毛蚶过氧化氢酶--一种新型海洋生物污染检测标记物制造技术

本发明专利技术公开了毛蚶过氧化氢酶基因，毛蚶过氧化氢酶基因为克隆基因，通过基因克隆技术克隆毛蚶过氧化氢酶基因核心片段获得。本发明专利技术还公开一种新型海洋生物污染检测标记物，用毛蚶作为检测海洋污染的生物样本，毛蚶过氧化氢酶用作海洋污染的检测标记物。本发明专利技术毛蚶过氧化氢酶在毛蚶的血细胞和腮中毛蚶过氧化氢酶基因的相对表达量最高，克隆用PCR反应体系能保证扩增反应的特异性、提高PCR扩增效率；本发明专利技术检测标记物特异性强，在分子水平上能够直接以生物体内靶细胞或靶分子为反应终点进行灵敏的生物学反应，对海洋污染物暴露和毒性效应有预警作用。

【技术实现步骤摘要】
毛蚶过氧化氢酶--一种新型海洋生物污染检测标记物
本专利技术涉及分子生物
，尤其是涉及毛蚶过氧化氢酶---一种新型海洋生物污染检测标记物。技术背景我国东海地区海域带处于海洋与陆地的过渡地带，陆地工农业生产、海洋产业开发等排放的废水多在此汇集。其中重金属、石油类(BAP)等污染物易通过吸附等作用结合到悬浮颗粒物或胶体表面而被沉淀富集，会对底栖生物产生较大的影响。有研究表明，生物组织中标志物活性（含量）与环境中污染物含量呈一定相关性，因此，研究东海海域沉积物中污染物的含量变化，能够为筛选生物标志物提供基础数据，同时有利于初步掌握不同区域的污染特征和来源，对于应用生物标志物法评价周围人类活动对海域环境的生态压力有重要作用。毛蚶(Scapharcasubcrenata)俗称毛蛤、麻蚶、瓦楞子，属于软体动物门、瓣鳃纲、翼形亚纲、蚶目、蚶科、毛蚶属，广泛分布于日本、朝鲜、中国沿岸;在中国北起鸭绿江，南至广西均有分布，以莱州湾、渤海湾、辽东湾、海州湾等浅水区的资源尤为丰富。近年来，随着工农业的迅猛发展，近海遭到不同程度的污染，特别是石油工业和海上交通运输业的发展，使得石油成为近海中最主要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.毛蚶过氧化氢酶基因，其特征在于：所述毛蚶过氧化氢酶基因为克隆基因；所述毛蚶过氧化氢酶基因通过基因克隆技术克隆获得。

【技术特征摘要】
1.毛蚶过氧化氢酶基因，其特征在于：所述毛蚶过氧化氢酶基因为克隆基因；所述毛蚶过氧化氢酶基因通过基因克隆技术克隆获得。2.根据权利要求1所述的毛蚶过氧化氢酶基因，其特征在于：所述毛蚶过氧化氢酶基因的克隆具体步骤为：1）总RNA提取：以毛蚶作为材料，提取各组织总RNA；2）cDNA第一链的合成：以步骤1获得的总RNA样品作为模板，使用M-MLV反转录试剂盒进行cDNA的反转录合成，获得cDNA第一链；3）毛蚶过氧化氢酶基因核心片段PCR扩增：根据NCBI数据库中贻贝毛蚶过氧化氢酶基因的序列，分析氨基酸序列的保守区，使用primer5.0软件设计简并引物从而扩增出毛蚶过氧化氢酶的核心序列，分别进行PCR扩增反应得到不同长度的产物片段，对存在目的条带的PCR产物进行纯化回收；4）毛蚶过氧化氢酶基因RACE扩增全长：基于步骤3获得的毛蚶过氧化氢酶基因序列，根据所得的目的序列进行了RACE引物的设计，利用RACE技术扩增得到5’端和3’端序列以及ORF区的验证序列；5）筛选：将步骤4获得的PCR反应产物连接至PMD18-T载体并转至DH5&感受态细胞中，涂板后挑取单克隆培养，菌液PCR验证后送测序公司进行序列测定，获得毛蚶过氧化氢酶基因序列；6）生物信息学分析：将步骤5获得的基因序列，利用分子生物学Expasy在线软件进行氨基酸序列的翻译，获得对应蛋白质的氨基酸序列生物信息学分析。3.根据权利要求2所述的毛蚶过氧化氢酶基因，其特征在于：所述步骤3用引物序列为：CAT-real-F1:5’-TTCCTTACGTGTCCGTCAGC-3’；CAT-real-R1:5’-ACCTGCAGTCTACCAATGGC-3’。4.根据权利要求2所述的毛蚶过氧化氢酶基因，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁鹏志，董文强，任世太，郭宝英，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33