3β,4β-环氧沉香呋喃用作Grp94抑制剂的用途制造技术

本发明专利技术公开了3β,4β‑环氧沉香呋喃用作Grp94抑制剂的用途。本发明专利技术发现，α‑山道年、β‑山道年对Grp94蛋白的抑制作用最强，其次为6‑甲氧基半棉酚、2‑O‑甲基异半棉酸内酯，最后为3β,4β‑环氧沉香呋喃、8β‑乙氧基苍术内酯Ⅱ。这6个化合物不但对Grp94蛋白抑制作用强，而且选择性强，对Hsp90α抑制作用极弱。3,4‑二羟基二氢沉香呋喃虽然与3β,4β‑环氧沉香呋喃结构接近，但是对Grp94、Hsp90α抑制作用均极弱。由此可见，6‑甲氧基半棉酚、2‑O‑甲基异半棉酸内酯、3β,4β‑环氧沉香呋喃、8β‑乙氧基苍术内酯Ⅱ、α‑山道年、β‑山道年为有效的Grp94选择性抑制剂。

Use of 3 beta, 4 beta epoxy incense furan as a Grp94 inhibitor

The invention discloses the use of 3 beta, 4 beta - Epoxy incense furan as a Grp94 inhibitor. The invention discovers that alpha and beta mountain years have the strongest inhibiting effect on Grp94 protein, followed by 6 methoxy semigossypol, 2 O methyl isohemicellulose lactone, and finally 3beta, 4beta epoxy agarofuran and 8beta ethoxy atractylolide II. These six compounds not only inhibit Grp94 protein strongly, but also selectively, and have very weak inhibitory effect on Hsp90alpha. Although the structure of 3,4_dihydroxydihydroagarofuran is similar to that of 3beta,4beta epoxy agarofuran, its inhibition on Grp94 and Hsp90a is very weak. Thus, 6 -methoxy-semigossypol, 2 O -methyl iso-semicotton lactone, 3 beta, 4 beta -epoxy agarofuran, 8 beta -ethoxy atractylolide II, a mountain year and beta mountain year are effective Grp94 selective inhibitors.

【技术实现步骤摘要】
3β,4β-环氧沉香呋喃用作Grp94抑制剂的用途
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及萜类化合物用作Grp94抑制剂的用途。
技术介绍
热休克蛋白Hsp90是细胞内高度保守的一类蛋白，其主要功能是辅助细胞内其他蛋白(客户蛋白)的成熟。Hsp90包括四个亚型，分别是细胞质中的Hsp90α/β，线粒体中的TRAP1和内质网中的Grp94。作为Hsp90的内质网亚型，Grp94的客户蛋白广泛参与炎症相关性疾病的发生发展中，如心肌炎、心肌肥大、结肠炎等。Grp94抑制剂在心肌炎、心肌肥大、结肠炎等炎症相关疾病的治疗方面具有巨大价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供萜类化合物用作Grp94抑制剂的用途。本专利技术技术方案如下：6-甲氧基半棉酚用作Grp94抑制剂的用途。6-甲氧基半棉酚用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为6-甲氧基半棉酚。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。2-O-甲基异半棉酸内酯用作Grp94抑制剂的用途。2-O-甲基异半棉酸内酯用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为2-O-甲基异半棉酸内酯。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。3β,4β-环氧沉香呋喃用作Grp94抑制剂的用途。3β,4β-环氧沉香呋喃用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为3β,4β-环氧沉香呋喃。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ用作Grp94抑制剂的用途。8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。α-山道年或β-山道年用作Grp94抑制剂的用途。α-山道年或β-山道年用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为α-山道年或β-山道年。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。有益效果：本专利技术发现，6-甲氧基半棉酚、2-O-甲基异半棉酸内酯、3β,4β-环氧沉香呋喃、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ、α-山道年、β-山道年为有效的Grp94选择性抑制剂。附图说明图1为实施例测试的化合物的化学结构；图2为各化合物对心肌肥大细胞中Grp94基因表达的影响；图3为各化合物对心肌肥大细胞氧化应激的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例介绍本专利技术实质性内容，但本专利技术的保护范围并不局限于此。实施例1：分子水平抑制试验一、实验材料6-甲氧基半棉酚(CAS登录号：50399-95-6)、2-O-甲基异半棉酸内酯(CAS登录号：61470-49-3)、3β,4β-环氧沉香呋喃(CAS登录号：149117-37-3)、3,4-二羟基二氢沉香呋喃(CAS登录号：141554-22-5)、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ(CAS登录号：113269-35-5)、α-山道年(CAS登录号：481-06-1)、β-山道年(CAS登录号：481-07-2)购买或自制，纯度不低于98％。各化合物的结构式如图1所示。二、实验方法化合物对Grp94、Hsp90α抑制活性采用荧光偏正的方法测试(参见文献CN108147978A)。通过测试化合物与荧光基团标记的格尔德霉素(GM-FITC)竞争性结合重组Grp94、Hsp90α蛋白的能力，反应化合物对Grp94、Hsp90α的抑制作用。测试中使用384孔黑板(型号为Corning#3575)，测试终体积选择60μL，所测试化合物和GM-FITC溶解于DMSO中备用。将化合物用assaybuffer倍比稀释12个浓度梯度后每个孔板加入20μL稀释好的化合物，每个孔板再加入20μL用assaybuffer稀释好的6nM/L(终浓度)的GM-FITC，再加入20μL用assaybuffer稀释好的15nM/L(终浓度)蛋白。每个化合物浓度设定两个附孔，每次实验设置空白对照(20μLGM-FITC+40μLassaybuffer)和阴性对照(20μLGM-FITC+20μL蛋白+20μLassaybuffer)。之后在4℃摇床上震摇孵育2h，用Synergy读板器扫板，激发波长设置为485nm，发射波长设置为535nm，结果GraphpadPrism6分析。根据不同浓度抑制率计算IC50值。三、实验结果各化合物对Grp94、Hsp90α蛋白的IC50值如表1所示。表1各化合物对Grp94蛋白的IC50值上述化合物中，α-山道年、β-山道年对Grp94蛋白的抑制作用最强，其次为6-甲氧基半棉酚、2-O-甲基异半棉酸内酯，最后为3β,4β-环氧沉香呋喃、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ。这6个化合物不但对Grp94蛋白抑制作用强，而且选择性强，对Hsp90α抑制作用极弱。3,4-二羟基二氢沉香呋喃虽然与3β,4β-环氧沉香呋喃结构接近，但是对Grp94、Hsp90α抑制作用均极弱。实施例2：细胞水平抑制试验一、实验材料6-甲氧基半棉酚(CAS登录号：50399-95-6)、2-O-甲基异半棉酸内酯(CAS登录号：61470-49-3)、3β,4β-环氧沉香呋喃(CAS登录号：149117-37-3)、3,4-二羟基二氢沉香呋喃(CAS登录号：141554-22-5)、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ(CAS登录号：113269-35-5)、α-山道年(CAS登录号：481-06-1)、β-山道年(CAS登录号：481-07-2)购买或自制，纯度不低于98％。各化合物的结构式如图1所示。1～2日龄Wistar乳鼠由南京江宁青龙山动物中心提供。DMEM、胎牛血清购自赛默飞世尔生物化学制品有限公司。Trizol、RT-PCR试剂盒购自Invitrogen公司；SYBRGreenPCRMasterMix试剂盒购自美国AppliedBiosystems公司。RT-PCR引物由上海生工设计合成。SOD、MDA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。二、实验方法1、心肌肥大细胞模型的构建及分组给药取Wistar乳鼠，75％乙醇皮肤消毒后剪除头部，开胸取心脏，放置装有DMEM的无菌玻璃平皿中洗净血污，每个心脏剪成大小均匀的组织块，将所有组织块转移至无菌离心管中，加0.25％胰酶在37℃恒温水浴中振摇消化、自然沉降。收集细胞悬液于离心试管中，加入等体积预冷细胞培养液(DMEM+10％FBS)混匀，经200目无菌不锈钢网滤过后装置另一离心管中，2500r/min离心2min，弃上清液，沉淀加入培养液吹打均匀制成细胞悬液，接种于细胞瓶中，按差速贴壁分离法预接种。2h后将未贴壁细胞吸出，在培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BRDU，0.1mmol/L)，48h后将培养液换为无血清的培养液，饥饿12h。心肌细胞随机分为：对照组只加入培养液，异丙肾上腺素10μM(模型)组、各化合物5μM与异丙肾上腺素10μM共同给药组，各组细胞给予相应物质后于培养箱中孵育48h，备用。2、RT-PCR法检测Grp94基因表达取各组细胞，Trizol法提取总RNA，逆转录获得cDNA，采用SYBRGreenPCRMasterMix试剂盒进行PCR反应本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.3β,4β‑环氧沉香呋喃用作Grp94抑制剂的用途。

【技术特征摘要】
1.3β,4β-环氧沉香呋喃用作Grp94抑制剂的用途。2.3β,4β-环氧沉香呋喃用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。3.一种治疗心肌肥...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁新华，徐嘉辰，
申请(专利权)人：袁新华，
类型：发明
国别省市：江苏,32