基于重组减毒绵羊李斯特菌的间皮素高表达癌症治疗性疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种基于重组减毒绵羊李斯特菌的间皮素高表达癌症治疗性疫苗。本发明专利技术以减毒绵羊李斯特菌(Listeria ivanovii，简称Li)为载体，利用李斯特菌独特的能在宿主吞噬细胞胞内生长，是天然的T细胞免疫活化佐剂的特性，有效提高在肿瘤微环境中的特异性免疫应答，打破机体的免疫耐受，从而清除机体持续性病毒感染，达到清除病灶，遏制肿瘤发展的良好治疗效果。其优势在于弥补了核酸类及蛋白质多肽类疫苗免疫原性较低的缺点，减毒的李斯特菌保留了原始菌株能在胞内生长，完成抗原递呈的特性的同时又具有更高的安全性。

【技术实现步骤摘要】
基于重组减毒绵羊李斯特菌的间皮素高表达癌症治疗性疫苗
本专利技术属于生物
，涉及一种基于重组减毒绵羊李斯特菌的间皮素高表达癌症治疗性疫苗。
技术介绍
研究发现间皮素是一种细胞表面糖蛋白，其表达通常局限于间皮(腹膜，心包，和胸膜)，同时发现在间皮瘤、胰腺癌、肺癌、卵巢癌中，间皮素蛋白显著高表达。(MesothelinANewTargetforImmunotherapy，RaffitHassan，TapanBera，andIraPastandoi:10.1158/1078-0432.CCR-03-0801ClinCancerResJune15,200410；3937)这种特征使得间皮素成为运用重组李斯特菌治疗肿瘤的工具抗原。间皮瘤是一种主要出现在胸腔或腹腔内壁上的肿瘤，与工作环境中接触石棉纤维有关。在美国每年被诊断的患者是2500～3000个。目前手术和放疗效果都不理想，化疗效果较好。胰腺癌是出现在胰脏且非常致命的癌症，患者5年内的存活率小于5％，根据世界卫生组织2014年数据，2012年胰腺癌在全球造成33万人死亡，是癌症患者的7种最常见的致死因素。且胰腺癌初期没有明显症状，发现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于重组减毒绵羊李斯特菌的间皮素高表达癌症治疗性疫苗，其特征在于，其有效成分为携带间皮素基因的重组减毒绵羊李斯特菌。

【技术特征摘要】
1.基于重组减毒绵羊李斯特菌的间皮素高表达癌症治疗性疫苗，其特征在于，其有效成分为携带间皮素基因的重组减毒绵羊李斯特菌。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述减毒绵羊李斯特菌为绵羊李斯特菌完整敲除actA和plcB这两个毒力基因而得。3.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述重组减毒绵羊李斯特菌的制备方法，是以减毒绵羊李斯特菌为载体，携带间皮素基因而得。4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，具体步骤如下：(1)合成间皮素基因片段；(2)构建打靶质粒；(3)制备感受态细胞LiΔactAplcB-lacZ；(4)利用步骤(2)制备的打靶质粒对步骤(3)制备的感受态细胞进行电转化；(5)LiΔactAplcB-lacZ与打靶质粒同源重组杂交培养、筛选验证。5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于，步骤(1)的具体方法是：从NCBI上查询间皮素蛋白氨基酸序列，然后根据李斯特菌密码子进行相应优化得到优化后的序列，再在其上游加入HindⅢ酶切位点，下游加入XhoⅠ酶切位点，将上述设计好的序列最后通过合成直接获得，如SEQIDNO.1所示。6.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于，步骤(2)的具体方法是：用限制性内切酶HindⅢ和XhoⅠ双酶切步骤(1)获得的间皮素基因片段，同时用相同的限制性内切酶酶切质粒pCW203，经连接、转化等技术将间皮素基因片段插入pCW203Hi...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈海浅，
申请(专利权)人：南京颂悦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32