The invention discloses a method for extracting adipose stem cells, which includes the steps of collecting adipose tissue, treating it with surfactant, treating it with adipose tissue protective agent, inoculation and culture, etc. The surfactant used includes the following components: hydroxyethyl starch 550.3 parts, lecithin 1 part, polysorbide 0. One part and 98.6 parts of PBS solution were used. The fat tissue protective agents used included the following components: trehalose 0.2 parts, reduced glutathione 0.05 parts, human albumin 2 parts, histidine 1 part, sorbic acid 0.025 parts, VC 0.5 parts and mixed sugar electrolyte injection 96.2 parts. The method can effectively solve the problems of low cell adherence rate and low cell extraction rate caused by the presence of fat droplets in the extraction process of adipose stem cells.
【技术实现步骤摘要】
一种脂肪干细胞提取方法
本专利技术涉及脂肪干细胞提取
,具体涉及一种脂肪干细胞提取方法。
技术介绍
脂肪源性干细胞(adiposetissue-derivedstemcells,ADSCs)是一类可以自我更新、繁殖的干细胞,具有一般干细胞的多向分化潜能和稳定的体外多代增殖能力。不仅能在不同诱导因子的作用下分化成为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、神经细胞等,而且还能分泌大量的、多类型的细胞因子及促进血管生成因子和凋亡因子,并能通过旁分泌作用于成纤维细胞,促进其分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤连蛋白,促进胶原合成,可发挥抗炎、抗氧化、抗衰老、损伤修复等作用。脂肪组织储量丰富且获取简便,且无伦理争议,是组织工程研究中理想的种子细胞来源之一。目前脂肪源干细胞的提取方式多采用机械法和酶消化、组织贴壁培养法,酶消化法和机械法等操作过程较繁琐,酶消化法消化时间长,消化后所得脂肪血管基质碎片(stromalvascularfraction,SVF)成分复杂;组织贴壁法操作步骤少,实验处理时间短,且不加入外源胶原酶、细胞因子等,成本较低,但在操作过程中脂肪油滴阻碍细胞贴壁,很难保证组织块全部贴壁,且换液时容易漂浮,细胞提取率不高。
技术实现思路
针对现有技术中的上述不足,本专利技术提供了一种脂肪干细胞提取方法,通过本专利技术提供的脂肪干细胞提取方法可有效解决脂肪干细胞在提取过程中由于脂肪油滴的存在导致细胞贴壁率低和细胞提取率低的问题。为实现上述目的,本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是:一种脂肪干细胞提取方法,包括以下步骤:(1)采集人体脂肪组织;(2))将采集的脂肪组织 ...
【技术保护点】
1.一种脂肪干细胞提取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)采集人体脂肪组织;(2))将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后离心;所述表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.3‑0.5份、卵磷脂0.5‑2.5份、聚山梨酯0.1‑0.2份和PBS溶液99.1‑99.8份;(3)取步骤(2)离心后所得的上层脂肪组织,用等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后离心;所述脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.1‑0.3份、还原型谷胱苷肽0.01‑0.1份、人血白蛋白1‑5份、组氨酸0.5‑1份、山梨酸0.02‑0.03份、Vc 0.1‑1份和混合糖电解质注射液93.5‑98.5份;(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,进行培养;(5)每隔3‑5天更换培养液,待细胞长至培养瓶的30%‑80%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶1‑2次,然后加入0.25%胰蛋白酶‑EDTA消化液消化2‑3min;(6)取消化后的细胞,按照5000‑8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%‑90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
【技术特征摘要】
1.一种脂肪干细胞提取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)采集人体脂肪组织;(2))将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后离心;所述表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉5500.3-0.5份、卵磷脂0.5-2.5份、聚山梨酯0.1-0.2份和PBS溶液99.1-99.8份;(3)取步骤(2)离心后所得的上层脂肪组织,用等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后离心;所述脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.1-0.3份、还原型谷胱苷肽0.01-0.1份、人血白蛋白1-5份、组氨酸0.5-1份、山梨酸0.02-0.03份、Vc0.1-1份和混合糖电解质注射液93.5-98.5份;(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,进行培养;(5)每隔3-5天更换培养液,待细胞长至培养瓶的30%-80%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶1-2次,然后加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化2-3min;(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-...
【专利技术属性】
技术研发人员:高雪华,海泉,
申请(专利权)人:成都清科生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:四川,51
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