【技术实现步骤摘要】
一种滑菇溯源的方法
本专利技术涉及食品安全领域,尤其是一种滑菇溯源的方法。
技术介绍
滑子菇学名Pholiotanameko,又名珍珠菇、滑菇、光帽鳞伞,属于珍稀品种。滑菇是一种适宜在低温环境下生长的木腐菌,子实体是红褐色的,因为在滑菇菌盖表面总是分泌大量黏滑液体而出名,口感脆嫩爽滑。在北方种植较多,主要分布在黑龙江、吉林、辽宁、台湾、云南、西藏等省自治区。滑菇含有丰富的营养成分,主要有多糖、粗蛋白、脂肪、多种矿物质和维生素,其中蛋白质含量远远高于水果、蔬菜和其他粮食作物。滑菇表面和子实体中含有丰富的多糖,这种多糖有较强的抗氧化能力,能够间接起到抑制肿瘤生长的作用;滑菇多糖可以作为一种非特异性免疫促进剂,通过对淋巴细胞、树突细胞、巨噬细胞等的作用,激活免疫受体,来调节机体的免疫功能,提高机体的免疫能力。此外滑菇多糖还具有预防感染、抗病毒、降血糖、抗衰老和抗突变的作用。随着经济快速发展和环境污染加剧,食品中各种危害风险不同程度地存在或增大,影响到人们身体健康、经济发展与社会稳定;同时随着人们生活水平的提高,对食品营养与安全的要求越来越高。食品的生产环节非常多,而且具 ...
【技术保护点】
1.一种滑菇溯源的方法,其特征在于:基于表观遗传学技术检测不同来源的滑菇样品的甲基化率,通过比较A3‑hox2、pdi370、PNAP2、RNPn30和PnMnP5五种基因中任意几种或全部的甲基化率的差异以实现对滑菇溯源。
【技术特征摘要】
1.一种滑菇溯源的方法,其特征在于:基于表观遗传学技术检测不同来源的滑菇样品的甲基化率,通过比较A3-hox2、pdi370、PNAP2、RNPn30和PnMnP5五种基因中任意几种或全部的甲基化率的差异以实现对滑菇溯源。2.根据权利要求1所述的滑菇溯源的方法,其特征在于:检测不同来源的滑菇样品的甲基化率的方法包括BSP-克隆测序法、焦磷酸测序检测法和基于芯片的甲基化图谱分析。3.根据权利要求1所述的滑菇溯源的方法,其特征在于:具体方法如下:(1)挑选无明显组织伤痕、大小均一、新鲜无异臭味、颜色鲜艳发亮且干净的不同产地的新鲜滑菇备用,标出编号;采用CTBA法提取DNA或者试剂盒提取DNA,通过下述方法(a)、(b)或(c)进行检测:(a)BSP-克隆测序法:①DNA的亚硫酸盐修饰:对提取的基因组DNA进行亚硫酸氢盐修饰处理,基因组上未甲基化的CpG岛,C碱基转变成U;亚硫酸氢盐的处理步骤包括碱变性、硫化与脱氢、纯化与脱硫和沉淀回收;或者基因组DNA的亚硫酸盐处理采用ZYMOEZDNAMethylationGoldKit试剂盒来完成;②PCR扩增及电泳检测:以重亚硫酸盐修饰处理后的DNA作为模板进行PCR扩增;序列中未甲基化的C碱基变成T碱基,而甲基化的C碱基不变;其扩增引物由Kismeth在线完成设计,五种基因的甲基化引物分别设计,五种基因的引物序列具体见序列表;反应体系由滑菇样品DNA2.5μl,10×Buffer6μl,上游和下游引物各2.5μl,Fast-Taq酶0.4μl,dNTP2.0μl,去离子H2O30.5μl,采用巢式PCR或者降落PCR进行扩增,2%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物;③目的条带的回收、TA克隆及测序:从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块,采用DNA纯化试剂盒回收纯化扩增的DNA片段;将扩增的DNA片段进行TA克隆连接反应,阳性克隆进行测序,每个片段保证有7-10个克隆成功测序;④序列比对及甲基化分析:测序的结果经整理后通过Kismeth在线软件进行甲基化程度的分析,得到五个特异性的滑菇基因A3-hox2、pdi370、PNAP2、RNPn30和PnMnP5甲基化的位点和程度;(b)焦磷酸测序测序法:①DNA亚硫酸盐处理;处理步骤同上述步骤(a);②引物设计:用焦磷酸测序扩增引物和测序引物设计软件PyromarkAssayDesign设计甲基化引物,从中选择...
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