一种用于替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物的组合物及其测定方法技术

本发明专利技术公开了一种用于替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物的组合物及其测定方法。由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D组成的组合物基本可以等效替代锥叶柴胡对mTOR基因表达的抑制效应，二者强度相当；该组合物可以用于等效替代锥叶柴胡制备mTOR基因表达抑制剂；本领域技术人员知道，抑制mTOR基因表达可以有效抑制脑胶质瘤细胞的增殖(miRNA‑99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力，中国药理学通报2018年4月第34卷第4期)，因此，该组合物可以用于等效替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物。

A composition for the treatment of cerebral glioma instead of Bupleurum chinense and its determination method

The invention discloses a composition for preparing a therapeutic drug for brain glioma instead of Bupleurum coniferae and a determination method thereof. Composition composed of saikosaponin F, saikosaponin G, saikosaponin C, saikosaponin A and saikosaponin D can basically replace the inhibitory effect of Bupleurum coniferae on the expression of mTOR gene with the same strength, and can be used as an equivalent substitute for Bupleurum coniferae to prepare mTOR gene expression inhibitor. Members know that inhibiting the expression of mTOR gene can effectively inhibit the proliferation of glioma cells (microRNA99b negatively regulates the ability of mTOR to inhibit the invasion of glioma cells, China Pharmacological Bulletin, April 2018, Vol. 34, No. 4). Therefore, the composition can be used as an equivalent substitute for Bupleurum coniferae to prepare therapeutic drugs for glioma.

【技术实现步骤摘要】
一种用于替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物的组合物及其测定方法
本专利技术涉及一种用于替代锥叶柴胡制备肿瘤治疗药物的组合物及其测定方法。
技术介绍
锥叶柴胡是伞形科柴胡属锥叶柴胡BupleurumbicauleHelm的干燥根，是收载于内蒙古中药材标准的地方习用药材，主产于内蒙古、东北地区。皂苷类成分为柴胡属药用植物的主要活性成分，现代药理学研究表明柴胡皂苷具有抗炎、镇痛镇静、保肝、抗抑郁、抗癌等作用。以根入药存在成分复杂、药效成分不明确、质量不易控制的缺陷。如果能够找到可以替代锥叶柴胡入药的组合物，就可以用化学勾兑品替代锥叶柴胡入药，成分清楚、质量可控。锥叶柴胡中主要含有柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡次皂苷I、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D等。目前，并不知道这些成分中哪几种组合可以基本替代锥叶柴胡的药效。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种用于替代锥叶柴胡制备肿瘤治疗药物的组合物及其测定方法。本专利技术的目的通过下面的技术方案实现：第一部分：前列腺癌等效组合物一种用于等效替代锥叶柴胡制备AMPK基因表达抑制剂的组合物：由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷I、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D组成。上述组合物在等效替代锥叶柴胡制备AMPK基因表达抑制剂方面的应用。一种用于等效替代锥叶柴胡制备前列腺癌治疗药物的组合物：由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷I、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D组成。上述组合物在等效替代锥叶柴胡制备前列腺癌治疗药物方面的应用。一种测定上述组合物中各化学成分在锥叶柴胡中含量的HPLC方法，包括如下色谱参数：色谱柱：C18填料色谱柱；流动相：乙腈(A)-水(B)；洗脱程序：0～10min，20％→30％A；10～20min，30％→40％A；20～45min，40％→60％A；45～55min，60％→90％A。优选地，采用Agilent1100液相色谱仪。优选地，采用InertSustainAQ-C18液相色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)。优选地，柱温为25℃。优选地，检测波长为210nm。优选地，流动相流速为1.0mL/min。第二部分：脑胶质瘤等效组合物一种用于等效替代锥叶柴胡制备mTOR基因表达抑制剂的组合物：由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D组成。上述组合物在等效替代锥叶柴胡制备mTOR基因表达抑制剂方面的应用。一种用于等效替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物的组合物：由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D组成。上述组合物在等效替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物方面的应用。一种测定上述组合物中各化学成分在锥叶柴胡中含量的HPLC方法，包括如下色谱参数：色谱柱：C18填料色谱柱；流动相：乙腈(A)-水(B)；洗脱程序：0～10min，20％→30％A；10～20min，30％→40％A；20～45min，40％→60％A；45～55min，60％→90％A。优选地，采用Agilent1100液相色谱仪。优选地，采用InertSustainAQ-C18液相色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)。优选地，柱温为25℃。优选地，检测波长为210nm。优选地，流动相流速为1.0mL/min。有益效果：(1)由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷I、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D组成的组合物基本可以等效替代锥叶柴胡对AMPK基因表达的抑制效应，二者强度相当；该组合物可以用于等效替代锥叶柴胡制备AMPK基因表达抑制剂；本领域技术人员知道，抑制AMPK基因表达可以有效抑制前列腺癌细胞的增殖(RNA干扰沉默AMPK对前列腺癌细胞生物学行为影响，中华肿瘤防治杂志2018年1月第25卷第2期)，因此，该组合物可以用于等效替代锥叶柴胡制备前列腺癌治疗药物；(2)由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷I、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D组成的组合物中，柴胡皂苷C对AMPK基因表达的独立抑制率是12％，其他4种成分对AMPK基因表达的组合抑制率是23％，二者之和(12％+23％＝35％)显著小于5种成分对AMPK基因表达的组合抑制率54％，这种1+1＜2的现象体现了该组合物中柴胡皂苷C与其他4种成分存在明显的协同抑制AMPK基因表达的效应；(3)由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D组成的组合物基本可以等效替代锥叶柴胡对mTOR基因表达的抑制效应，二者强度相当；该组合物可以用于等效替代锥叶柴胡制备mTOR基因表达抑制剂；本领域技术人员知道，抑制mTOR基因表达可以有效抑制脑胶质瘤细胞的增殖(miRNA-99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力，中国药理学通报2018年4月第34卷第4期)，因此，该组合物可以用于等效替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物；(4)由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D组成的组合物中，柴胡皂苷C对mTOR基因表达的独立抑制率是11％，其他4种成分对mTOR基因表达的组合抑制率是25％，二者之和(11％+25％＝36％)显著小于5种成分对mTOR基因表达的组合抑制率58％，这种1+1＜2的现象体现了该组合物中柴胡皂苷C与其他4种成分存在明显的协同抑制mTOR基因表达的效应。附图说明图1为锥叶柴胡药物及组合物对人前列腺癌PC-3细胞AMPK基因的表达水平的影响；图2为锥叶柴胡药物及组合物对脑胶质瘤U251细胞中mTOR基因的表达水平的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。一、实验材料锥叶柴胡药材收集自内蒙古海拉尔，粉碎后55℃烘干过夜，干燥保存备用。Agilent1100液相色谱仪；SartoriusBS210S型电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；SartoriusCP225D型电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)购自美国天地(TEDIA)；水为娃哈哈纯净水。RNAisoplus试剂、SYBRGreenPCRMasterMix和PrimeScriptRT试剂盒购自TaKaRa。二、实验方法1、柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡次皂苷I、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D在锥叶柴胡中的含量测定HPLC方法包括如下色谱参数：色谱仪：Agilent1100液相色谱仪色谱柱：InertSustainAQ-C18液相色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-水(B)；洗脱程序：0～10min，20％→30％A；10～20min，30％→40％A；20～45min，40％→60％A；45～55min，60％→90％A；柱温：25℃。检测波长：210nm。流动相流速：1.0mL/min。进样量：20μL。供试品溶液的制备：将锥叶柴胡药材粉碎，过40目筛，精密称取10g，置圆底烧瓶中，加入70％乙醇40mL，水浴回流2h，滤过，取滤液，重复3次。合并滤液，蒸去乙醇后干燥，得粉末。将粉末溶于250mL甲醇，过微孔滤膜，即得。精密量取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，用标准品外标法测定柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡次皂苷I、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D在锥叶柴胡中的含量。2、细胞培养人前列腺本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于等效替代锥叶柴胡制备mTOR基因表达抑制剂的组合物，其特征在于：由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D组成。

【技术特征摘要】
1.一种用于等效替代锥叶柴胡制备mTOR基因表达抑制剂的组合物，其特征在于：由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D组成。2.权利要求1所述的组合物在等效替代锥叶柴胡制备mTOR基因表达抑制剂方面的应用。3.一种用于等效替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物的组合物，其特征在于：由柴胡次皂苷F、柴胡次皂苷G、柴胡皂苷C、柴胡皂苷A和柴胡皂苷D组成。4.权利要求1所述的组合物在等效替代锥叶柴胡制备脑胶质瘤治疗药物方面的应用。5.一种测定权利要求1所述的组合物中各化学成分在锥叶柴胡中含量的HPLC方法，其特征在于，包括如下色谱参数：色谱柱：C18填料色谱柱；流动相：乙腈(A)-水(...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨真慧，
申请(专利权)人：杨真慧，
类型：发明
国别省市：江苏,32