建立功能性消化不良的小鼠模型的方法技术

本发明专利技术涉及医学动物模型建模领域，具体而言，涉及一种建立功能性消化不良的小鼠模型的方法。建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，包括以下步骤：每天对小鼠依次实施束缚、电击和疲劳游泳后随机施加慢性不可预知性温和应激持续造模28‑32天。通过对小鼠依次实施束缚、电击和疲劳游泳后随机施加慢性不可预知性温和应激使得实验动物表现出与临床病人相似的功能性消化不良症状，同时应激强度适中，不会对实验动物造成躯体上的伤害，更不会出现器质性的改变，因此符合功能性消化不良的特点。

【技术实现步骤摘要】
建立功能性消化不良的小鼠模型的方法
本专利技术涉及医学动物模型建模领域，具体而言，涉及一种建立功能性消化不良的小鼠模型的方法。
技术介绍
功能性消化不良又称为非溃疡性消化不良，是一组常见的临床症候群，包括持续性或反复性的上腹不适、食欲不振、早饱、胸骨后疼痛不适、恶心、呕吐或其他上腹部症状，持续至少3个月以上，但无局部或全身器质性疾病的证据。由于病因复杂，目前尚不明确功能性消化不良的发病机制，但普遍认为与胃肠动力调节机制异常、胃肠激素分泌失调、胃酸异常分泌、内脏敏感性增高、脑-肠轴紊乱、病菌感染以及心理因素有关，其中胃肠动力异常和心理精神因素是众多诱发的因素中研究的热点。研究表明功能性消化不良的发病率与患者自身的心理精神应激程度呈正相关，越来越多的临床数据表明心理因素在功能性消化不良诱发和发展过程中占有重要地位，说明功能性消化不良属于躯体和心理均受创伤的功能性身心疾患。目前功能性消化不良动物模型多采用夹尾激怒法，夹尾法造模的原理是利用夹尾来激怒老鼠使之与其他老鼠打斗，长期以往会造成老鼠暴燥、易怒进而引发消化不良症状。而临床中功能性消化不良患者多为长期情绪低落、郁郁寡欢，表现出一定程度的抑郁症状，而不是暴躁、易怒，所以夹尾法造模的缺点是造模过程与临床患者发病过程不完全相符，并且长期夹尾会使老鼠尾部受伤，引起感染等其它问题。
技术实现思路
本专利技术提供了一种建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，其能够使造模后的动物的表现与临床病人的功能性消化不良症状一致，同时，应激强度适中，不会对实验动物造成躯体上的伤害，更不会出现器质性的改变。本专利技术是这样实现的：一种建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，包括以下步骤：每天对小鼠依次实施束缚、电击和疲劳游泳后随机施加慢性不可预知性温和应激持续造模28-32天。本专利技术的有益效果是：本专利技术的通过对小鼠依次实施束缚、电击和疲劳游泳后随机施加慢性不可预知性温和应激使得实验动物表现出与临床病人相似的功能性消化不良症状，同时应激强度适中，不会对实验动物造成躯体上的伤害，更不会出现器质性的改变，因此符合功能性消化不良的特点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为实施例1中小鼠排便情况图；图2为实施例1中小鼠毛发状态图；图3为实施例1中造模期间小鼠体重变化趋势图；图4为实施例1中造模期间小鼠日均进食量变化趋势图；图5为实施例1中造模期间小鼠日均饮水量变化趋势图；图6为实施例1中造模期间糖水消耗百分率的变化；图7为实施例1中造模期间小鼠水平运动得分变化；图8为实施例1中造模期间小鼠垂直运动得分变化；图9为实施例1中小鼠结肠组织病理切片显微图(100×)；图10为实施例1中小鼠胃组织病理切片显微图(100×)；图11为实施例1中小鼠肝组织病理切片显微图(100×)；图12为实施例1中正常组与模型组的小鼠胃残留率比较(％)；图13为实施例1中小鼠血清胃动素比较(ng/L)；图14为实施例1中小鼠血清p物质比较(ng/L)；图15为实施例1中血清5-羟色胺含量比较(ng/mL)；图16为实施例1中脑组织5-羟色胺含量比较(ng/mg)；图17为对比例1中造模期间小鼠糖水消耗百分率的变化；图18为对比例1中造模期间小鼠水平运动得分变化；图19为对比例1中造模期间小鼠垂直运动得分变化；图20为对比例2和对比例3中小鼠排便情况图；图21为对比例3中正常组与模型组的小鼠胃残留率比较(％)；图22为对比例3中小鼠血清胃动素比较(ng/L)；图23为对比例3中小鼠血清p物质比较(ng/L)；图24为对比例2中血清5-羟色胺含量比较(ng/mL)；图25为对比例3中脑组织5-羟色胺含量比较(ng/mg)。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的建立功能性消化不良的小鼠模型的方法进行具体说明。中医认为功能性消化不良的病因主要为肝胃不和，即长期肝气郁结，累及胃部消化功能障碍，因此在建模时既要体现中医“肝”的病变(主要以“肝郁”为特征)，又要有消化道症状(主要为胃部消化功能障碍，而且不能有器质性改变)。复制“肝郁”模型可以用到的方法有：慢性束缚、疲劳游泳、电击、慢性不可预知性温和应激、悬尾、孤养、噪音刺激等，这些方法多为单独使用，或者随意组合合用。单独使用上述应激方式或者随意组合合用，小鼠未出现明显的胃部消化功能障碍症状，说明应激程度还不足以造成实验动物出现“木郁戕土”(肝郁累及胃部消化功能)的状况。本专利技术实施例提供一种建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，包括以下步骤：S1、动物的选择和预处理；选择SPF级昆明20只小鼠，每只体重约20g，造模前对小鼠进行适应性饲养5-7天。具体地，适应性饲养是在饲养过程中水、饲料供应充足且小鼠自由饮取。保证小鼠适应周围的实验环境，避免环境应激对小鼠造成不安、焦躁的心理，保证造模结果的准确性。适应性饲养结束后将小鼠分为两组，一组为正常组，一组为造模组，每组小鼠为10只。正常组用于对比，继而确定造模组的造模效果。但是选择的小鼠也可不限于20只，可以根据需求进行增加或者减少，且分组也不限于均分，正常组和造模组可以有稍许差别。上述所记载的20只，分两组，每组10只仅仅是其中的一个优选方案而已。S2、动物模型建立；适应性饲养结束后，开始造模，具体地，每天对小鼠依次实施束缚、电击和疲劳游泳后随机施加慢性不可预知性温和应激持续造模30天。具体地，依次实施束缚、电击和疲劳游泳是将小鼠束缚于束缚管内后第一次电击小鼠，而后持续束缚，再第二次电击小鼠后解除束缚，而后疲劳游泳。第一次电击小鼠是电击小鼠尾部3-5分钟，持续束缚的时间为5.5-6.5小时，第二次电击小鼠是电击小鼠尾部3-5分钟。疲劳游泳是解除束缚后45-65分钟后，控制小鼠在15-19℃的水中进行游泳，并以小鼠鼻部没入水中2-4秒且不能抬起作为疲劳的标准。束缚、电击和疲劳游泳是固定刺激，不可预知性温和应激是随机慢性刺激，两种方式结合能够进一步促进小鼠的造模效果。具体地，长期慢性束缚是通过限制动物躯体可活动程度和范围而使其产生急躁、挣扎无助、焦虑、抑郁、绝望等心理、行为变化，这与人类慢性身心疾病的形成具有相似性，若在束缚的基础上添加痛感刺激(电击)可促进这种身心疾病变化。另外动物在恶劣环境下会出现逃逸行为，当不能逃逸时便出现行为绝望(behavioraldespair)，当小鼠被迫在一个局限的空间游泳时(强迫游泳)，它们首先拼命泳动，试图逃逸，当逃逸无法实现时即处于一种漂浮不动状态。将上述三种应激法串联起来施于小鼠，可以快速使实验动物出现肝气郁结的状态进而影响消化功能。同时考虑到每天使用固定的应激刺激，实验动物会对应激产生耐受，我们在这三种固定刺激的基础上再施加一种随机的慢性不可预知性温和应激，创造出三联一复合应激法。使用我们的三联一复合应激法造模，实验动物表现出与临床病人相似的功能性消化不良症状，同时应激强度适中，不会对实验动物造成躯体上的伤害，更本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：每天对小鼠依次实施束缚、电击和疲劳游泳后随机施加慢性不可预知性温和应激持续造模28‑32天。

【技术特征摘要】
1.一种建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：每天对小鼠依次实施束缚、电击和疲劳游泳后随机施加慢性不可预知性温和应激持续造模28-32天。2.根据权利要求1所述的建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，其特征在于，所述慢性不可预知性温和应激包括7种应激方式，7种所述应激方式包括提尾旋转45-75秒，40-45℃水浴游泳2-4min，湿笼饲养22-26h，噪声刺激,1.8-2.2h，悬尾8-12min，鼠笼倾斜,22-26h以及10-15℃冰浴2-3min中的任意一种。3.根据权利要求2所述的建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，其特征在于，随机施加所述慢性不可预知性温和应激是每次施加7中所述应激方式中的一种，且每种所述应激方式在5天内不得重复施加。4.根据权利要求3所述的建立功能性消化不良的小鼠模型的方法，其特征在于，依次实施束缚、电击和疲劳游泳是将小鼠束缚于束缚管内后第一次电击小鼠，而后持续束缚，再第二次电击小鼠后解除束缚，而后疲劳游泳。5.根据权利要求4所述的建立功能性消化不良的小鼠模型的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王术玲，龚彦溶，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44