角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法技术

本发明专利技术公开了一种角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法，通过角担菌属菌株与兰科植物的原球茎/根状茎及幼苗建立共生关系促进兰科植物生长，所述角担菌属菌株为角担菌科角担菌属真菌，其拉丁文命名为：Ceratobasidium sp.，GenBank注册号为：MG669582，生物保藏号为CGMCC No.15373。通过角担菌属真菌对兰科植物生长的促进作用，为角担菌属真菌在兰科植物的高效繁殖以及野生兰科植物资源保护方面的应用奠定基础。

A method of promoting growth of Orchidaceae plants by C.

The invention discloses a method for promoting the growth of orchid plants by fungi of the genus Angiobasidium, which promotes the growth of orchid plants by establishing a symbiotic relationship between Angiobasidium strains and protocorms/rhizomes and seedlings of orchid plants. The Angiobasidium strains are fungi of the genus Angiobasidium, whose Latin name is Ceratobasidium sp. The registration number of GenBank is MG669582, and the biological preservation number is CGMCC No.15373. Through promoting the growth of Orchidaceae plants by the fungi of the genus Angiobasidium, it lays a foundation for the efficient reproduction of Orchidaceae plants and the application of wild Orchidaceae resources protection by the fungi of the genus Angiobasidium.

【技术实现步骤摘要】
角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法
本专利技术涉及一种兰科植物的培育方法，尤其涉及一种角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法。
技术介绍
兰科植物(Orchidaceae)属于被子植物门单子叶植物纲，全世界分布约有700属35000余种(Dressler，1993；Cribb，2003)，其种类数量仅次于菊科植物，位列第二大科(郎楷永，1994)。它外形优美，颜色鲜艳，极具观赏价值和药用价值。兰科植物有两个显著特点:一、兰科植物种子的胚仅由几十个细胞组成，分化不完全，自然萌发困难。二、兰科植物几乎都是菌根植物，自然生长状态下，无论绿叶兰还是非绿叶兰，在其生活史中—种子萌发阶段或不能进行光合自养的时期—都必须部分或完全依赖与真菌建立共生关系才能完成正常生命活动。在没有菌根真菌共生参与的情况下，兰科植物的种子萌发和个体发育过程中营养供应都将受到影响，无法完成正常的生长发育。因此，深入开展兰科植物共生菌根真菌的研究成为兰花众多相关研究中极为重要的内容(许璐，2015)。菌根(Mycorrhiza)是自然界植物在长期的生存过程中与真菌共同进化而形成的一种普遍存在的共生现象，通常把参与菌根形成的真菌称为菌根真菌(Mycorrhiza)。自1847年Ressiek发现鸟巢兰根内存在生活的菌丝体之后，不断有真菌与不同兰科植物共生的报道，兰科植物与真菌共生形成的菌根也因其特征独特而被独立划分为兰科菌根(Orchidmycorrhiza)(Harley,1989)。实质上，几乎所有的兰科植物都与真菌共生，菌根共生关系几乎伴随着兰科植物从种子萌发到开花结果的整个生活史，大部分成年的兰科植物仍需菌根真菌提供生长所需的碳水化合物及有机质(如氨基酸，维生素等)(陈心启等，2003；SmithandRead,2008)。已知的是，在兰花的生命周期里，不同的真菌可能被要求参与实现植物生命史，而菌根的定殖过程取决于真菌和兰花的种类，某种真菌可以与不同生长阶段的兰花建立共生(Bonnardeauxetal.,2007)。兰科植物的种子微小、缺少胚乳及其他营养组织，因此缺乏与种子萌发相关的酶、维生素和无机离子等物质，种子不能通过利用种子自身营养来支持萌发(ArdittiandGhani，2000)。一直以来，科研工作者都不断地研究兰科植物种子共生萌发机制，试图保护珍稀濒危兰花品种。为了探知能与兰科植物种子共生的真菌种类，以提高兰科植物种子萌发率，加快兰科植物利用有性繁殖的方式扩繁，研究者尝试将各种兰科植物种子和真菌用特殊的培养基或培养方式进行离体培养，模拟生境特征，在离体条件下建立共生关系(Ardittietal.，1990；Rasmussen，1995)。目前还没有找到能与兰科植物种子共生、有效促进兰科植物生长的真菌种类。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术的角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法，通过角担菌属菌株与兰科植物建立共生关系促进兰科植物生长，所述角担菌属菌株为角担菌科角担菌属真菌，其拉丁文命名为：Ceratobasidiumsp.，GenBank注册号为：MG669582，生物保藏号为CGMCCNo.15373。由上述本专利技术提供的技术方案可以看出，本专利技术实施例提供的角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法，将角担菌属真菌与兰科植物共生培养，通过角担菌属真菌对兰科植物生长的促进作用，为角担菌属真菌在兰科植物的高效繁殖以及野生兰科植物资源保护方面的应用奠定基础。具体实施方式下面将对本专利技术实施例作进一步地详细描述。本专利技术实施例中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。本专利技术的角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法，其较佳的具体实施方式是：通过角担菌属菌株与兰科植物建立共生关系促进兰科植物生长，所述角担菌属菌株为角担菌科角担菌属真菌，其拉丁文命名为：Ceratobasidiumsp.，GenBank注册号为：MG669582，生物保藏号为CGMCCNo.15373。包括以下任一种方案：所述角担菌属菌株与硬叶兰原球茎和/或幼苗建立共生关系，促进硬叶兰原球茎和/或幼苗的生长；所述角担菌属菌株与建兰根状茎和/或幼苗建立共生关系，促进建兰根状茎和/或幼苗的生长。所述角担菌属菌株与铁皮石斛原球茎和/或幼苗建立共生关系，促进铁皮石斛原球茎和/或幼苗的生长。本专利技术以角担菌属真菌为研究对象，利用燕麦培养基，将角担菌属真菌与硬叶兰、建立和铁皮石斛原球茎/根状茎和幼苗共培养，探讨角担菌属真菌对兰科植物生长的促进作用，为角担菌属真菌在兰科植物的高效繁殖以及野生兰科植物资源保护方面的应用奠定基础。具体实施例：1、试验材料(1)植物材料：硬叶兰(Cymbidiummannii)原球茎和幼苗、建兰(Cymbidiumensifolium)根状茎和幼苗和铁皮石斛(Dendrobiumofficinale)原球茎和幼苗。(2)真菌材料：本实验室分离获得1株角担菌属真菌(Ceratobasidiumsp.)。2、试验方法(兰科植物原球茎/幼苗与角担菌属真菌共生试验)(1)培养基的配置共生培养基(燕麦培养基OMA)的配置：取燕麦片磨成粉状，分别取三个梯度的燕麦粉，配成0.5g/L、1.0g/L、2.0g/L、3.0g/LOMA的溶液。去离子水煮沸1h，过滤，琼脂8.0g，滤液加去离子水定容至1000mL，高温灭菌。真菌培养基的配置：200g去皮马铃薯，切成0.5～1cm见方的小块，加去离子水800mL煮30min后，用4～5层纱布过滤得到滤液，并在滤液中加入20g葡萄糖和8g琼脂后，再用去离子水定容至1000mL，高温灭菌后，待温度降至50摄氏度时加入硫酸链霉素至终浓度50mg/L。(2)角担菌属真菌的鉴定实验室分离获得1株角担菌属真菌Cej3。挑取真菌菌丝于PDA培养基中，28℃恒温暗培养7～10d。对活化后的真菌进行形态特征观察；挑取菌株边缘的菌丝接种于铺有醋酸纤维素膜的PDA培养基上，28℃恒温暗培养7～10d，液氮速冻后充分研磨，利用OMEGA试剂盒提取DNA，PCR特异扩增ITS区，PCR扩增引物为ITS1F：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′；ITS4R：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′；PCR产物送至公司进行测序，将序列文件用软件DNAMAN进行校对后，通过在线BLAST(网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov)在GenBank中进行序列比对。(3)角担菌属真菌与兰科植物原球茎/根状茎共培养在超净工作台中，用无菌镊子将繁殖好的未长出真叶的兰科植物根状茎(原球茎)均匀摆在预先铺有中间空洞半径为4cm的无菌滤纸片的OMA培养基上。处理组中央接种真菌琼脂块，对照组接种无菌琼脂块，处理组和对照组各设置6皿重复，于23±2℃，光照强度为1600～2000lx，14h光/10h暗下培养。同时各选取15个根状茎(原球茎)，洗净残留培养基，吸干水分后分别计算单个鲜重、干重、直径和体积的平均值(重复3次，精确到0.0001g)。(4)角担菌属真菌与兰科植物幼苗共培养兰科植物组培苗经生根培养后，选取根长在0.5～1cm的健壮幼苗各本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法，其特征在于，通过角担菌属菌株与兰科植物建立共生关系促进兰科植物生长，所述角担菌属菌株为角担菌科角担菌属真菌，其拉丁文命名为：Ceratobasidium sp.，GenBank注册号为：MG669582，生物保藏号为CGMCC No.15373。

【技术特征摘要】
1.一种角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法，其特征在于，通过角担菌属菌株与兰科植物建立共生关系促进兰科植物生长，所述角担菌属菌株为角担菌科角担菌属真菌，其拉丁文命名为：Ceratobasidiumsp.，GenBank注册号为：MG669582，生物保藏号为CGMCCNo.15373。2.根据权利要求1所述的角担菌属真...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘蕾，李潞滨，杨前宇，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11