一种青花菜杂交种纯度的快速检测方法及应用技术

本发明专利技术属于蔬菜检测技术领域，公开了一种青花菜杂交种纯度的快速检测方法及应用,提取青花菜基因组DNA；根据公布的4对引物序列，并对其进行编号；确定PCR扩增的体系、成分及反应程序；对扩增引物进行检测；鉴定杂交种“台绿5号”的纯度。本发明专利技术使用4对SSR引物同时鉴定青花菜‘台绿5号’杂交种纯度的准确性高，与田间鉴定结果相符度达100％，结果可靠；鉴定在10天以内即可完成，避免田间种植鉴定的繁琐程序，节约劳动力和土地资源，鉴定成本低；在制种当年确定种子遗传纯度，便于种子定级与收购，提高鉴定效率；对DNA提取、凝胶电泳等实验操作都做相应的简化，更适合对大规模批量样本进行检测。

【技术实现步骤摘要】
一种青花菜杂交种纯度的快速检测方法及应用
本专利技术属于蔬菜检测
，尤其涉及一种青花菜杂交种纯度的快速检测方法及应用。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：青花菜(Brassicaoleraceavar.italica)，又名绿花菜、西兰花等，是十字花科芸薹属甘蓝种的一个变种。其食用部分是带有花蕾群的肥嫩花茎，营养丰富，风味独特，而且具有抗癌和抗氧化功效，深受广大消费者的喜爱。近年来我国青花菜栽培面积逐年增加，对优势青花菜品种的需求也不断加大，利用杂种优势生产青花菜F1杂交种已经成为一种趋势。但是，在杂交种制种过程中母本自交，人们操作过程的相互传粉，鸟类、蜜蜂等造成的串粉都会形成假杂种，再加上青花菜杂交种种粒小且品种之间差异小，在收获、脱粒、加工、贮藏、包装、销售的过程中也容易造成混杂。目前育种者主要依靠常规大田种植对青花菜杂交种纯度进行鉴定，但其周期长且费工、占地，易受季节限制，对当年生产的杂交种纯度难以确定，对因环境条件影响所引起的变异与本品种遗传所产生的变异区分较困难，不适应当前生产的需要。植物品种之间的差异归根结底是基因的差异，利用现代分子生物学手段从遗传基础上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种青花菜杂交种纯度的快速检测方法，其特征在于，所述的青花菜杂交种纯度的快速检测方法：步骤一：采用CTAB简易提取法，快速提取青花菜基因组DNA；步骤二：根据公布的引物，从中筛选到具有多态性的3对SSR和1对EST‑SSR引物，并进行编号；步骤三：确定PCR扩增的体系、成分及反应程序；步骤四：对扩增引物进行检测，在扩增产物中加入2μL的loading Buffer混匀，取混合物在双垂直板浓度为8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，凝胶经染色和显色液显色后照相；步骤五：通过被鉴定样品在凝胶上的条带特征来鉴定杂交种的纯度。

【技术特征摘要】
1.一种青花菜杂交种纯度的快速检测方法，其特征在于，所述的青花菜杂交种纯度的快速检测方法：步骤一：采用CTAB简易提取法，快速提取青花菜基因组DNA；步骤二：根据公布的引物，从中筛选到具有多态性的3对SSR和1对EST-SSR引物，并进行编号；步骤三：确定PCR扩增的体系、成分及反应程序；步骤四：对扩增引物进行检测，在扩增产物中加入2μL的loadingBuffer混匀，取混合物在双垂直板浓度为8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，凝胶经染色和显色液显色后照相；步骤五：通过被鉴定样品在凝胶上的条带特征来鉴定杂交种的纯度。2.如权利要求1所述的青花菜杂交种纯度的快速检测方法，其特征在于，所述步骤一中，采用CTAB简易提取法快速提取青花菜幼苗基因组DNA，具体步骤包括：①苗期取幼嫩叶片0.2g，剪成小块，装入2mL离心管中，同时每只离心管加入1粒不锈钢钢珠，盖好离心管盖后放入装有液氮的泡沫盒中静置10min，倒出液氮，快速用力摇晃泡沫盒5min；②打开离心管盖倒出钢珠，向离心管中加入600μL2％CTAB裂解液，65℃水浴30min；③加入等体积氯仿:异戊醇(24:1)轻轻摇晃数次，12000rpm离心10min；④取上清，加入2/3体积预冷异丙醇，混匀，-20℃冰箱静置120min，12000rpm离心10min；⑤弃上清，沉淀出的DNA用70％乙醇洗涤两次，干燥后加入ddH2O-20℃保存备用。3.如权利要求1所述的青花菜杂交种纯度的快速检测方法，其特征在于，所述步骤二中，4对引物编号及序列分别为:SSR6：上游引物5'-CGAACATCTTAGGCCGAATC-3'；下游引物5'-GGTTAACCTGCGGGATATTG-3'；BoE225：上游引物5'-ATCTGATGTGGAGCCTGTTGTT-3'；下游引物5'-CCTTACGATCTGGGAGTGAAAA-3'；CB10028：上游引物5'-...

【专利技术属性】
技术研发人员：高旭，何道根，朱长志，檀国印，
申请(专利权)人：台州市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：浙江,33