一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法技术

一种应用于化合物分析领域中的检测N‑2,3‑二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，紫外检测器；采用磷酸二氢铵缓冲溶液‑乙腈作为流动相，与现有技术相比具有专属性好，灵敏度高，分离度高，耐用性、线性等均能符合要求等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法
本专利技术涉及化合物分析领域中的一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法。
技术介绍
黄连素是我国医药宝库中的重要品种之一，在我国作为药用已有两千多年的悠久历史，是一种广谱抗生素，具有高效、低毒、价廉、无耐药性等优点。近年来，黄连素产品的药用范围越来越广，现已不仅仅是应用于治疗肠道疾病，在治疗心血管疾病、糖尿病以及在兽用等方面也有十分广泛的应用。N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐是黄连素合成反应过程的关键中间体，其含量直接影响黄连素成品的含量及收率，但是对其含量的检测方法尚未见相关文献报道。因此，研制开发一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法是亟待解决的新课题，对黄连素产品的生产和质量控制具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，该方法具有专属性好，灵敏度高，耐用性、线性等均能符合要求的特点，非常适合对黄连素关键中间体N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量进行质量控制。本专利技术的目的是这样实现的：一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，该检测方法包括如下步骤：(1)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测器：紫外检测器；流动相：采用磷酸二氢铵缓冲溶液-乙腈作为流动相；(2)制备供试品溶液；(3)制备对照品溶液：(4)测定方法：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量；所述的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐选自N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐、N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺硫酸盐中的一种或几种；所述的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐是黄连素合成反应过程的中间体，所述的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐中所含的杂质选自席夫式碱、胡椒乙胺、甲基邻位香兰醛中的一种或几种；所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱选自ODS-3C18、ShodexTMSilicaC18-120-5中的一种或几种；所述色谱柱的规格为4.6×250mm,5μm；所述紫外检测器选自Waters2489UV/ViS检测器；所述流动相中磷酸二氢铵缓冲溶液与乙腈的体积比为70:30；所述磷酸二氢铵缓冲溶液的配制方法为：称取磷酸二氢铵适量，加水溶解后定容为0.02mol/L的磷酸二氢铵水溶液，用磷酸调pH2.8后，得到调节pH后的磷酸二氢铵水溶液，再加入三乙胺；所述三乙胺的加入量为每2L的调节pH后的磷酸二氢铵水溶液加2.8ml三乙胺；所述检测器的检测波长为282nm，所述流动相的流速为0.8-1.2ml/min，所述色谱柱的柱温为25-35℃，所述供试品溶液和对照溶液的进样量为1-20μl；所述流动相的流速为1ml/min，所述色谱柱的柱温为30℃，所述供试品溶液和对照溶液的进样量为10μl；所述制备供试品溶液的方法为：取研细混匀后的所述N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐约100mg，精密称定，置100ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml置10ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；所述制备对照品溶液的方法为：取N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐对照品约25mg，精密称定，置25ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml置10ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；所述按外标法以峰面积计算含量的计算公式如下：其中：A供：供试品溶液中的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐的峰面积；W对：对照品的质量，mg；P对：对照品的纯度，％；A对：对照溶液中的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐的峰面积；W供：供试品的质量，mg。本专利技术的要点在于建立了一种黄连素中间体N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐(尤其是盐酸盐)含量检测的高效液相方法，其原理是：该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱、紫外检测器、磷酸二氢铵缓冲溶液-乙腈作为流动相，其中磷酸二氢铵缓冲溶液中含有的三乙胺可改善峰形。一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法与现有技术相比，具有该检测方法专属性好，灵敏度高，分离度高，耐用性、线性等均能符合要求等特点。附图说明图1是N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐含量检测的高效液相色谱图具体实施方式以下实施例将有助于对本专利技术的了解，但这些实施例仅为了对本专利技术加以说明，本专利技术并不限于这些内容。实施例一N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐含量的测定1.色谱条件：色谱柱：ODS-3C18(4.6×250mm,5μm)；检测器：Waters2489UV/ViS；流动相：0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲溶液-乙腈(70:30)；其中，0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲溶液的配制方法为：：称取磷酸二氢铵适量，加水溶解后定容为0.02mol/L的磷酸二氢铵水溶液，用磷酸调pH2.8后，得到调节pH后的磷酸二氢铵水溶液，再加入三乙胺；三乙胺的加入量为每2L的调节pH后的磷酸二氢铵水溶液加2.8ml三乙胺；检测波长：282nm；流动相流速：1.0ml/min；柱温：30℃。2.相关溶液及流动相的配制：2.1相关溶液的配制2.1.1供试品溶液的制备取研细混匀后的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐约100mg，精密称定，置100ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml置10ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.1.2对照溶液的制备取N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐对照品约25mg，精密称定，置25ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0ml置10ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。3.测定方法：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。4.计算公式：A供：供试品溶液中的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐的峰面积；W对：对照品的质量，mg；P对：对照品的纯度，％；A对：对照溶液中的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐的峰面积；W供：供试品的质量，mg。5.检测结果含量％＝97.4％/(1-0.28％)＝97.7％实施例二方法学的建立1.专属性试验1.1空白溶剂精密量取流动相10μl注入高效液相色谱仪，按含量测定项下方法记录色谱图，结果表明，空白溶剂在主峰位置处不出峰，对含量测定无干扰。1.2各中间体与N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐的分离：N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐上一步中间体为席夫式碱，再上一步中间体为胡椒乙胺和甲基邻位香兰醛，因此试验考察了N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐和席夫式碱、胡椒乙胺和甲基邻位香兰醛的分离，各中间体出峰时间见表2：表1：中间体出峰时间1.3酸、碱、热破坏试验酸破坏供试品溶液：精密量取N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐(批号：03056#)25mg置25ml量瓶中，加1.0mol/L盐酸溶液2.0ml，静置7h后，加1.0mol/L氢氧化钠溶液2.0ml中和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测N‑2,3‑二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，其特征在于：该检测方法包括如下步骤：(1)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测器：紫外检测器；流动相：采用磷酸二氢铵缓冲溶液‑乙腈作为流动相；(2)制备供试品溶液；(3)制备对照品溶液：(4)测定方法：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

【技术特征摘要】
1.一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，其特征在于：该检测方法包括如下步骤：(1)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测器：紫外检测器；流动相：采用磷酸二氢铵缓冲溶液-乙腈作为流动相；(2)制备供试品溶液；(3)制备对照品溶液：(4)测定方法：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。2.根据权利要求1所述的一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，其特征在于：所述的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐选自N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺盐酸盐、N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺硫酸盐中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，其特征在于：所述的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐是黄连素合成反应过程的中间体，所述的N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐中所含的杂质选自席夫式碱、胡椒乙胺、甲基邻位香兰醛中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱选自ODS-3C18、ShodexTMSilicaC18-120-5中的一种或几种；所述色谱柱的规格为4.6×250mm,5μm；所述紫外检测器选自Waters2489UV/ViS检测器。5.根据权利要求1所述的一种检测N-2,3-二甲氧苄基胡椒乙胺及其盐含量的高效液相方法，其特征在于：所述流动相中磷酸二氢铵缓冲溶液与乙腈的体积比为70:30；所述磷酸二氢铵缓冲溶液的配制方法为：称取磷酸二氢铵适量，加水溶解后定容为0.02mol/L的磷酸二氢铵水溶液，用磷酸调pH2.8后，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海宏，闫妍，于泳，李嘉，陈岩，张芳，朱晓琼，王凡，
申请(专利权)人：东北制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21