无功能型垂体腺瘤检测装置和应用制造方法及图纸

本发明专利技术提供了一种无功能型垂体腺瘤检测装置，和应用。本发明专利技术装置针对待测样本的单核苷酸多态性位点rs2981582进行Massarray SNP分型检测。该位点和无功能型垂体瘤的发病具有显著相关性。此位点的不同遗传模型可以为无功能型垂体瘤的诊断提供一定的依据，具有较高的临床价值。本发明专利技术可以为无功能垂体瘤患者的早期诊断提供简便可靠的诊断方法。

Non functional pituitary adenoma detection device and Application

The invention provides a non functional pituitary adenoma detection device and application. The device detects Massarray SNP typing for the single nucleotide polymorphism site rs2981582 of the sample to be tested. This locus has a significant correlation with the incidence of nonfunctioning pituitary tumors. The different genetic models of this locus can provide certain basis for the diagnosis of nonfunctional pituitary adenoma and have high clinical value. The invention can provide a simple and reliable diagnostic method for the early diagnosis of patients with nonfunctioning pituitary adenoma.

【技术实现步骤摘要】
无功能型垂体腺瘤检测装置和应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种无功能型垂体腺瘤检测装置和应用。
技术介绍
垂体瘤是常见的能导致垂体激素分泌失衡的神经内分泌性肿瘤之一，其发病率排在脑胶质瘤和脑膜瘤之后，居颅内肿瘤发病率的第三位。流行病学研究表明，在一般人群中垂体瘤的发病率高达16.7％，可发生在任何年龄，以30-50岁者居多。垂体瘤中无功能腺瘤约占15％-54％。由于无功能垂体腺瘤无法体现出激素相关症候群，缺乏明显的相关临床症状，因此临床中早期诊断相当困难。垂体瘤患者可于起病后不同时期有轻重不等的临床表现。主要为肿瘤向鞍外、鞍上扩展压迫邻近组织出现头痛，以两颞部、额部、眼球后或鼻根部胀痛为主。视神经通路受压，引起不同类型的视野缺损，视力减退。由于垂体瘤许多症状和体征与一些常见疾病类似，因此许多患者常常被漏诊。发病隐匿，生长缓慢，当患者出现临床症状时，肿瘤已经呈侵袭生，压迫临近重要解剖结构，导致患者出现一系列的神经功能损害。除此之外，垂体瘤导致垂体前叶功能减退，在儿童期表现为身材矮小和性发育不全。成年人3/4的患者性腺功能减退，由于垂体促肾上腺皮质激素(AdrenoCorticoTropicHormone，ACTH)储备不足，出现肾上腺皮质功能衰减。如肿瘤影响到下丘脑及垂体后叶可引起尿崩症。约5％～10％患者发生卒中，部分病人出现急性垂体功能衰竭。随着手术方式的进步、新药的研制、放疗定位准确性的提高，术后并发症发生率逐渐降低，病情缓解率逐渐提高。但是垂体瘤的发病机制仍不清楚，早期诊断目前仍比较困难，如能在肿瘤发生初期做出明确的诊断，对于防止因肿瘤持续隐匿生长压迫所致的不可逆神经功能损害以及降低治疗风险均有着非常重要的意义。单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphisms，SNP)，是指在某一人群的正常个体基因组内特定核苷酸位置存在的单个不同碱基，且频率至少大于1％。由于SNP的低突变率、高密度、易于检测使SNP被认为是继第一代限制性片段长度多态性标记和第二代微卫星多态性标记之后的第三代遗传标记。人类目前已经发现了几百万个单核苷酸多态性位点，并且进一步研究了它在基因组上的频率和分布，利用SNP探索疾病的遗传基础也有了许多实例。最有代表性的是阿尔茨默氏病的遗传研究。利用SNP多态性的相关分析，研究人员发现APOE基因的ε4等位基因与阿尔茨海默病相关。除此以外是非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)，研究证明至少16个SNPs与NIDDM的发病密切相关，其中过氧化物酶体激活受体γ基因(PPARG)与NIDDM相关性最强。因此利用SNP找到确切造成疾病的突变基因，将以SNP为基础的研究应用于临床，这样才能提高疾病的漏检率，指导患者提前进行干预，减少疾病所带来的痛苦与经济负担。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种无功能型垂体腺瘤检测装置和应用。在阐述本
技术实现思路
之前，定义本文中所使用的术语如下：术语“SNP”是指：单核苷酸多态性。术语“PBS”是指：磷酸缓冲盐溶液。术语“TE”是指：TE缓冲液，由Tris和EDTA配制而成。术语“SBS”是指：十二烷基硫酸钠。术语“PCR”是指：聚合酶链式反应。术语“FGFR2”是指：成纤维生长因子受体2，又称CD332，由位于10号染色体上的FGFR2基因编码的人源蛋白。术语“rs2981582”是指：成纤维生长因子受体2(fibroblastgrowthfactorreceptor2,FGFR2)基因第2内含子rs2981582，其基因序列为：10621tcccagcactcatcgccacttaatgaacctgtttgtggagagtccacctggtgcctgcct10681ggctttaggaacccgcagcagtccgagtggtgtctggggtaagctgagctgctctgggaa为实现上述目的，本专利技术的第一方面提供了一种无功能型垂体腺瘤检测装置，所述装置针对待测样本的单核苷酸多态性位点rs2981582进行MassarraySNP分型检测，该装置包括以下组成机构：引物合成机构，优选地，所述引物为：正向引物序列为SEQIDNo:1，所述反向引物序列为SEQIDNo:2；样本检测定量机构；PCR反应机构；单碱基延伸反应机构；和计算机检测和分析机构。根据本专利技术第一方面的装置，其中，所述装置还包括选自以下的一种或多种组成机构：单核苷酸多态性位点rs2981582序列分析机构；引物设计机构；SAP纯化反应机构；和树脂纯化机构。优选地，所述引物合成机构包括但不限于：固相亚磷酰胺三酯合成机构，BioRP/OPC纯化机构，HPLC纯化机构，和/或PAGE纯化机构；所述样本检测定量机构包括但不限于：紫外分光光度机构，电泳机构；所述PCR反应机构包括但不限于：热启动PCR机构，降落PCR机构，和/或巢式PCR机构；所述SAP纯化反应机构包括但不限于：去磷酸化处理机构；所述单碱基延伸反应机构包括但不限于：SNaPshot机构；所述计算机检测和分析机构包括但不限于：统计学分析机构；所述单核苷酸多态性位点rs2981582序列分析机构包括但不限于：电泳机构；所述引物设计机构包括但不限于：基因序列获取机构；所述树脂纯化机构包括但不限于：离子交换树脂机构。本专利技术的第二方面提供了第一方面所述的检测装置的操作方法，所述方法包括：(1)通过引物合成机构合成引物；优选地，在引物合成前通过单核苷酸多态性位点rs2981582序列分析机构对序列进行分析，并通过引物设计机构进行引物设计；(2)通过样本检测定量机构进行DNA提取及质量检测；(3)通过PCR反应机构对利用步骤(1)合成的引物对步骤(2)提取的DNA进行扩增；优选地，在所述PCR反应后通过SAP纯化反应机构对产物进行碱性磷酸酶处理；(4)通过单碱基延伸反应机构对步骤(3)所得的产物进行单碱基延伸反应；优选地，在所述单碱基延伸反应后对产物进行树脂纯化；(5)通过计算机检测和分析机构对步骤(4)所得产物进行检测和分析。本专利技术的第三方面提供了一种单核苷酸多态性rs2981582的PCR引物和/或单碱基延伸引物，所述正向引物序列为SEQIDNo:1，所述反向引物序列为SEQIDNo:2。本专利技术的第四方面提供了一种检测无功能型垂体腺瘤试剂盒，所述试剂盒中包括：单核苷酸多态性rs2981582的多态性或基因型的物质；和基因分型试剂。根据本专利技术第四方面的试剂盒，其中，所述单核苷酸多态性rs2981582的多态性或基因型的物质为权利要求5所述的PCR引物和/或单碱基延伸引物。根据本专利技术第四方面的试剂盒，其中，所述基因分型试剂包括：dNTPMix，HotStarTaq，iPLEXTerminationmix，iPLEXEnzyme。本专利技术的第五方面提供了单核苷酸多态性rs2981582的多态性或基因型的物质、第一方面所述的检测装置、第三方面所述的引物或第四方面所述的试剂盒在制备用于检测无功能型垂体腺瘤易感性或用于筛查无功能型垂体腺瘤的产品中的应用。本专利技术的第六方面提供了单核苷酸多态性rs2981582的多态性或基因型的物质、第一方面所述的检测装置、第三方面所述的引物或第四方面所述的试剂盒在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无功能型垂体腺瘤检测装置，其特征在于，所述装置针对待测样本的单核苷酸多态性位点rs2981582进行Massarray SNP分型检测，该装置包括以下组成机构：引物合成机构，优选地，所述引物为：正向引物序列为SEQ ID No:1，所述反向引物序列为SEQ ID No:2；样本检测定量机构；PCR反应机构；单碱基延伸反应机构；和计算机检测和分析机构。

【技术特征摘要】
1.一种无功能型垂体腺瘤检测装置，其特征在于，所述装置针对待测样本的单核苷酸多态性位点rs2981582进行MassarraySNP分型检测，该装置包括以下组成机构：引物合成机构，优选地，所述引物为：正向引物序列为SEQIDNo:1，所述反向引物序列为SEQIDNo:2；样本检测定量机构；PCR反应机构；单碱基延伸反应机构；和计算机检测和分析机构。2.如权利要求1所述的检测装置，其特征在于，所述装置还包括选自以下的一种或多种组成机构：单核苷酸多态性位点rs2981582序列分析机构；引物设计机构；SAP纯化反应机构；和树脂纯化机构。3.如权利要求1或2所述的检测装置，其特征在于：所述引物合成机构包括但不限于：固相亚磷酰胺三酯合成机构，BioRP/OPC纯化机构，HPLC纯化机构，和/或PAGE纯化机构；所述样本检测定量机构包括但不限于：紫外分光光度机构，电泳机构；所述PCR反应机构包括但不限于：热启动PCR机构，降落PCR机构，和/或巢式PCR机构；所述SAP纯化反应机构包括但不限于：去磷酸化处理机构；所述单碱基延伸反应机构包括但不限于：SNaPshot机构；所述计算机检测和分析机构包括但不限于：统计学分析机构；所述单核苷酸多态性位点rs2981582序列分析机构包括但不限于：电泳机构；所述引物设计机构包括但不限于：基因序列获取机构；所述树脂纯化机构包括但不限于：离子交换树脂机构。4.权利要求1-3任一项所述的检测装置的操作方法，其特征在于，所述方法包括：(1)通过引物合成机构合成引物；优选地，在引物合成前通过单核苷酸多态性位点rs2981582序列分析机构对序列进行分析，并通过引物设计机构进行引物设计；(2)通...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱斌，赵志刚，康熙雄，高明，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京天坛医院，
类型：发明
国别省市：北京,11