检测A型肉毒梭菌的实时荧光定量PCR核酸序列以及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测A型肉毒梭菌的实时荧光定量PCR核酸序列以及试剂盒，核酸序列包括上游引物A‑F、下游引物A‑R和探针A‑P，以本发明专利技术提供的引物和探针对A型肉毒梭菌进行检测，准确率达到100%，对其它25种肠道致病菌及常见细菌DNA进行扩增时，均未见特异性扩增曲线出现，特异性良好。根据重组质粒标准品构建的荧光定量PCR标准曲线可确定其对A型肉毒梭菌检测灵敏度为5.04×10

【技术实现步骤摘要】
检测A型肉毒梭菌的实时荧光定量PCR核酸序列以及试剂盒
本专利技术涉及肉毒梭菌的分子学检测，具体涉及一种检测A型肉毒梭菌的实时荧光定量PCR核酸序列以及试剂盒。
技术介绍
肉毒梭菌（C.botulinum）是一种革兰氏阳性、厌氧、有鞭毛、无荚膜、芽孢椭圆形的粗短杆菌。最初于1896年由比利时学者VanErmengemcong从腊肠中发现，并证实其能产生外毒素-肉毒毒素（Botulinumtoxin），引起人和动物中毒。本菌广泛存在于土壤、海洋、湖泊的沉淀物及哺乳动物、鸟类、鱼的肠道、饲料及食品中。肉毒梭菌不能在活的有机体内生长，当环境厌氧，有适当营养时，即可生长繁殖产生肉毒毒素，人畜食入含此毒素的食品、饲料时，即可发生中毒症状。根据肉毒素抗原性将肉毒梭菌分为A-G7个型，其中A、B、E、F为人中毒型别，C、D型为动物和家禽中毒型别，G型极少见。最近在婴儿肉毒病例中又发现H型。肉毒毒素是目前已知最剧烈的神经毒素，其引起的食物中毒在我国十几个省、区均有发现，病死率极高，危害食品安全。目前针对肉毒梭菌的检测方法主要有分离培养、小鼠动物实验、针对毒素的间接ELISA等免疫学方法，以及普通PC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测A型肉毒梭菌的核酸序列，所述核酸序列包括引物和探针，其特征是所述引物为检测肉毒梭菌A毒素基因的上游引物A‑F和下游引物A‑R，所述探针为检测肉毒梭菌A毒素基因的探针A‑P，上游引物A‑F、下游引物A‑R和探针A‑P核苷酸序列分别如序列SEQ ID No：1、SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示，所述探针A‑P的5'端标记报告荧光基团FAM，3'端标记淬灭荧光基团BHQ1。

【技术特征摘要】
2018.07.09 CN 20181074680101.检测A型肉毒梭菌的核酸序列，所述核酸序列包括引物和探针，其特征是所述引物为检测肉毒梭菌A毒素基因的上游引物A-F和下游引物A-R，所述探针为检测肉毒梭菌A毒素基因的探针A-P，上游引物A-F、下游引物A-R和探针A-P核苷酸序列分别如序列SEQIDNo：1、SEQIDNo：2和SEQIDNo：3所示，所述探针A-P的5'端标记报告荧光基团FAM，3'端标记淬灭荧光基团BHQ1。2.根据权利要求1所述的检测A型肉毒梭菌的核酸序列，其特征是引物扩增的目标片段长度为111bp。3.一种检测A型肉毒梭菌的试剂盒，其特征是所述试剂盒包括：（1）qPCR反应体系成份，其中包括如序列SEQIDNo：1所示的上游引物A-F、如序列SEQIDNo：2所示的下游引物A-R和如序列SEQIDNo：3所示的探针A-P，所述探针A-P的5'端标记报告荧光基团FAM，3'端标记淬灭荧光基团BHQ1；（2）阴性对照；（3）阳性对照。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征是所述qPCR反应体系成份还包括qPCRSuperMix，所述qPCRSuperMix含dNTPs、TaqDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐雪芳，黄英，叶长芸，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：北京,11