一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法技术

本发明专利技术公开植株组织无机磷含量的高通量测定方法。包括如下步骤：1）将离心管装入钢珠，进行预冷；2）用打孔器进行组织取样，打取的样品放入离心管中；3）将装有样品的离心管中加入硫酸，然后装有样品的离心管中加入蒸馏水，将盖子扣上，运用磨样器研磨，取下放于冰上；抠开盖子，离心管中加入蒸馏水，扣上盖子，上下颠倒几次；4）离心，将离心管放入离心机转子孔内；5）将离心管拿出放于操作版上；另取离心管，吸取上清液放于其中；6）取样品试验稀释倍数，按反应液和显色剂孔雀绿混合进行显色反应；7）反应结束后吸取反应液开始测定。本发明专利技术样品测定快速，降低样品离体的时间，保证测定时间的一致，使数据的可靠性和重复性得到保证。

A High-throughput Method for Determining Inorganic Phosphorus Content in Plant Tissues

The invention discloses a high flux method for determining inorganic phosphorus content in plant tissues. It includes the following steps: 1) the centrifugal tube is loaded into the steel beads for pre-cooling; 2) the tissue sample is taken by a perforator and the sample is put into the centrifugal tube; 3) the centrifugal tube containing the sample is added with sulfuric acid, then the centrifugal tube containing the sample is added with distilled water, the cover is buckled, the sample is ground by a grinder and placed in the ice. First, cut off the lid, add distilled water to the centrifugal tube, buckle the lid and turn it upside down several times; fourth, centrifuge, put the centrifugal tube into the rotor hole of the centrifuge; fifth, take out the centrifugal tube and put the supernatant in the operating plate; sixth, take the sample test dilution times, according to the reaction liquid and the developer peacock. The green mixture was used for colour reaction; 7) After the reaction, the reaction solution was absorbed and determined. The sample determination method of the invention is fast, reduces the time of sample separation, ensures the consistency of the determination time, and ensures the reliability and repeatability of the data.

【技术实现步骤摘要】
一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法
本专利技术涉及一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法，属于元素检测

技术介绍
常规的无机磷测定方法多是运用钼蓝或者孔雀绿比色法进行测定，此类方法最终一是通过流动分析仪测定样品无机磷的含量，二是通过分光光度计测定可见光波长下的吸收值。此类方法在样品制备以及样品的测定过程中存在着问题。一是取样的速度慢，时间长，易造成样品无机磷的损失，使测定不准确；二是样品前处理和测定操作步骤不方便，不适合大量样品的测定且耗费人力；三是测定时间较长，造成显色时间的不一致，从而对数据的重复性造成影响。综上所述，常规经典的无机磷测定流程不仅操作繁琐，无法做到显色的一致和测定的一致，而且测定样品的速度慢和单位时间测定样品的数量少。因此，当需要进行大批量测定植物组织无机磷时，传统方法面临耗时长，人力和经济成本高等问题。
技术实现思路
为了克服现行无机磷测定方法中操作流程繁琐，难以做到显色的一致和测定的一致，测定样品的速度过慢和单位时间内测定样品的数量少的问题，本专利技术提供一种对植物组织无机磷实现高通量快速测定的流程。本专利技术所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法，它包括如下步骤：1）前期准备：取灭菌的离心管和钢珠，将每个离心管装入钢珠，并进行预冷；2）采集：运用打孔器进行植物组织取样，在同一组织部位打取，将打取的样品放入提前准备的离心管中；3）磨样：将每个装有样品的离心管中加入硫酸，然后每个装有样品的离心管中再加入蒸馏水，将离心管的盖子扣上，运用磨样器研磨至匀浆状，取下放于冰上；抠开离心管的盖子，每个离心管中再加入蒸馏水，扣上盖子，上下颠倒几次；4）离心：运用低温离心机进行离心，用前需要提前开机降温，将离心管放入离心机转子的孔内；5）取上清：离心结束后，轻轻的将离心管拿出放于操作版上；另取离心管，吸取上清液放于其中；6）反应：取样品试验稀释倍数，按反应液和显色剂孔雀绿混合进行显色反应30min，将样品全部进行稀释，加孔雀绿，进行反应；7）测定：反应结束后吸取反应液开始测定。所述1）步骤中，放在冰上进行预冷。所述3）步骤中，磨样器运用24孔的磨样器，采用50HZ的频率，研磨35-50s至匀浆状。所述4）步骤中，运用低温离心机进行离心；用前需要提前开机降温至2-8°C左右，将离心管按重量平衡的原则放入离心机转子的孔内；转速设定为：10000-15000rpm，时间设定为：8-15min。所述6）步骤中，取样品试验稀释倍数，按反应液和显色剂孔雀绿体积比2-4：1进行显色反应25-35min。所述7）步骤中，反应结束后吸取200ul于96孔的酶标板中，将样品放于酶标板内，打开电脑和酶标仪，点开软件进行联机，出仓，将酶标板放到载物板上，进仓，选择酶标板的规格：[COS96ft]Costar96FlatTransparent、波长：650nm，点击“plateout”,将酶标板放进弹出的酶标板架上，点击“platein”使酶标板进入仪器，选定测定区域，点击“start”，开始测定。本专利技术的有益效果是：1.运用标准打孔器进行植物组织取样，省去取样后称量的时间；2.利用磨样机对样品进行快速的研磨，节约样品前处理时间和损耗；3.最后通过96板酶标仪进行比色测定，每板含96个样品，仅需30s左右就可以完成测定。通过以上改良，本方法能真正实现植物组织无机磷高通量快速的测定。总之，本专利利用取样器和酶标仪，克服现行无机磷测定方法中操作流程繁琐，测定样品的速度慢和测定样品的数量少的问题。将目标样品用取样器快速取样后，中间运用磨样机和低温离心机，即可用酶标仪进行高通量快速的测定。取样方便、快速，中间步骤简化，样品测定快速。降低样品离体的时间，保证测定时间的一致，使数据的可靠性和重复性得到保证。附图说明图1为本专利技术实施流程图。图2为本专利技术取样图。图3为本专利技术空白图。图4为本专利技术标准曲线图。具体实施方式为使本专利技术的技术手段、创新特征和达成目的易于了解，下面结合具体图例，进一步阐述本专利。如图1所示，一种植株组织无机磷含量的高通量测定的技术流程，它包括如下步骤：1）前期准备：取灭菌的2ml离心管和钢珠，将每个离心管装入2枚统一的钢珠。放于冰上预冷。2）采集：运用标准打孔器进行植物组织取样。在同一组织部位打取3下（约30mg），将打取得样品放入提前准备的离心管中。3）磨样：将每个装有样品的离心管中加入25ul的5M的硫酸。然后，每个装有样品的离心管中再加入1ml的蒸馏水，将离心管的盖子扣上。运用24孔的磨样器，采用50HZ的频率，研磨40s至匀浆状。取下放于冰上。抠开离心管的盖子，每个离心管中再加入500ul的蒸馏水，扣上盖子，上下颠倒几次。4）离心：运用低温离心机进行离心。用前需要提前开机降温至4°C左右。离心机选用的转子类型为：1.5/2ml×24。将离心管按重量平衡的原则放入离心机转子的孔内。转速设定为：12000rpm。时间设定为：10min。关盖，设定参数，启动。5）取上清：离心结束后，轻轻的将离心管拿出放于操作版上。另取相同数量的1.5ml的离心管，吸取1ml的上清液放于其中。6）反应：取样品试验稀释倍数。反应体系为600ul，按反应液和显色剂孔雀绿体积比3：1进行显色反应30min。确定稀释倍数后，将样品全部进行稀释，加孔雀绿，反应30min。7）测定：反应结束后吸取200ul于96孔的酶标板中。将样品放于酶标板内，打开电脑和酶标仪，点开软件进行联机，出仓，将酶标板放到载物板上，进仓，选择酶标板的规格：[COS96ft]Costar96FlatTransparent、波长：650nm，点击“plateout”,将酶标板放进弹出的酶标板架上，点击“platein”使酶标板进入仪器，选定测定区域，点击“start”，开始测定。上述无机磷的高通量快速测定，所述取样器包括上把手、下把手、顶针、采样孔、拨回片、集样室。按下上、下把手，顶针被压至采样孔，样品被分离至集样室，在拨回片的反弹下，顶针复原，完成一次采样过程。上述的无机磷的高通量快速测定，所述磨样机包括控制界面、摆轴、载样器、压盖、外盖和启动按钮。将样品放至载样器的孔中，放上压盖，用螺丝固定，合上外盖，通过控制界面进行参数的设置，启动按钮开始磨样工作。上述的无机磷的高通量快速测定，所述低温离心机包括控制界面、转轴、盛样器、里盖、外盖和启动按钮。将样品放置于盛样器的孔中，拧紧内盖，压下外盖，通过控制界面进行参数的设置，启动按钮开始离心工作。上述的无机磷的高通量快速测定，所述酶标仪包括主机、电脑、程序软件、酶标板。程序软件的参数包括：酶标板的规格、波长、测定区域、进仓、出仓、开始和数据的显示。将样品放于酶标板内，打开电脑和酶标仪，打开软件进行联机，出仓，将酶标板放到载物板上，进仓，选择酶标板的规格、波长、测定区域，进仓，开始测定，测定结束时，弹出测定数据。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1）前期准备：取灭菌的离心管和钢珠，将每个离心管装入钢珠，并进行预冷；2）采集：运用打孔器进行植物组织取样，在同一组织部位打取，将打取的样品放入提前准备的离心管中；3）磨样：将每个装有样品的离心管中加入硫酸，然后每个装有样品的离心管中再加入蒸馏水，将离心管的盖子扣上，运用磨样器研磨至匀浆状，取下放于冰上；抠开离心管的盖子，每个离心管中再加入蒸馏水，扣上盖子，上下颠倒几次；4）离心：运用低温离心机进行离心，用前需要提前开机降温，将离心管放入离心机转子的孔内；5）取上清：离心结束后，轻轻的将离心管拿出放于操作版上；另取离心管，吸取上清液放于其中；6）反应：取样品试验稀释倍数，按反应液和显色剂孔雀绿混合进行显色反应30min，将样品全部进行稀释，加孔雀绿，进行反应；7）测定：反应结束后吸取反应液开始测定。

【技术特征摘要】
1.一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1）前期准备：取灭菌的离心管和钢珠，将每个离心管装入钢珠，并进行预冷；2）采集：运用打孔器进行植物组织取样，在同一组织部位打取，将打取的样品放入提前准备的离心管中；3）磨样：将每个装有样品的离心管中加入硫酸，然后每个装有样品的离心管中再加入蒸馏水，将离心管的盖子扣上，运用磨样器研磨至匀浆状，取下放于冰上；抠开离心管的盖子，每个离心管中再加入蒸馏水，扣上盖子，上下颠倒几次；4）离心：运用低温离心机进行离心，用前需要提前开机降温，将离心管放入离心机转子的孔内；5）取上清：离心结束后，轻轻的将离心管拿出放于操作版上；另取离心管，吸取上清液放于其中；6）反应：取样品试验稀释倍数，按反应液和显色剂孔雀绿混合进行显色反应30min，将样品全部进行稀释，加孔雀绿，进行反应；7）测定：反应结束后吸取反应液开始测定。2.根据权利要求1所述的一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法，其特征在于，所述1）步骤中，放在冰上进行预冷。3.根据权利要求1所述的一种植株组织无机磷含量的高通量测定方法，其特征在于，所述3）步骤中，磨样...

【专利技术属性】
技术研发人员：华班安，王创，刘冬，邓素仁，华晨，杨绪清，
申请(专利权)人：江苏金运农业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32