由血浆环状RNA组成的肝癌诊断标志物及诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物医学诊断技术领域，具体是一种由血浆环状RNA组成的肝细胞肝癌诊断标志物组合，以及含有该组合的试剂盒。所述肝癌诊断标记物包括如下环状RNAs：hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。本发明专利技术可用于区分肝癌患者与健康人、慢性乙型肝炎患者或乙肝肝硬化患者。

【技术实现步骤摘要】
由血浆环状RNA组成的肝癌诊断标志物及诊断试剂盒
本专利技术涉及生物医学诊断
，具体地说，是一个由血浆环状RNA组成的肝癌诊断组合，所述的血浆环状RNA包括hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897，以及其用于原发性肝细胞肝癌预警以及早期诊断试剂盒的应用。
技术介绍
早期肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC，以下简称为肝癌)往往没有明显症状或仅表现为乏力、纳差、腹胀等非典型症状，当出现肝区疼痛、肝肿大等明显症状时，常常意味着已经到达中晚期，发生了肝内外转移，失去了根治性手术的机会。因此，对于慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、酒精性肝病以及非酒精性脂肪性肝病等肝癌高危患者，需定期(一般为3至6个月)监测肝癌的发生。目前常用的肝癌诊断方法有B超，CT(computedtomography)和磁共振(magneticresonanceimaging,MRI)等影像学检查以及甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)，异常凝血酶原(又称PIVKA-II，proteininducedbyvitaminKabsenceorantagonists-II,维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白)等实验室检查。但影像学检查对于小肝癌的诊断仍不够准确。而甲胎蛋白和异常凝血酶原对肝癌诊断的敏感性和特异性也不够理想。既往文献表明，甲胎蛋白对肝癌诊断的敏感性为39-64％，特异性为76-91％，异常凝血酶原对肝癌诊断的敏感性为41-77％，特异性为72-98％。因此，有必要寻找新的肝癌诊断标志物。环状RNA(CircularRNAs，简称为circRNAs)是一种闭合环状的单链RNA，既往被认为是一种罕见的RNA，并且仅仅是RNA剪切过程中产生的“废物”，没有任何功能。近年来，高通量测序发现包括人类在内的真核生物细胞中存在大量的环状RNA。重要的是，已有多篇文献报道环状RNA可以作为肿瘤诊断标志物。LiYan等(LIY,ZHENGQ,BAOC,etal.CircularRNAisenrichedandstableinexosomes:apromisingbiomarkerforcancerdiagnosis[J].Cellresearch,2015,25(8):981-4)在健康人血清外泌体中检测出了1215个环状RNA，这些RNA丰度较高，并且将血清在常温放置24小时后，环状RNA几乎没有发生降解。结肠癌患者血清外泌体中circ-KLDHC10的表达水平高于健康对照。这些结果表明环状RNA可作为肿瘤诊断标志物。YangFan等(YANGF,LIUDY,GUOJT,etal.CircularRNAcirc-LDLRAD3asabiomarkerindiagnosisofpancreaticcancer[J].Worldjournalofgastroenterology:WJG,2017,23(47):8345-54)发现环状RNAcirc-LDLRAD3在胰腺癌组织中的表达量高于癌旁(P<0.01)，在胰腺癌患者外周血血浆中的表达量高于正常人(P<0.01)，其对胰腺癌诊断的ROC曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve，受试者工作特征曲线，简称ROC曲线)的AUC(AreaUnderCurve，曲线下面积)为0.67，敏感性为57.38％，特异性为70.49％；联合CA19-9后AUC为0.87，敏感性为70.49％，特异性为93.55％。SunHandong等(SUNH,TANGW,RONGD,etal.Hsa_circ_0000520,apotentialnewcircularRNAbiomarker,isinvolvedingastriccarcinoma[J].Cancerbiomarkers:sectionAofDiseasemarkers,2018,21(2):299-306)发现环状RNAhsa_circ_0000520在胃癌患者血浆中的表达量低于正常人。YinWei-Bing等(YINWB,YANMG,FANGX,etal.CirculatingcircularRNAhsa_circ_0001785actsasadiagnosticbiomarkerforbreastcancerdetection[J].Clinicachimicaacta；internationaljournalofclinicalchemistry,2017,12(3):25-30)发现环状RNAhsa_circ_0001785在乳腺癌患者血浆中的表达量高于正常人，其诊断乳腺癌的AUC为0.784，而在同一队列中，CEA诊断乳腺癌的AUC为0.562，CA15-3诊断乳腺癌的AUC为0.629，其在乳腺癌手术前(0.283±0.043)血浆中的表达量高于手术后(0.109±0.037，P<0.01)。ZhaoQ等(ZHAOQ,CHENS,LIT,etal.ClinicalvaluesofcircularRNA0000181inthescreeningofgastriccancer[J].Journalofclinicallaboratoryanalysis,2017,10(9):87-92)发现hsa_circ_0000181在胃癌患者外周血血浆中的表达量低于正常人(P<0.001)，其低表达与分化(P＝0.038)及癌胚抗原(P＝0.037)有关，其AUC为0.756，其敏感性为99.0％，特异性为85.2％。但是关于由血浆环状RNA组成的肝癌诊断标志物及诊断试剂盒目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种由血浆环状RNA组成的肝癌诊断标志物及诊断试剂盒。本专利技术的第一方面，提供一种肝癌诊断标志物，其由以下环状RNA的核酸分子组成：hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。进一步的，所述的环状RNA在肝癌患者血浆中的水平高于健康人、慢性乙型肝炎患者或乙肝肝硬化患者。进一步的，所述的肝癌为原发性肝细胞肝癌。本专利技术的第二方面，提供hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897在制备肝癌诊断试剂或试剂盒中的应用。进一步的，所述的诊断试剂或试剂盒通过检测以下环状RNA分子在血浆中水平诊断肝癌：hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。进一步的，所述的诊断试剂为检测以下环状RNA分子在血浆中水平的试剂的组合：hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。进一步的，所述的诊断试剂为实时荧光定量PCR相关试剂。进一步的，所述的诊断试剂盒包含检测以下环状RNA分子在血浆中水平的试剂：hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。本专利技术的第三方面，提供一种诊断肝癌的hsa_本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897在制备肝癌诊断试剂或试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897在制备肝癌诊断试剂或试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897在制备肝癌诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂或试剂盒通过检测以下环状RNA分子在血浆中水平诊断肝癌：hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。3.根据权利要求1所述的hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897在制备肝癌诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂为检测以下环状RNA分子在血浆中水平的试剂的组合：hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。4.根据权利要求1所述的hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897在制备肝癌诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂为实时荧光定量PCR相关试剂。5.一种诊断肝癌的hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897联合检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒通过检测以下环状RNA分子在血浆中水平诊断肝癌：hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。6.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含用于检测以下环状RNA分子在血浆中水平的试剂：hsa_circ_0000976，hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。7.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括血浆RNA提取系统和反转录系统。8.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟平，余建，杨富，刘辉，郭兴刚，杨远，徐庆国，张潇文，
申请(专利权)人：上海柏运医疗器材有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31