本发明专利技术提供了荨麻提取物，所述的提取物包括85‑95℃的热水提取物、质量浓度70‑80%乙醇提取物，以及醇提后经过石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取后的提取物。本发明专利技术最终通过对透明质酸酶的抑制率大小来评价其抗过敏活性。采用本发明专利技术的技术方案得到的荨麻抗过敏活性成分在热乙醇中溶出较为完全，而经过石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取后，纯度提高而导致透明质酸酶抑制率升高。
【技术实现步骤摘要】
荨麻提取物及在制备治疗抗过敏的药物上的应用
本专利技术涉及一种荨麻的提取物，并将其应用于制备治疗抗过敏的药物中，属于生物制药
技术介绍
荨麻(UrticafissaEPritz)属于被子植物门下属的荨麻科(Urticaceae)荨麻属(UrticaL.)植物，为多年生草本植物，稀灌木，具刺毛，主要分布于我国安徽、湖南、湖北、河南、陕西、甘肃、四川、贵州及四川等地，全草均可入药。具有祛风解痉，活血除湿以及解蛇毒等作用。据文献报道，荨麻的化学成分主要有黄酮类、有机酸类、酚类、多糖类、香豆素类、木质素类、甾醇类以及丰富的蛋白质等。聂鲁研究发现，正彝族药物荨麻，可用于治疗丘疹、湿疹、荨麻疹等过敏性皮肤病，疗效十分显著。国外研究发现，荨麻属植物提取物可抑制与过敏性鼻炎相关的受体和酶的表达。
技术实现思路
本专利技术的技术方案鉴于荨麻提取物对过敏反应有潜在的抑制作用，提供一种荨麻抗过敏成分的提取物本专利技术分别对荨麻全草干粉及新鲜荨麻采用了醇提和水提；冷水提和热水提及有机溶剂逐步提取方法，分析荨麻抗过敏物质的耐热性、及溶解性。具体包括如下内容：荨麻提取物，所述的提取物为85-95℃的热水提取物。荨麻提取物，所述的提取物为质量浓度70-80％乙醇提取物，所述的提取温度为65-75℃。上述荨麻提取物，所述的提取物为荨麻干粉或荨麻全草干粉，其中提取物与所述的5-95℃的热水提取物或质量浓度70-80％乙醇提取物的质量比为1:10-50。进一步优选方案为所述的提取物为经质量浓度70-80％乙醇提取物提取后再依次经石油醚萃取、乙酸乙酯萃取、正丁醇萃取后冻干制剂。本专利技术的技术方案将所述的荨麻提取物在制备治疗抗过敏的药物上的应用。具体是通过各组分对透明质酸酶的抑制率大小来评价其抗过敏活性。采用本专利技术的技术方案得到的荨麻抗过敏活性成分在热乙醇中溶出较为完全，而经过石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取后，纯度提高而导致透明质酸酶抑制率升高。然后根据单因子正交实验方案，最后获得荨麻的最佳提取工艺条件。附图说明图1荨麻提取物对小鼠低分子右旋糖酐致瘙痒的影响，其中，A：荨麻提取物对小鼠瘙痒频率的影响；B：荨麻提取物对小鼠瘙痒次数的影响。图2Balb/c小鼠被动皮肤过敏过程中耳部皮肤蓝染图。图3荨麻提取物对致敏激发后Balb/c小鼠被动皮肤过敏反应的影响。图4荨麻提取物对致敏激发后Balb/c小鼠血清中IgE及组胺浓度的影响。其中，A：荨麻提取物对致敏激发后Balb/c小鼠血清中IgE浓度的影响；B荨麻提取物对致敏激发后Balb/c小鼠血清中组胺浓度的影响。图5荨麻提取物对RBL-2H3细胞增殖活性的影响。图6不同浓度荨麻提取物对RBL-2H3细胞活化β-HEX释放的影响。图7不同浓度荨麻提取物对RBL-2H3细胞活化组胺释放的影响。图8不同浓度荨麻提取物对致敏激化后RBL-2H3细胞活化脱颗粒p-Lyn/Lyn、p-Syk/Syk蛋白表达的灰度值结果。A：不同浓度荨麻提取物对致敏激化后RBL-2H3细胞活化脱颗粒p-Lyn/Lyn蛋白表达的灰度值结果；B不同浓度荨麻提取物对致敏激化后RBL-2H3细胞活化脱颗粒p-Syk/Syk蛋白表达的灰度值结果。图9不同浓度荨麻提取物对致敏激化后RBL-2H3细胞活化脱颗粒p-Lyn/Lyn、p-Syk/Syk蛋白表达的统计学结果。A：不同浓度荨麻提取物对致敏激化后RBL-2H3细胞活化脱颗粒p-Lyn/Lyn蛋白表达的统计学结果；B不同浓度荨麻提取物对致敏激化后RBL-2H3细胞活化脱颗粒p-Syk/Syk蛋白表达的统计学结果。具体实施方式荨麻：产于湖北省宜昌市远安县，经宜昌市药品检验所检测符合中国药典2005年版一部(检验编号：20061188)。实施本专利技术的技术方案用到的仪器如下：Suprafuge22型离心机(Heraeus公司)；蒸发器RE-52A(上海亚荣生化仪器厂)；KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；AB204-N分析天平(瑞士MettlerToledo公司)；721E可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；KDM型调温电热套(山东鄄城永光仪器厂)；中草药粉碎机(中国)；DK-S26电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)；微量取样器(200μL，1000μL各一)。实施本专利技术的技术方用到的试剂如下：浓硫酸(分析纯)、苯酚(分析纯)、葡萄糖(分析纯)、95％乙醇(医用级)。自制双蒸水。荨麻有效活性成分的提取如下：将样品荨麻洗净，取部分荨麻鲜品置于4℃冰箱保存备用，另取部分置于鼓风烘箱中60℃烘干。用高速粉碎机粉碎，过20目筛后，的干粉置于干燥器中保存备用。荨麻干粉热水浸提精密称取30g干粉，经90℃热水浸提1h，料液比为1:40，冷却，过滤，滤渣重复上述操作，合并两次滤液后，浓缩，冷冻干燥，得到荨麻干粉热水浸提物，作为样品A。荨麻鲜叶热水浸提精密称取新鲜荨麻200g，经90℃热水浸提1h，料液比为1:15，过滤后再将滤渣重复上述操作，合并两次提取液后浓缩冷冻干燥，得到荨麻鲜叶热水浸提物，作为样品B。荨麻干粉热乙醇回流提取精密称取30g干粉，经75％乙醇70℃条件下回流提取1h，料液比为1:40，过滤后再将滤渣重复上述操作，合并两次提取液后浓缩冷冻干燥，得到荨麻干粉热乙醇提取物，作为样品C。荨麻干粉冷水浸提精密称取30g干粉，经冷水浸提24h，料液比为1:40，除去滤渣后将提取液浓缩冷冻干燥，得到荨麻干粉冷水浸提物，作为样品D。荨麻醇提取物经不同溶剂分离萃取精密称取荨麻干粉60g，75％乙醇在70℃下回流提取2h，料液比为1:40，冷却，过滤，再重复上述步骤，合并两次提取液，浓缩后得到乙醇提取物，经石油醚萃取至石油醚层无色，得石油醚层，低压浓缩，冷冻干燥得到石油醚萃取物，为样品E。将样品E一部分再经乙酸乙酯萃取，至乙酸乙酯层无色，得乙酸乙酯层，低压浓缩，冷冻干燥得到乙酸乙酯萃取物，为样品F。将样品F一部分再经正丁醇萃取，至正丁醇层无色，得正丁醇层，萃取液浓缩、冷冻干燥后得到正丁醇萃取物，为样品G。将样品G一部分经-20℃冷冻干燥，为样品H。透明质酸酶体外抑制的方法透明质酸酶参与Ⅰ型超敏反应的发生，与过敏反应以及炎症反应有很强的相关性，能影响肥大细胞脱颗粒反应的药物均能对透明质酸酶的活性产生影响。因此本专利技术以透明质酸酶体外抑制率作为荨麻提取物抗过敏活性的评判标准，以此优化筛选出荨麻提取物抗过敏活性最高的部分。具有步骤如下：(1)溶剂的配制透明质酸酶溶液：将0.01g透明质酸酶加入到4mL醋酸缓冲溶液，配置成最终浓度为1250μg/mL的透明质酸酶溶液。透明质酸钠溶液：将0.005g透明质酸钠加入到10mL醋酸缓冲溶液中，充分溶解后得到0.5μg/mL透明质酸钠溶液。醋酸缓冲溶液(pH＝5.6)：取2300μL冰乙酸于容量瓶中，加入去离子水稀释至200mL，混匀后取4.8mL作为A溶液；取5.44g乙酸钠试剂，加入去离子水溶解并定容至200mL，混匀后量取45.2mL作为B溶液；将A、B溶液混匀，加入去离子水定容至100mL。用PH仪精确测定pH值，并用溶液A或B调整pH值至5.6。埃尔利希试剂：将0.8g对-二甲氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中。乙本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.荨麻提取物，其特征在于，所述的提取物为85‑95℃的热水提取物。
【技术特征摘要】
1.荨麻提取物，其特征在于，所述的提取物为85-95℃的热水提取物。2.荨麻提取物，其特征在于，所述的提取物为质量浓度70-80%乙醇提取物，所述的提取温度为65-75℃。3.根据权利要求2或3所述的荨麻提取物，其特征在于，所述的提取物为荨麻干粉或荨麻全草干粉，其中提取物与权利要求2或3所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈涛，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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