The invention relates to an efficient culture method for microspore of rape, which comprises the following steps: S1, sampling and bud selection; S2, double culture: pollen is diluted and dark cultured with NLN_16 liquid medium containing 14-16mg/L colchicine; S3, embryo induction culture: pollen suspension of NLN_16 without pollution after doubling culture is centrifuged, leaving precipitation. The pollens were diluted with NLN 13 medium containing 7-8 mg/L colchicine for dark culture, S4, Regenerated Seedling culture, S5, seedling transplantation. The invention establishes a set of high-efficiency microspore culture technology system for rape, which can effectively improve the embryo efficiency, one-time seedling rate and doubling rate of genotype materials which are difficult to embryo at present.
【技术实现步骤摘要】
一种油菜小孢子高效培养方法
本专利技术涉及植物组织培养
,具体涉及一种油菜小孢子高效培养方法。
技术介绍
小孢子培养是将处于单核中晚期的小孢子从花药中分离出来培养,形成单倍体胚,再经过加倍后形成正常的二倍体植株。80年代德国研究者从油菜小孢子培养中获得植株后,继续对供体植株的生理状态、单核小孢子发育阶段、培养基的组分、受体材料的基因型、分离小孢子的方法以及小孢子培养环境条件等方面进行了详细的研究,最终获得了一套具有广适应性的油菜小孢子再生体系(Lichter,1982;ChoungandBeversdorf,1985)。国内的研究者对影响油菜小孢子培养胚诱导效率、秋水仙碱处理的加倍率及无菌苗直接移栽的存活率等诸多因素也进行了深入的研究,低温诱导胚状体和增加琼脂浓度能有效提高一次成苗率,避免了二次成苗弱小和错过夏繁季节(王汉中等,2004;杨立勇等,2005)。但是目前仍然存在个别基因型的材料小孢子培养中出胚率低,成苗后加倍率低的现状。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术提供了一种油菜小孢子高效培养方法,这套技术能够有效地提高目前难以出胚基因型材料的出胚效率、一次成苗率和加倍率。本专利技术提供了一种油菜小孢子高效培养方法,步骤包括:S1、取材、选蕾:选取生长良好的油菜花序处于单核靠边期的花蕾,灭菌,抽提花粉;S2、加倍培养:花粉用含有14~16mg/L秋水仙碱的NLN-16液体培养基稀释后在31.5-32.5℃条件下暗培养48h-72h;S3、胚诱导培养:将加倍培养后没有污染的NLN-16花粉悬浮液离心,留下沉淀的花粉用含有7~8mg/L秋水仙碱的NLN- ...
【技术保护点】
1.一种油菜小孢子高效培养方法,其特征在于:步骤包括:S1、取材、选蕾:选取生长良好的油菜花序中处于单核靠边期的花蕾,灭菌,抽提花粉;S2、加倍培养:花粉用含有14~16mg/L秋水仙碱的NLN‑16液体培养基稀释后在31.5‑32.5℃条件下暗培养48h‑72h;S3、胚诱导培养:将加倍培养后没有污染的NLN‑16花粉悬浮液离心,留下沉淀的花粉用含有7~8mg/L秋水仙碱的NLN‑13培养液稀释,稀释后的悬浮液分装入培养皿中,培养皿封口后在24~26℃的条件下进行暗培养14~16天,将悬浮培养液用NLN‑13培养基稀释,分装到新的培养皿中,培养9‑11天后查看是否有可见的白色颗粒状胚的形成,无可见胚形成则继续培养,有可见胚形成则将可见胚移至恒温摇床上进行暗培养,直至胚继续生长;S4、再生苗培养:将步骤S3所得的胚移入培养基进行再生苗诱导,13~17天换一次培养基进行继代培养,继代培养1~2次至长出再生苗;S5、成苗移栽:洗净再生苗根部的培养基后,用秋水仙碱溶液浸根,然后进行移栽。
【技术特征摘要】
1.一种油菜小孢子高效培养方法,其特征在于:步骤包括:S1、取材、选蕾:选取生长良好的油菜花序中处于单核靠边期的花蕾,灭菌,抽提花粉;S2、加倍培养:花粉用含有14~16mg/L秋水仙碱的NLN-16液体培养基稀释后在31.5-32.5℃条件下暗培养48h-72h;S3、胚诱导培养:将加倍培养后没有污染的NLN-16花粉悬浮液离心,留下沉淀的花粉用含有7~8mg/L秋水仙碱的NLN-13培养液稀释,稀释后的悬浮液分装入培养皿中,培养皿封口后在24~26℃的条件下进行暗培养14~16天,将悬浮培养液用NLN-13培养基稀释,分装到新的培养皿中,培养9-11天后查看是否有可见的白色颗粒状胚的形成,无可见胚形成则继续培养,有可见胚形成则将可见胚移至恒温摇床上进行暗培养,直至胚继续生长;S4、再生苗培养:将步骤S3所得的胚移入培养基进行再生苗诱导,13~17天换一次培养基进行继代培养,继代培养1~2次至长出再生苗;S5、成苗移栽:洗净再生苗根部的培养基后,用秋水仙碱溶液浸根,然后进行移栽。2.如权利要求1所述的油菜小孢子高效培养方法,其特征在于:步骤S4中,将步骤S3所得的子叶形胚移入B5固体培养基进行再生苗诱导,将步骤S3所得的非子叶形胚转移到B5固体培养基上,并加入仅覆盖胚状体的浅层液体NLN-13培养基,然后进行再生苗诱导。3.如权利要求2所述的油菜小孢子高效培养方法,其特征在于:步骤S4所述再生苗诱导为:于20℃,16hr光/8hr暗,2000LUX光强条件下培养,进行再生苗的诱导。...
【专利技术属性】
技术研发人员:万丽丽,王转茸,洪登峰,杨光圣,辛强,
申请(专利权)人:武汉市农业科学院,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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