双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法及其HPLC特征图谱技术

本发明专利技术涉及中成药的质量检测技术领域，具体涉及一种复方中成药双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法及其HPLC特征图谱，以及该HPLC特征图谱在双花草珊瑚含片药品质量标准与质量控制中的应用。本发明专利技术基于高效液相色谱技术建立得到的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱，可用于双花草珊瑚含片的药品质量标准与质量控制；该标准对照特征图谱具有13个共有特征峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.279，峰2：0.351，峰3：0.557，峰S：1.000，峰5：1.129，峰6：1.425，峰7：2.556，峰8：2.742，峰9：2.909，峰10：3.017，峰11：3.172，峰12：3.509,峰13：3.667。通过标准对照特征图谱中共有峰的有无，可全面地对双花草珊瑚含片进行质量控制与评价，保证药品的质量稳定均一与安全有效。

【技术实现步骤摘要】
双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法及其HPLC特征图谱
本专利技术涉及中成药的质量检测
，具体涉及一种复方中成药双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法及其HPLC特征图谱，以及该HPLC特征图谱在双花草珊瑚含片药品质量标准与质量控制中的应用。
技术介绍
双花草珊瑚含片是一种复方中成药，由肿节风、金银花、薄荷脑组成，具有疏风解热，利咽止痛的功效，用于改善咽喉干灼，疼痛，声音嘶哑等症。药品收载于国家食品药品监督管理局《国家药品标准》WS-5402(B-0402)-2012Z，药品标准中仅有3个化学成分的定性鉴别和1个含量测定。由于中成药成分复杂，单一的指标难以全面控制产品的质量，中成药是一个多组分、多靶点的体系，强调的是整体性，因此建立全面反映主要成分的特征图谱，能够较全面的反映出中成药的内在质量，从整体性综合控制与评价中成药。中药特征图谱是中成药中所共有的具有特征性的某一类成分的色谱或光谱图谱，具有整体性、模糊性和可量化性，作为一种有效的质量控制模式，其专属性与特征性强，目前已成为中成药质量控制与评价的有效方法，得到行业的认可。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法及其HPLC特征图谱，以及该HPLC特征图谱在双花草珊瑚含片药品质量标准与质量控制中的应用，该方法采用高效液相色谱(HPLC)建立其特征图谱，并用相似度软件进行评价，可全面地对双花草珊瑚含片的质量进行评价，保证药品质量的均一性、稳定性及临床用药的有效性与安全性。其具体的技术方案如下：一种双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法，该方法包括以下所述的步骤和条件：（1）以绿原酸为特征图谱参照物，以绿原酸色谱峰为参照物峰；（2）供试品溶液的制备：取双花草珊瑚含片，研细，取4.0g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50%的甲醇25mL，称定重量，在超声功率为250W、超声波频率为40KHz的条件下进行超声处理30分钟，取出，称定重量，用体积浓度为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；（3）参照物溶液与对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，加体积浓度为50%的甲醇制成每1ml含绿原酸0.03～0.05mg的溶液，即得参照物溶液；取异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加体积浓度为50%的甲醇制成每1ml含异嗪皮啶0.01～0.03mg的溶液，即得对照品溶液；（4）高效液相色谱分析色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基键合硅胶为填充剂；色谱柱的规格是5μm，4.6mm×250mm；以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.2%的磷酸溶液为流动相B，采用以下梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：从0～10mim，流动相A的体积百分含量为10％，流动相B的体积百分含量为90％；从10～30mim，流动相A的体积百分含量由10％提高至20％，流动相B的体积百分含量由90％降低至80％；从30～50mim，流动相A的体积百分含量为20％，流动相B的体积百分含量为80％；从50～60mim，流动相A的体积百分含量由20％降低至10％，流动相B的体积百分含量由80％提高至90％；检测波长为335nm；柱温为25℃；流速为1mL/分钟，理论板数按绿原酸峰计算不低于7000；（5）测定：分别精密吸取参照物溶液、对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录50分钟色谱图，测定10批双花草珊瑚含片供试品的特征图谱，得到由其共有特征峰构成的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱。上述的双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法，该方法还包括以下步骤：（6）精密度试验：取同一批双花草珊瑚含片供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，检测特征图谱，记录各共有峰保留时间及峰面积，以绿原酸色谱峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积，各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD值均小于3.0%，用相似度评价软件计算各色谱峰特征图谱的相似度均大于0.99，仪器稳定，精密度良好；（7）稳定性试验：取同一批双花草珊瑚含片供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h进样，检测特征图谱，记录各共有峰保留时间及峰面积，以绿原酸色谱峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积，各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD值均小于3.0%，用相似度评价软件计算各色谱峰特征图谱的相似度均大于0.99，供试品溶液在24小时内稳定；（8）重复性试验：取同一批双花草珊瑚含片，分别取6份，按供试品溶液的制备方法和上述色谱条件，分别检测特征图谱，记录各共有峰保留时间及峰面积，以绿原酸色谱峰的保留时间和峰面积为参照，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积，各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD值均小于3.0%，用相似度评价软件计算各色谱峰特征图谱的相似度均大于0.99，所述的双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法重复性良好。本专利技术的另一目的是提供上述双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法构建得到的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱，所述的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱是由13个共有峰构成，以对照品对照，4号峰为绿原酸、7号峰为异嗪皮啶，以绿原酸为参照物，4号峰（S）为参照峰，该标准对照特征图谱具有13个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内，规定值为峰1：0.279，峰2：0.351，峰3：0.557，峰S：1.000，峰5：1.129，峰6：1.425，峰7：2.556，峰8：2.742，峰9：2.909，峰10：3.017，峰11：3.172，峰12：3.509,峰13：3.667。上述的双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法，构建得到的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱在双花草珊瑚含片药品质量标准与质量控制中的应用；采用该构建得到的HPLC标准对照特征图谱对双花草珊瑚含片进行检测，按照上述的双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法中所述的步骤和条件，分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱，测定，记录50分钟色谱图，供试品特征图谱中应呈现13个特征峰，以参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱规定值的±5%之内。本专利技术具有如下优点和用途：本专利技术通过高效液相色谱(HPLC)建立双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱，并通过试验确定标准对照特征图谱的精密度、重现性及稳定性；通过检测双花草珊瑚含片的HPLC特征图谱，可较全面地对中成药双花草珊瑚含片的内在质量进行控制与评价，保证药品质量的稳定性与一致性，以及临床用药的有效性与安全性。本专利技术建立得到的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱，可用于双花草珊瑚含片的药品质量标准与质量控制。下面结合附图与具体实施方式，对本专利技术进一步详细说明。附图说明图1是双花草珊瑚含片的HPLC-DAD三维图；图2是双花草珊瑚含片220nm特征图谱；图3是双花草珊瑚含片254nm特征图谱；图4是双花草珊瑚含片335本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，该方法包括以下所述的步骤和条件：（1）以绿原酸为特征图谱参照物，以绿原酸色谱峰为参照物峰；（2）供试品溶液的制备：取双花草珊瑚含片，研细，取4.0g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50%的甲醇25mL，称定重量，在超声功率为250W、超声波频率为40KHz的条件下进行超声处理30分钟，取出，称定重量，用体积浓度为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；（3）参照物溶液与对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，加体积浓度为50%的甲醇制成每1ml含绿原酸0.03～0.05mg的溶液，即得参照物溶液；取异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加体积浓度为50%的甲醇制成每1ml含异嗪皮啶0.01～0.03mg的溶液，即得对照品溶液；（4）高效液相色谱分析色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.2%的磷酸溶液为流动相B，采用以下梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：从0～10mim，流动相A 的体积百分含量为10％，流动相B 的体积百分含量为90％；从10～30mim，流动相A 的体积百分含量由10％提高至20％，流动相B 的体积百分含量由90％降低至80％；从30～50mim，流动相A 的体积百分含量为20％，流动相B 的体积百分含量为80％；从50～60mim，流动相A 的体积百分含量由20％降低至10％，流动相B 的体积百分含量由80％提高至90％；检测波长为335nm；柱温为25℃；流速为1 mL/分钟，理论板数按绿原酸峰计算不低于7000；（5）测定：分别精密吸取参照物溶液、对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录50分钟色谱图，测定10批双花草珊瑚含片供试品的特征图谱，得到由其共有特征峰构成的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱。...

【技术特征摘要】
1.一种双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，该方法包括以下所述的步骤和条件：（1）以绿原酸为特征图谱参照物，以绿原酸色谱峰为参照物峰；（2）供试品溶液的制备：取双花草珊瑚含片，研细，取4.0g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50%的甲醇25mL，称定重量，在超声功率为250W、超声波频率为40KHz的条件下进行超声处理30分钟，取出，称定重量，用体积浓度为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；（3）参照物溶液与对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，加体积浓度为50%的甲醇制成每1ml含绿原酸0.03～0.05mg的溶液，即得参照物溶液；取异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加体积浓度为50%的甲醇制成每1ml含异嗪皮啶0.01～0.03mg的溶液，即得对照品溶液；（4）高效液相色谱分析色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.2%的磷酸溶液为流动相B，采用以下梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：从0～10mim，流动相A的体积百分含量为10％，流动相B的体积百分含量为90％；从10～30mim，流动相A的体积百分含量由10％提高至20％，流动相B的体积百分含量由90％降低至80％；从30～50mim，流动相A的体积百分含量为20％，流动相B的体积百分含量为80％；从50～60mim，流动相A的体积百分含量由20％降低至10％，流动相B的体积百分含量由80％提高至90％；检测波长为335nm；柱温为25℃；流速为1mL/分钟，理论板数按绿原酸峰计算不低于7000；（5）测定：分别精密吸取参照物溶液、对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录50分钟色谱图，测定10批双花草珊瑚含片供试品的特征图谱，得到由其共有特征峰构成的双花草珊瑚含片的HPLC标准对照特征图谱。2.权利要求1所述的双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤（4）高效液相色谱分析测试中，所述的以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱的规格是5μm，4.6mm×250mm。3.权利要求1所述的双花草珊瑚含片HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，该方法还包括以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：阙锋，
申请(专利权)人：广西昌弘制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45