一种L-酪氨酸的高效液相检测方法技术

本发明专利技术涉及一种L‑酪氨酸的高效液相检测方法，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；以磷酸盐缓冲液与甲醇的混合溶液作为流动相，且磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为6∶3.5～4.5；检测波长为220～230nm；柱温为25～35℃；流动相流速：0.7～1.0mL/min。本发明专利技术方法可快速、准确地测定出L‑酪氨酸的含量，能够减小误差，确保其质量可控，并且操作简单、检测成本低、检测时间短、检测效率高。

【技术实现步骤摘要】
一种L-酪氨酸的高效液相检测方法
本专利技术属于色谱柱
，尤其涉及一种L-酪氨酸的高效液相检测方法。
技术介绍
L-酪氨酸(Tyrosine，Tyr)属于芳香族氧基酸，在体内可由苯丙氨酸经转化而来，是合成神经递质儿茶酚胺的前体，是人体不可缺少的一种氨基酸。L-酪氨酸及其代谢产物的含量在健康人和遗传性疾病、肝肾疾病以及恶性肿瘤等疾病患者体液中有明显差异。L-酪氨酸的代谢紊乱可导致多种遗传性疾病的发生，并会使人体会出现生长异常、智能低下等现象，因此国内外已普遍开始重视食品中L-酪氨酸的添加。因此，探索L-酪氨酸的检测手段对于含有L-酪氨酸的食品的质量控制具有重要意义。目前检测L-酪氨酸的方法主要有氨基酸自动分析仪检测法、质谱法、核磁共振波谱法和毛细管电泳法等，这些技术虽然应用比较广泛，但使用的仪器昂贵、前处理复杂费时、试剂消耗量大且分析时间较长，用于混合样品时检测不灵敏，检测限高，不能满足L-酪氨酸含量低时的检测需求。
技术实现思路
针对现有技术中检测L-酪氨酸存在的仪器昂贵、前处理复杂、试剂消耗量大、分析时间长、混合样品检测不灵敏、检测限高的问题，本专利技术提供一种L-酪氨酸的高效液相检测方法。为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：一种L-酪氨酸的高效液相检测方法，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：磷酸盐缓冲液与甲醇的混合溶液；所述磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为6∶3.5～4.5；检测波长：220～230nm；柱温为25～35℃；流动相流速：0.7～1.0mL/min。本方法所提供的色谱条件能使样品色谱峰与杂质峰达到很好的分离效果，能够准确测定出待测样品中L-酪氨酸的含量，即使对于混合样品，该方法仍可以对L-酪氨酸内进行准确的定量检测，检测灵敏度高、检测限低，便于含有L-酪氨酸产品的生产过程分析和控制。当样品数量较多时，本专利技术所采用的高效液相色谱法在同样的时间内可以检测多个样品，并且检测时间短，显著提高了检测的工作效率。优选地，所述磷酸盐缓冲液为含有4.1g/L的磷酸二氢钾、2.8ml/L三乙胺的水溶液。将该溶液用于流动相，可以使L-酪氨酸能够在色谱柱上能够得以良好的保留。三乙胺作为一种缓冲盐，可以协助保持磷酸盐缓冲液的pH稳定，还能与固定相的硅羟基结合，阻碍了样品中碱性化合物与硅羟基的作用，从而减少待测样品中碱性组分的拖尾。优选地，所述磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为6∶4。在该比例下可以获得更完善的峰形。优选地，所述检测波长为225nm。优选地，所述柱温为30℃。柱温范围接近室温，容易控制温度使其稳定，样品在该温度范围内分离良好。优选地，上述L-酪氨酸的高效液相检测方法包括如下步骤：步骤a、配制L-酪氨酸的对照品溶液；步骤b、用所述色谱条件对所述对照品溶液进行高效液相色谱检测，根据所得峰面积绘制L-酪氨酸对照品的标准曲线，得出L-酪氨酸对照品的浓度-峰面积线性回归方程；步骤c、提供待测样品，用所述色谱条件对所述待测样品进行检测，将得到的峰面积代入所述浓度-峰面积线性回归方程，计算所述待测样品中L-酪氨酸的含量。相对于现有技术而言，本专利技术采用高效液相色谱法的操作步骤中，样品的处理方法简单、操作便捷，能够提高工作效率；采用高效液相色谱法进行检测，不需要使用昂贵的仪器。具体地，上述步骤a中所述L-酪氨酸对照品溶液至少为5份，其浓度范围为50～150μg/mL，溶剂为纯化水。L-酪氨酸在0℃水中溶解度为200μg/ml，且溶解度随温度的增加而升高，故选择纯化水作为溶剂，在优选的浓度范围内可以确保L-酪氨酸对照品能够充分溶解。纯化水可以与本专利技术的流动相以任意比例混溶，且在进样量范围内的纯化水不会对流动相的性质产生影响，故以纯化水作为标准溶液的溶剂。上述步骤c中所述待测样品在检测前用纯化水溶解，避免引入其他杂质对实验结果产生干扰。附图说明下面将结合附图及实施例对本专利技术作进一步说明，附图中：图1是本专利技术实施例1的对照品对照品溶液高效液相色谱图；图2是本专利技术实施例1的待测品溶液高效液相色谱图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1本专利技术实施例提供了一种L-酪氨酸的高效液相检测方法，采用的高效液相色谱仪为安捷伦1100，色谱柱为PerkinC18柱(5μm，4.6*250mm)，进样体积为20μl(定量环)。包括如下步骤：1、按50μg/ml、80μg/ml、100μg/ml、120μg/ml、150μg/ml的浓度配制L-酪氨酸对照品溶液；2、用高效液相色谱法对所述对照品溶液进行检测，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：称取4.1g的磷酸二氢钾溶于500ml纯化水中，加2.8ml三乙胺，混匀超声，用0.22um有机膜过滤，再加500ml纯化水，混匀，得到磷酸盐缓冲液，将磷酸盐缓冲液与甲醇按6：4的体积比混和均匀，即得；检测波长：225nm；柱温：30℃；流动相流速：1.0mL/min。取对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪进行检测，对照品溶液浓度与峰面积的结果见表1。各色谱图的理论塔板数大于5000，且与杂峰分离度良好，其中浓度为101.20μg/ml的对照品溶液的色谱图如图1所示。表1对照品实际浓度μg/ml峰面积50.601998.680.963133.6101.203976.0121.444749.6151.805872.0根据对照品浓度和相应峰面积绘制L-酪氨酸对照品的标准曲线，以峰面积为横坐标，以浓度为纵坐标，得出L-酪氨酸对照品的浓度-峰面积线性回归方程：y＝0.026x-1.2519，R2＝0.9997；3、提供待测样品，用纯化水溶解定容至50ml，再用流动相稀释10倍，在与对照品溶液完全相同的检测条件下，对所述待测样品进行检测，得到峰面积为3951.8，将该峰面积代入上述浓度-峰面积线性回归方程，计算所述待测样品中L-酪氨酸的含量为50.7mg。4、精密度考察取浓度为101.20μg/ml的对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪，重复6针，所得峰面积分别为3987.3、3956.5、3968.7、3976.0、3973.4、3962.9，平均值为3970.8，RSD为0.28％。说明本实施例提供的一种L-酪氨酸的高效液相检测方法精密度良好。5、回收率考察将待测样品50.5mg用纯化水溶解定容至50ml，用流动相稀释10倍；将待测样品50.5mg与L-酪氨酸对照品9.36mg共同用纯化水溶解定容至50ml，用流动相稀释10倍。将上述两份样品进样，在与对照品溶液完全相同的检测条件进行检测，并记录峰面积。加入对照品的样品的峰面积为4689.5，计算含量为120.68μg/ml，直接进样的峰面积3976.0，计算含量为102.12μg/ml，回收率为99.1％。说明本实施例提供的一种L-酪氨酸的高效液相检测方法回收率良好。6、定量限使用UV1100型号的高效液相色谱仪进行定量限的检测，基线噪声的峰高是0.03mv，据定量限S/N＝10的测定方法，定量限是峰高约在基线噪音高的10倍时注入液相色谱仪的对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种L‑酪氨酸的高效液相检测方法，其特征在于，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：磷酸盐缓冲液与甲醇的混合溶液；所述磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为6∶3.5～4.5；检测波长：220～230nm；柱温为25～35℃；流动相流速：0.7～1.0mL/min。

【技术特征摘要】
1.一种L-酪氨酸的高效液相检测方法，其特征在于，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：磷酸盐缓冲液与甲醇的混合溶液；所述磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为6∶3.5～4.5；检测波长：220～230nm；柱温为25～35℃；流动相流速：0.7～1.0mL/min。2.根据权利要求1所述的L-酪氨酸的高效液相检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为含有4.1g/L的磷酸二氢钾、2.8ml/L三乙胺的水溶液。3.根据权利要求2所述的L-酪氨酸的高效液相检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为6∶4。4.根据权利要求1所述的L-酪氨酸的高效液相检测方法，其特征在于，所述检测波长为225nm。5.根据权利要求1所述的L-酪氨酸的高效液相检测方法，其特征在于，所述柱温为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王立欣，王殿涛，李斌水，
申请(专利权)人：精晶药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13