金花茶的组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了金花茶的组织培养快速繁殖方法，包括：将金花茶丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得金花茶幼苗；其中，生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，上层培养基为：3/4MS+2.5‑3.0mg/L NAA+1.0‑1.5mg/L LFS+1.4‑1.8mg/L 4‑CPA+1‑5g/L羊角碳化粉；下层培养基为：1/2MS+1.0‑1.5mg/L NAA+0.5‑1.0mg/L 2,4‑D+0.5‑0.8mg/L MET+1.0‑1.5mg/L氯化胆碱+15‑20g/L羊角碳化粉。本发明专利技术的方法可有效提高金花茶的增殖系数，为金花茶的保护提供了一种新的路径。

Tissue Culture and Rapid Propagation of Camellia chrysantha

The invention discloses a tissue culture and rapid propagation method of Camellia chrysantha, which includes: transferring cluster buds of Camellia chrysantha to a rooting and strong seedling culture medium to obtain Camellia chrysantha seedlings; the rooting and strong seedling culture medium includes upper and lower media, and the upper culture medium is 3/4MS+2.5_3.0mg/L NAA+1.0_1.5mg/L LFS+1.4. 1.8mg/L 4 CPA+1_5g/L horn carbide powder; the lower medium was 1/2MS+1.0 1.5mg/L NAA+0.5 1.0mg/L 2, 4 D+0.5 0.8mg/L MET+1.0 1.5mg/L choline chloride+15 20g/L horn carbide powder. The method of the invention can effectively improve the multiplication coefficient of Camellia chrysantha, and provides a new path for the protection of Camellia chrysantha.

【技术实现步骤摘要】
金花茶的组织培养快速繁殖方法
本专利技术涉及组织培养领域。更具体地说，本专利技术涉及一种金花茶的组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
金花茶属于山茶科、山茶属，与银杉、桫椤、珙桐等珍贵“植物活化石”齐名，属《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录Ⅱ中的植物种，国外称之为神奇的东方魔茶，被誉为“植物界大熊猫”、“茶族皇后”。金花茶可通过传统的播种、扦插和嫁接方式繁殖，但上述方法均无法快速有效的扩大金花茶的种群数量。如何快速繁殖金花茶，已成为保护金花茶亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种金花茶的组织培养快速繁殖方法，其以金花茶幼嫩的茎尖，采用组织培养方式快速获得金花茶幼苗，该方法可有效提高金花茶的增殖系数，达4.8-5.0倍，畸形苗率低至0.6％，幼苗成活率高达94.1％，幼苗平均株高92mm，有效解决了传统繁殖方式无法快速有效的扩大金花茶的种群数量的问题，为金花茶的保护提供了一种新的路径。为了实现根据本专利技术的目的和其它优点，提供了一种金花茶的组织培养快速繁殖方法，包括：步骤一、剪取金花茶幼嫩的茎尖，经处理后，得外植体；步骤二、将所述外植体经丛生芽诱导培养，得丛生芽；步骤三，将所述丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得金花茶幼苗；其中，所述生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，所述上层培养基为：3/4MS+2.5-3.0mg/LNAA+1.0-1.5mg/LLFS+1.4-1.8mg/L4-CPA+1-5g/L羊角碳化粉；所述下层培养基为：1/2MS+1.0-1.5mg/LNAA+0.5-1.0mg/L2,4-D+0.5-0.8mg/LMET+1.0-1.5mg/L氯化胆碱+15-20g/L羊角碳化粉；培养条件为：先于22-26℃，黑暗条件下培养3d，再于22-26℃，光照强度1800-2200lux，光照时间8h/d的条件下培养20d，最后于20-30℃，相对湿度为60-80％，遮光度为30-40％的自然光照条件下培养20d。优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，所述上层培养基的厚度为2-4cm，所述下层培养基的厚度为3-5cm。优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，所述羊角碳化粉的制备方法为：将羊角用水洗净、沥干，将其置于碳化炉中，先在60-80℃下保温4-6h，然后以5℃/小时的升温速率升温至120-140℃保温2-3h，再以30℃/小时的升温速率升温至620-650℃，保温0.5-1.5h后，先以40℃/小时的降温速率降温至180-200℃，再以20℃/小时的降温速率降温至100℃以下，待冷却后取出，置于球磨机中球磨至平均粒径为7-10μm，即得。优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，步骤一中，所述处理具体为：将所述茎尖用质量分数为2％的洗洁精水溶液浸泡30min，取出，用流水冲洗10-15min，然后将其置于装有预糊化淀粉和纳米二氧化钛混合溶液的软包装袋中，浸没、封口，将所述软包装袋置于超高压容器中，于80-90MPa下处理1-6s，将所述茎尖从所述软包装袋中取出，用无菌水冲洗6-8次并用消毒滤纸吸取其表面的水分。优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，所述预糊化淀粉和纳米二氧化钛混合溶液与所述茎尖的质量之比为10:1-2，所述预糊化淀粉和纳米二氧化钛混合溶液的制备方法为：向水中加入质量分数为6-8％的预糊化淀粉，搅拌，待其充分溶解后，加入质量分数为0.5-1.5‰的纳米二氧化钛，超声分散，即得。优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，所述丛生芽诱导培养具体为：将所述外植体切割成1-2mm的小段并转接到丛生芽诱导培养基中，先于22-26℃，黑暗条件下培养2d，再在培养温度22-26℃，光照强度1500-1600lux，光照时间8h/d的条件下培养15d，然后再在培养温度25-28℃，光照强度3000-3200lux，光照时间10h/d的条件下培养15d，得健壮的丛生芽，其中，所述丛生芽诱导培养基为：3/4MS+3.0-3.5mg/L6-KT+1.5-2.0mg/LZT+1.0-1.5mg/LIBA+1.0-1.5mg/LNAA+15-20g/L茶花粉提取液。优选的是，所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，所述茶花粉提取液的制备方法为：向水中加入质量分数为6-8％的茶花粉，并将其置于超声波提取器中，于功率460-500W，频率40-45kHz，温度30-35℃下提取10-15min，再离心，取上清液，即得。本专利技术至少包括以下有益效果：第一、通过将生根壮苗培养基设置为由上层培养基和下层培养基组成，可实现生根、壮苗一步完成，节约了培养步骤，上层培养基中，将低浓度的羊角碳化粉与NAA、LFS和4-CPA相配合，一方面可促进植株茎叶的生长和伸展，活化根基细胞，诱导生根，另一方面可增强植株细胞对羊角碳化粉中矿物活性成分的耐受力，下层培养基中，将高浓度的羊角碳化粉与NAA、2,4-D、MET和氯化胆碱相配合，可进一步刺激根基细胞分裂，使根系发达，为植株生长吸取营养，从而促进茎叶的生长，获得健壮的金花茶幼苗；第二、通过将金花茶的幼嫩茎尖置于装有预糊化淀粉和纳米二氧化钛混合溶液的软包装袋中，进行超高压瞬时处理，预糊化淀粉可显著降低超高压对茎尖的损伤，纳米二氧化钛和超高压结合可显著提高茎尖消毒效果，三者结合，一方面可对茎尖进行彻底的消毒，降低组织培养过程中产生畸形苗的概率，另一方面可激活茎尖中酶的活性，以利于成功诱导出丛生芽；第三、通过在丛生芽诱导培养基中添加茶花粉提取液，其富含的氨基酸、维生素、矿物质和活性酶等活性成分，将茶花粉提取液与6-KT、ZT、IBA和NAA配合，可有效促进金花茶细胞的增殖、扩大、分裂和分化，进而显著提高丛生芽的增殖效果；第四、本专利技术的金花茶的组织培养快速繁殖方法可有效提高金花茶的增殖系数，达4.8-5.0倍，畸形苗率低至0.6％，幼苗成活率高达94.1％，幼苗平均株高92mm，有效解决了传统繁殖方式无法快速有效的扩大金花茶的种群数量的问题，为金花茶的保护提供了一种新的路径。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。需要说明的是，下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1：一种金花茶的组织培养快速繁殖方法，包括：步骤一、剪取金花茶幼嫩的茎尖，将所述茎尖用质量分数为2％的洗洁精水溶液浸泡30min，取出，用流水冲洗10-15min，然后将其置于装有预糊化淀粉和纳米二氧化钛混合溶液的软包装袋中，浸没、封口，将所述软包装袋置于超高压容器中，于80MPa下处理6s，将所述茎尖从所述软包装袋中取出，用无菌水冲洗6-8次并用消毒滤纸吸取其表面的水分，得外植体；步骤二、将所述外植体切割成1-2mm的小段并转接到丛生芽诱导培养基中，先于22-26℃，黑暗条件下培养2d，再在培养温度22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8h/d的条件下培养15d，然后再在培养温度25-28℃，光照强度3000lux，光照时间10h本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.金花茶的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括：步骤一、剪取金花茶幼嫩的茎尖，经处理后，得外植体；步骤二、将所述外植体经丛生芽诱导培养，得丛生芽；步骤三，将所述丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得金花茶幼苗；其中，所述生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，所述上层培养基为：3/4MS+2.5‑3.0mg/L NAA+1.0‑1.5mg/L LFS+1.4‑1.8mg/L 4‑CPA+1‑5g/L羊角碳化粉；所述下层培养基为：1/2MS+1.0‑1.5mg/L NAA+0.5‑1.0mg/L 2,4‑D+0.5‑0.8mg/L MET+1.0‑1.5mg/L氯化胆碱+15‑20g/L羊角碳化粉；培养条件为：先于22‑26℃，黑暗条件下培养3d，再于22‑26℃，光照强度1800‑2200lux，光照时间8h/d的条件下培养20d，最后于20‑30℃，相对湿度为60‑80％，遮光度为30‑40％的自然光照条件下培养20d。

【技术特征摘要】
1.金花茶的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括：步骤一、剪取金花茶幼嫩的茎尖，经处理后，得外植体；步骤二、将所述外植体经丛生芽诱导培养，得丛生芽；步骤三，将所述丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得金花茶幼苗；其中，所述生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，所述上层培养基为：3/4MS+2.5-3.0mg/LNAA+1.0-1.5mg/LLFS+1.4-1.8mg/L4-CPA+1-5g/L羊角碳化粉；所述下层培养基为：1/2MS+1.0-1.5mg/LNAA+0.5-1.0mg/L2,4-D+0.5-0.8mg/LMET+1.0-1.5mg/L氯化胆碱+15-20g/L羊角碳化粉；培养条件为：先于22-26℃，黑暗条件下培养3d，再于22-26℃，光照强度1800-2200lux，光照时间8h/d的条件下培养20d，最后于20-30℃，相对湿度为60-80％，遮光度为30-40％的自然光照条件下培养20d。2.如权利要求1所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述上层培养基的厚度为2-4cm，所述下层培养基的厚度为3-5cm。3.如权利要求1所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述羊角碳化粉的制备方法为：将羊角用水洗净、沥干，将其置于碳化炉中，先在60-80℃下保温4-6h，然后以5℃/小时的升温速率升温至120-140℃保温2-3h，再以30℃/小时的升温速率升温至620-650℃，保温0.5-1.5h后，先以40℃/小时的降温速率降温至180-200℃，再以20℃/小时的降温速率降温至100℃以下，待冷却后取出，置于球磨机中球磨至平均粒径为7-10μm，即得。4.如权利要求1所述的金花茶的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤一中，所述处...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕诗林，
申请(专利权)人：吕诗林，
类型：发明
国别省市：广西,45