一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，包括如下步骤：S1、样品前处理：通过皮肤角质细胞贴片进行采样后，将贴片进行前处理，得到滤液；S2、将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定样本中的天然保湿因子的含量；S3、绘制标准曲线，计算样品中天然保湿因子的含量。所述高效液相色谱法的流动相为：体积比为95:5的20mmol/L磷酸氢二钾溶液和乙腈，等度洗脱。与现有技术相比，本发明专利技术测定方法结果准确可靠、精密度高且重现性好。

【技术实现步骤摘要】
一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法
本专利技术涉及多种化学物质的检测
，具体涉及一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法。
技术介绍
吡咯烷酮羧酸(pyrrolidonecarboxylicacid，PCA)是皮肤角质层中的天然保湿因子之一，是皮肤自身内源性生水功能的重要参与者，能够增加皮肤持水率，保持皮肤弹性和水润度，是肌肤供水之源。尿刊酸(urocanicacid，UCA)是组氨酸的代谢产物，尿刊酸含量的降低与皮肤干燥、色斑沉积、皮肤表面的pH值有直接关系，天然尿刊酸以t-UCA形式存在于皮肤角质层中，经紫外线照射转变为c-UCA。检测皮肤角质层中的天然保湿因子，可以有效地帮助消费者了解自己的皮肤健康状态，并为化妆品企业开发更有针对性的产品提供科学检测数据支持。其中，c-UCA对于皮肤角质层pH值维持弱酸性的微环境也有一定作用。然而目前，国内外对皮肤角质层中的PCA和UCA的检测方法未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种能够快速、准确测定皮肤角质层中天然保湿因子的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，包括如下步骤：S1、样品前处理：通过皮肤角质细胞贴片进行采样后，将贴片进行前处理，得到滤液；S2、将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定样本中的天然保湿因子的含量；S3、绘制标准曲线，计算样品中天然保湿因子的含量。进一步地，所述高效液相色谱法的流动相条件为：体积比为95:5的20mmol/L磷酸氢二钾溶液和乙腈，等度洗脱。进一步地，所述天然保湿因子为吡咯烷酮羧酸、顺式尿刊酸和反式尿刊酸中一种或多种。优选地，所述天然保湿因子为吡咯烷酮羧酸时，所述步骤S2中的高效液相色谱条件为：色谱柱：XTerra-C18柱，(4.6mm×250mm，5μm)；流速：0.8mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；进样量：10μL。优选地，所述天然保湿因子为顺式尿刊酸和反式尿刊酸中的一种或两种时，所述步骤S2中的高效液相色谱条件为：色谱柱：XTerra-C18柱，(4.6mm×250mm，5μm)；流速：0.8mL/min；检测波长：265nm；柱温：25℃；进样量：10μL。进一步地，所述20mmol/L磷酸氢二钾溶液含有5mmol/L的庚烷磺酸钠。进一步地，所述20mmol/L磷酸氢二钾溶液pH值为3～7，优选为3.7。进一步地，所述步骤S1中贴片前处理方法为：将贴片剪碎，置于5mL比色管中，加入甲醇溶液(所述甲醇溶液优选为甲醇体积含量为10％的甲醇水溶液)至刻度，超声震荡提取30min以上，将上清液浓缩(优选浓缩方式为转移置于氮吹管中通过氮吹进行浓缩)至1mL以下，优选为0.5mL，加入水至体积为1mL，经过滤膜得到滤液，所述滤膜优选为0.45μm或0.22μm。本专利技术的有益效果在于：与现有技术相比，本专利技术所述的皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法采用高效液相色谱法测定皮肤角质层中的天然保湿因子，方法准确、快速、灵敏度高，本专利技术方案中的检测限、加标回收率和精密度均符合要求，对于监测皮肤角质层中天然保湿因子的含量，评估皮肤状况有重要意义。通过本专利技术方案实现对皮肤角质层中天然保湿因子的测定，可以帮助消费者了解自己的皮肤健康状态，并为化妆品企业开发更有针对性的产品提供科学检测数据支持。附图说明图1为本专利技术实施例的流动相优化实验中磷酸氢二钾溶液-甲醇体积比为70:30时的色谱图；图2为本专利技术实施例的流动相优化实验中磷酸氢二钾溶液-甲醇体积比为95:5时的色谱图；图3为本专利技术实施例的流动相优化实验中磷酸氢二钾溶液-乙腈体积比为95:5时的色谱图；图4为本专利技术实施例的流动相优化实验中流动相未加入庚烷磺酸钠时的色谱图；图5为本专利技术实施例的流动相优化实验中流动相加入庚烷磺酸钠时的色谱图；图6为本专利技术实施例中吡咯烷酮羧酸标准品色谱图；图7为本专利技术实施例中皮肤角质层样品中吡咯烷酮羧酸色谱图；图8为本专利技术实施例中顺式尿刊酸标准品色谱图；图9为本专利技术实施例中反式尿刊酸标准品色谱图；图10为本专利技术实施例中皮肤角质层样品中顺式尿刊酸和反式尿刊酸的样品加标色谱图；图11为本专利技术实施例的PCA、t-UCA和c-UCA的标准工作曲线图。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。本专利技术实施例为：一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，包括如下步骤：S1、样品前处理：通过皮肤角质细胞贴片进行采样后，将贴片进行前处理，得到滤液；S2、将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定样本中的天然保湿因子(包括吡咯烷酮羧酸、顺式尿刊酸及反式尿刊酸)的含量；S3、绘制吡咯烷酮羧酸、顺式尿刊酸及反式尿刊酸的标准曲线，计算样品中天然保湿因子的含量。试验过程中，所用试剂和材料情况如下：甲醇：色谱纯。乙腈：色谱纯。庚烷磺酸钠：离子对试剂。磷酸氢二钾：分析纯。磷酸：分析纯。吡咯烷酮羧酸:标准品。CAS号：98-79-3顺式尿刊酸：标准品。CAS号：7699-35-6反式尿刊酸：标准品。CAS号：3465-72-3使用的仪器设备及其参数信息如下：高效液相色谱仪：Agilent1260，安捷伦科技有限公司。分析天平：ESJ182-4，天津津梁仪器设备有限公司。超声波清洗器：BG-12C，深圳市和科达超声设备有限公司。氮吹仪：N-EVAP-24，南京铭奥仪器设备有限公司。pH仪：雷磁PHS-3C，上海荣宣仪器有限公司。微孔滤膜：0.45μm有机系滤膜，天津市津腾实验设备有限公司。皮肤角质细胞贴片：2cm×2cm，美国3M公司。一、样品信息：1、标准曲线的绘制吡咯烷酮羧酸和顺式尿刊酸、反式尿刊酸混标工作液按测定条件依次由高到低进样测定，以峰面积-浓度作图，得到标准回归方程，绘制标准工作曲线。2、测定对处理好的待测样品进行测定，用外标法定量。待测样液中吡咯烷酮羧酸和顺、反式尿刊酸含量应在标准曲线之内，超出线性范围则应稀释或者浓缩后再进行分析。3、空白试验除不称取样品外，按上述测定条件和步骤进行。结果计算式中：W为对目标物含量，mg/kg；C0为标准曲线上查出的试样溶液中目标物质的浓度，mg/L；V为样品最终定容体积，mL；m为样品质量，g。二、检测条件筛选与分析1、检测波长的选择测定吡咯烷酮羧酸和顺、反式尿刊酸的最大吸收波长，扫描范围为200～400nm。经测定，吡咯烷酮羧酸在205nm左右处有最大吸收波长，顺、反式尿刊酸在265nm左右处有最大吸收波长。因此，同时测定吡咯烷酮羧酸和顺、反式尿刊酸需要设定2个检测波长。2、流动相优化首先筛选流动相比例，采用不同体积比的甲醇-磷酸氢二钾溶液作为流动相，考察磷酸氢二钾溶液-甲醇＝70:30(如图1所示)、磷酸氢二钾溶液-甲醇＝90:10、磷酸氢二钾溶液-甲醇＝95:5(如图2所示)、磷酸氢二钾溶液-甲醇＝98:2，比较流动相不同体积比对吡咯烷酮羧酸色谱图的影响。结果表明，甲醇体积比过高时，样品峰和溶剂峰分离不开，甲醇体积比过低时，对色谱柱伤害较大，因此选择磷酸氢二钾溶液-甲醇＝95:5(V:V)作为流动相参考比例。考察甲醇和乙腈(磷酸氢二钾溶液-乙腈＝95:5，色谱图如图3所示)作为流动相中有机相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、样品前处理：通过皮肤角质细胞贴片进行采样后，将贴片进行前处理，得到滤液；S2、将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定样本中的天然保湿因子的含量；S3、绘制标准曲线，计算样品中天然保湿因子的含量。

【技术特征摘要】
1.一种皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、样品前处理：通过皮肤角质细胞贴片进行采样后，将贴片进行前处理，得到滤液；S2、将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定样本中的天然保湿因子的含量；S3、绘制标准曲线，计算样品中天然保湿因子的含量。2.根据权利要求1所述的皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，其特征在于：所述高效液相色谱法的流动相条件为：体积比为95:5的20mmol/L磷酸氢二钾溶液和乙腈，等度洗脱。3.根据权利要求2所述的皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，其特征在于：所述天然保湿因子为吡咯烷酮羧酸、顺式尿刊酸和反式尿刊酸中一种或多种。4.根据权利要求3所述的皮肤角质层中天然保湿因子的测定方法，其特征在于：所述天然保湿因子为吡咯烷酮羧酸时，所述步骤S2中的高效液相色谱条件为：色谱柱：XTerra-C18柱，4.6mm×250mm，5μm；流速：0.8mL/min；检测波长：205nm；柱温：25℃；进样量：10μL；所述天然保湿因子为顺式尿刊酸和反式尿刊酸中的一种或两种时，所述步骤S2中的高效液相色谱条件与吡咯烷酮羧酸的高效液...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛善巧，粟雨桑，何海鸥，周立武，
申请(专利权)人：珠海伊斯佳科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44