液；将所述烟草幼苗的根部浸泡所述菌液后以株行距为0.5m*1.2m种植所述烟草幼苗，并覆膜。在种植槽内，以及烟草幼苗的根部均沾染菌液，使得在烟草幼苗生长过程中，烟草和泡囊假单胞菌形成共生关系，同时避免移栽过程中，因植株造成损伤所导致的植物病害，例如烟草花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病等。泡囊假单胞菌具有分泌铁载体的能力和降低硫离子价态的能力，在不影响植物地上部分的重金属镍含量前提下，提高植物生长速度和增大植物生物量，进而提高了植物对重金属镍的富集效果。步骤S4，按常规管理，定期收割烟草后，重新翻地，喷洒所述步骤S1制备的菌液，种植香雪球种子；具体地，在育苗棚内对烟草种子进行萌发处理，于4-5月将烟草幼苗移栽至大田中，直至7-8月对烟草进行收割，烟草收割后，种植香雪球，次年3月上盆定植或收割香雪球，再重复上述过程。对所述步骤四中收割的烟草进行分类处理，摘取烟叶除去主叶脉，将所述主叶脉、烟草根茎填埋处理。具体地，填埋处理为将收集到的主叶脉、烟草根茎在非种植区做统一深埋处理。所述香雪球种子经2％高锰酸钾消毒，用无菌水将种子冲洗干净，再经所述菌液浸泡1-1.5h，然后播种。重金属本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，包括：步骤一，将泡囊假单胞菌菌种进行发酵，制成菌液，所述菌液OD600浓度为0.8‑1.5；步骤二，将所述步骤一中制备的菌液喷洒于待修复土壤中，翻地、起垄；步骤三，在起好的田垄上开种植槽，在所述种植槽内喷洒所述步骤一中制备的菌液，种植烟草幼苗；步骤四，按常规管理，定期收割烟草后，重新翻地，喷洒所述步骤一制备的菌液，种植香雪球种子；步骤五，按常规管理，定期处理香雪球。

【技术特征摘要】
1.一种利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，包括：步骤一，将泡囊假单胞菌菌种进行发酵，制成菌液，所述菌液OD600浓度为0.8-1.5；步骤二，将所述步骤一中制备的菌液喷洒于待修复土壤中，翻地、起垄；步骤三，在起好的田垄上开种植槽，在所述种植槽内喷洒所述步骤一中制备的菌液，种植烟草幼苗；步骤四，按常规管理，定期收割烟草后，重新翻地，喷洒所述步骤一制备的菌液，种植香雪球种子；步骤五，按常规管理，定期处理香雪球。2.如权利要求1所述的利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，其特征在于，所述步骤一具体包括：将泡囊假单胞菌菌种放入液体培养基进行发酵，制成所述菌液，每升所述液体培养基包括：明胶胨15-18g，胰蛋白胨10-13g，硫酸钾10-13g，氯化镁1-2g，琼脂15-20g，甘油100-120ml，以及水。3.如权利要求1所述的利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，其特征在于，所述步骤二中以垄距为1.2米，垄宽1米，垄高0.3米起垄。4.如权利要求1所述的利用泡囊假单胞菌促进植物修复土壤镍污染的方法，其特征在于，在所述步骤二和所述步骤三中，所述菌液的喷洒量为0.5mL-2mL/m2。5.如权利要求1所述的利用泡囊假单胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：张卫，刘加力，刘拥军，黄丹，
申请(专利权)人：西施生态科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43