本发明专利技术公开了一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂及其制备方法与应用，该微生物处理剂包括体积比为1:3‑3:1的益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物。该制备方法包括以下步骤：制备益生菌复合物；制备黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物；将益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物按照体积比为1:3‑3:1进行混合，制备得到降解黄曲霉素B1的微生物处理剂。本发明专利技术的微生物处理剂可以显著缓解AFB1对鸡和猪生产性能的不良影响。
【技术实现步骤摘要】
一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂及其制备方法与应用
本专利技术属于动物饲养养殖
，具体地说，涉及一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂及其制备方法与应用。
技术介绍
黄曲霉毒素B1(AflatoxinB1，简写为AFB1)是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)。在人和动物的天然食物中，AFT(Aflatoxin)广泛存在，以AFB1最为多见，危害性也最强，AFB1对包括人和若干动物具有强烈的毒性，例如：对家禽的危害性主要有：采食量、增重和饲料转化率降低，不孕，流产，肺水肿，疫病易感性增加等；对猪的危害性主要有：采食量、增重和饲料转化率降低，不孕流产，肺水肿，疫病易感性增加等；对奶牛的危害性主要有：采食量、产奶量、增重和饲料转化率降低，繁殖性能紊乱，胚胎死亡和流产，神经系统紊乱，痉挛和缺乏协调性，疫病易感性增加等。AFB1是已知的化学物质中致癌性最强的一种。因此，国家质检机关规定AFB1是大部分食品的必检项目之一。AFB1耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工饲料的温度下难以破坏。黄曲霉素B1等污染是一个全球性的难题，传统的脱毒方法具有破坏营养、去毒不彻底和成本高等缺陷，因此实际防控、脱毒效果并不理想。那么，采取更为有效和安全的方法对霉菌毒素进行脱毒处理便成为解决问题的关键，采用微生物降解霉菌毒素，由于其具有效率高，无残留，成本低廉和操作简便等优点引起了研究人员的广泛关注，尤其是利用微生物或者其产生的酶将霉菌毒素降解为无毒产物更成为目前研究的热点。对被霉菌毒素污染的粮食作物和饲料进行脱毒处理是扩大饲料资源、降低损失的有效方法。为此，提供降解霉菌毒素的微生物处理剂，在对AFB1有降解作用的益生菌和降解酶的基础上，将益生菌与AFB1降解酶配合应用于养殖中，通过利用微生物之间的竞争作用，将具有抑制霉菌生长的微生物或其代谢产物按比例添加到饲料原料中抑制霉菌的生长，进而抑制毒素的产生，从而达到预防畜禽霉菌毒素中毒的目的，成为AFB1降解的重要方向。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对黄曲霉素B1脱毒方法破坏营养、去毒不彻底和成本高的问题，提供了一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂及其制备方法与应用。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂，包括体积比为1:3-3:1的益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物。进一步地，所述益生菌复合物包括质量比为1-3：0.5-1.5：0.5-1.5的酿酒酵母培养液、巴氏醋杆菌培养液和地衣芽孢杆菌培养液。进一步地，酿酒酵母培养液、巴氏醋杆菌培养液和地衣芽孢杆菌培养液三种菌的含量分别为2×109个/g，1×109个/g，1×109个/g。进一步地，所述黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物为体积比为1:1的黑曲霉产降解AFB1的粗酶液和根霉所产降解AFB1的粗酶液的混合物，其酶活为150U/g。本专利技术还公开了一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂的制备方法，包括以下步骤：步骤1、制备益生菌复合物；步骤2、制备黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物；步骤3、将益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物按照体积比为1:3-3:1进行混合，制备得到降解黄曲霉素B1的微生物处理剂。进一步地，所述步骤1中的制备益生菌复合物具体为：步骤1.1、酿酒酵母培养液的制备：按4％-8％(V/V)的接种量在酿酒酵母发酵培养基中接种酿酒酵母，在25-30℃，155-165r/min摇床培养，待培养27h时收获，调节菌的含量为1×109CFU/ml；步骤1.2、巴氏醋杆菌培养液的制备：按4％-8％(V/V)的接种量在醋酸菌发酵培养基中接种巴氏醋杆菌，在25-35℃，95-105r/min摇床培养，待培养36h时收获，调节菌的含量为1×109CFU/ml；步骤1.3、地衣芽孢杆菌培养液的制备：按3％-7％(V/V)的接种量在地衣芽孢杆菌发酵培养基中接种地衣芽孢杆菌，在32-38℃，155-165r/min摇床培养，待培养24h时收获，调节菌的含量为1×109CFU/ml；步骤1.4、将酿酒酵母培养液、巴氏醋杆菌培养液和地衣芽孢杆菌培养液以质量比为1-3：0.5-1.5：0.5-1.5的比例混合后加谷物壳粉或粗纤维粉，40-45℃温度条件下进行干燥，制备得到益生菌复合物。进一步地，，酿酒酵母发酵培养基的组成：葡萄糖20g，酵母粉10g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，蒸馏水1.0L，自然PH；醋酸菌培养基的组成：葡萄糖10.0g，酵母提取物10.0g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.5g，蒸馏水1.0L，PH5.5；地衣芽孢杆菌发酵培养基的组成：蔗糖10g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1.0L，PH6.5。进一步地，所述步骤2中的制备黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物具体为：步骤2.1、将降解AFB1黑曲霉菌株涂布于PDA固体平皿，置于26-30℃恒温培养144小时至孢子大量产生时收获；在平皿中加入灭菌生理盐水，用涂布棒将平皿上的孢子刮下，用四层纱布过滤以除去菌丝残体，将孢子浓度调整为1×109CFU/ml，按每瓶5ml接种于固体发酵培养基中，混合均匀后置于26-30℃恒温培养箱中培养5d后收获；按照固液比1：2的比例将固体发酵培养物与生理盐水混合均匀，室温浸泡1h；浸泡完成后先用8层纱布过滤发酵培养物，之后将滤液5000r/min条件下离心5min，再用定性滤纸过滤，最后用0.20μm的滤膜过滤除菌后保存于4℃冰箱，即为黑曲霉产降解AFB1的粗酶液；步骤2.2、挑取降解AFB1根霉菌株，将其涂布于PDA固体平皿，置于15-35℃恒温培养96小时至孢子大量产生时收获，在平皿中加入适量灭菌生理盐水，用涂布棒将平皿上的孢子刮下，用四层纱布过滤以除去菌丝残体，将孢子浓度调整为1×109CFU/ml，按每瓶5ml接种于固体发酵培养基中，混合均匀后置于15-35℃恒温培养箱中培养5d后收获。按照固液比1：2的比例将固体发酵培养物与生理盐水混合均匀，室温浸泡1h，浸泡完成后先用8层纱布过滤发酵培养物，之后将滤液5000r/min条件下离心5min，再用定性滤纸过滤，最后用0.20μm的滤膜过滤除菌后保存于4℃冰箱，即为根霉所产降解AFB1的粗酶液；步骤2.3、将黑曲霉产降解AFB1的粗酶液和根霉所产降解AFB1的粗酶液按照体积比为1:1进行混合，制备得到黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物。进一步地，所述灭菌生理盐水含有体积分数0.05％的吐温80；所述降解AFB1黑曲霉菌株、降解AFB1根霉菌株由四川省食品发酵工业研究设计院菌种保存中心提供，其中，降解AFB1AFB1黑曲霉菌株(Aspergillusniger20180420)于2018年05月02日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:2018245；降解AFB1根霉菌株于2018年05月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:2018313。本专利技术还公开了一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂在制备鸡饲料或者猪饲料中的应用，所述降解黄曲霉素B1的微生物处理剂的添加量占鸡饲料或者猪饲料的0.10％-0.15％。与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：1)本专利技术对AFB1降解酶进行分离纯化，之后将益生菌与A本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂，其特征在于，包括体积比为1:3‑3:1的益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物。
【技术特征摘要】
1.一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂，其特征在于，包括体积比为1:3-3:1的益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物。2.根据权利要求1所述的降解黄曲霉素B1的微生物处理剂，其特征在于，所述益生菌复合物包括质量比为1-3：0.5-1.5：0.5-1.5的酿酒酵母培养液、巴氏醋杆菌培养液和地衣芽孢杆菌培养液。3.根据权利要求2所述的降解黄曲霉素B1的微生物处理剂，其特征在于，酿酒酵母培养液、巴氏醋杆菌培养液和地衣芽孢杆菌培养液三种菌的含量分别为2×109个/g,1×109个/g，1×109个/g。4.根据权利要求1所述的降解黄曲霉素B1的微生物处理剂，其特征在于，所述黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物为体积比为1:1的黑曲霉产降解AFB1的粗酶液和根霉所产降解AFB1的粗酶液的混合物，其酶活为150U/g。5.一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、制备益生菌复合物；步骤2、制备黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物；步骤3、将益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物按照体积比为1:3-3:1进行混合，制备得到降解黄曲霉素B1的微生物处理剂。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的制备益生菌复合物具体为：步骤1.1、酿酒酵母培养液的制备：按4％-8％(V/V)的接种量在酿酒酵母发酵培养基中接种酿酒酵母，在25-30℃，155-165r/min摇床培养，待培养27h时收获，调节菌的含量为1×109CFU/ml；步骤1.2、巴氏醋杆菌培养液的制备：按4％-8％(V/V)的接种量在醋酸菌发酵培养基中接种巴氏醋杆菌，在25-35℃，95-105r/min摇床培养，待培养36h时收获，调节菌的含量为1×109CFU/ml；步骤1.3、地衣芽孢杆菌培养液的制备：按3％-7％(V/V)的接种量在地衣芽孢杆菌发酵培养基中接种地衣芽孢杆菌，在32-38℃，155-165r/min摇床培养，待培养24h时收获，调节菌的含量为1×109CFU/ml；步骤1.4、将酿酒酵母培养液、巴氏醋杆菌培养液和地衣芽孢杆菌培养液以质量比为1-3：0.5-1.5：0.5-1.5的比例混合后加谷物壳粉或粗纤维粉，40-45℃温度条件下进行干燥，制备得到益生菌复合物。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，酿酒酵母发酵培养基的组成：葡萄糖20g，酵母粉10g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，蒸馏水1.0L，自然PH；醋酸菌培养基的组成：葡萄糖10.0g，酵母提取物10.0g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁...
【专利技术属性】
技术研发人员：张兴良，夏锡兰，钟秀，
申请(专利权)人：泸州正泰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51
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