一种含羟基的胆固醇及其代谢物的检测分析方法技术

本发明专利技术涉及分析化学领域,具体涉及一种含羟基的胆固醇及其代谢物的检测分析方法。该检测分析方法具体为：所述含羟基的胆固醇及代谢物与衍生试剂d0‑/d3‑3‑N‑甲基‑2’‑羧基罗丹明6G发生稳定同位素标记衍生反应，磁分散固相萃取后得到的衍生化产物经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱分析系统进行检测。本发明专利技术利用带有永久正电荷d0‑/d3‑MCR6G的稳定同位素标记衍生试剂对生物样品中含羟基的胆固醇及代谢物进行标记，衍生化反应条件温和、快速，衍生化效率高，利用磁分散固相萃取技术提高了萃取效率、减少了样品前处理时间，能够显著提高分析物的色谱分离度和质谱离子化效率，并降低基质干扰。

A method for detection and analysis of cholesterol and its metabolites containing hydroxyl groups

The invention relates to the field of analytical chemistry, in particular to a detection and analysis method for hydroxyl-containing cholesterol and its metabolites. The detection and analysis method is as follows: the hydroxyl-containing cholesterol and its metabolites react with the derivative reagent d0 /d3 N methyl 2 carboxyl rhodamine 6G for stable isotope labeling derivatization, and the derivatives obtained by magnetic dispersion solid phase extraction are filtered through a membrane and then used in triple qua Spectrum analysis system for detection. The present invention uses stable isotope labeling derivative reagent with permanent positive charge d0 /d3 MCR6G to label hydroxyl-containing cholesterol and metabolites in biological samples. The conditions of derivatization reaction are mild, fast and the efficiency of derivatization is high. The extraction efficiency is improved by using magnetic dispersion solid phase extraction technology, and the sample pretreatment time is reduced. Meanwhile, it can significantly improve the chromatographic separation and mass spectrometry ionization efficiency of the analyte, and reduce matrix interference.

【技术实现步骤摘要】
一种含羟基的胆固醇及其代谢物的检测分析方法
本专利技术涉及分析化学领域,具体涉及一种含羟基的胆固醇及其代谢物的检测分析方法，尤其是涉及一种利用d0-/d3-3-N-甲基-2’-羧基罗丹明6G（d0-/d3-MCR6G）作为衍生试剂，微波辅助-稳定同位素标记衍生-磁分散固相萃取联合超高效液相色谱三重四极杆串联质谱检测的分析方法。
技术介绍
含羟基的胆固醇及其代谢物是一类含有游离羟基且浓度较低的生物有机分子，存在于生物样品中，如血浆、脑脊液、肝组织、尿液和粪便等。这些化合物在大量生物体中都扮演着细胞膜的信号传导、调节和新陈代谢的重要角色。近期研究表明，含羟基的胆固醇及代谢物的浓度水平与神经退行性疾病包括阿尔茨海默病、帕金森病和多发性硬化有紧密关系。多种分析方法已被开发用于生物样品中含羟基的胆固醇及代谢物的分析，包括免疫分析、薄层层析、气相色谱-质谱和液相色谱-质谱等。文献《Simultaneousdeterminationofoxysterols,cholesteroland25-hydroxy-vitaminD3inhumanplasmabyLC-UV-MS》（PLoSOne2015,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含羟基的胆固醇及其代谢物的检测分析方法，其特征在于：所述含羟基的胆固醇及代谢物与衍生试剂d0‑/d3‑3‑N‑甲基‑2’‑羧基罗丹明6G（d0‑/d3‑MCR6G）发生稳定同位素标记衍生反应，磁分散固相萃取后得到的衍生化产物经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱分析系统进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种含羟基的胆固醇及其代谢物的检测分析方法，其特征在于：所述含羟基的胆固醇及代谢物与衍生试剂d0-/d3-3-N-甲基-2’-羧基罗丹明6G（d0-/d3-MCR6G）发生稳定同位素标记衍生反应，磁分散固相萃取后得到的衍生化产物经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱分析系统进行检测。2.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于，具体包括以下步骤：a.微波辅助-稳定同位素标记衍生-磁分散固相萃取：取50-100μL预处理的待测样品或标准品混合溶液，25μLCMPI和25μLDMAP乙腈溶液加入离心管中，涡旋10秒后，加入100-200μLd0-MCR6G或d3-MCR6G乙腈溶液，摇匀后密封并在微波反应器中反应7-8分钟，d0-MCR6G标记的待测样品和d3-MCR6G标记的标准品1:1（V/V）混合，摇匀得混合溶液，将5-6mg吸附剂分散到混合溶液中，溶液pH调至6-7,振荡4分钟；磁性分离，用解吸剂将吸附的目标物从吸附剂上解吸下来，磁性分离，氮气吹干，残余物用200-300μL甲醇重新溶解，得到含羟基的胆固醇及代谢物的同位素标记衍生物萃取溶液；b.将含羟基的胆固醇及代谢物的同位素标记衍生物萃取溶液经滤膜过滤，利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测。3.根据权利要求2所述的检测分析方法，其特征在于，步骤（a）中，所述CMPI乙腈溶液的浓度为5-7.5wt%；所述DMAP乙腈溶液的浓度为10-15wt%；所述d0-MCR6G或d3-MCR6G乙腈溶液的浓度均为1.0×10-3mol/L；所述微波反应器的功率为650-800W，在微波反应器中反应的温度为45-55℃；所述含羟基的胆固醇及其代谢物标准品混合溶液浓度介于2-3000pg/mL。4.根据权利要求2或3所述的检测分析方法，其特征在于，所述吸附剂为Fe3O4/GO；所述解吸剂为含1%甲酸的甲醇、乙腈、乙醇或丙酮；所述优化的解析剂为含1%甲酸的甲醇。5.根据权利要求2-4任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱树芸，汪鑫，赵先恩，徐燕秋，孙鲁平，尤进茂，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37