一种快速鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的方法及引物技术

本发明专利技术公开了一种快速鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的方法及引物，采用特定的SSR引物来检测西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种纯度，即EXGF:5’‑CATTTCCGTTTCCATTTTCTTCAC‑3’和反向引物序列为EXGR:5’‑AAGTAACATCAAGCGATTCGCCAT‑3’。本发明专利技术鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的方法在5‑6天之内即可完成种子纯度鉴定工作，且具有准确、稳定、简单快速、低成本、便于推广等特点，能够替代传统西瓜新品种杂交种鉴定方法；且本发明专利技术纯度鉴定方法可在‘鄂西瓜16号’的制种、繁种、经销企业推广应用。

A method for rapid identification of hybrid seed purity of Watermelon Variety 'e watermelon 16' and primers

The present invention discloses a method and a primer for rapid identification of the purity of hybrid seeds of watermelon variety'Exiguan 16'. A specific SSR primer is used to detect the purity of watermelon hybrid'Exiguan 16', i.e. EXGF:5'8209 3 '. The method for identifying the purity of hybrid seeds of watermelon variety'Exigua 16'can complete the identification of seed purity within 5 to 6 days, and has the characteristics of accuracy, stability, simplicity, rapidity, low cost and easy popularization, and can replace the traditional method for identifying new watermelon varieties; and the purity identification method of the present invention can be used for identifying the purity of hybrid seeds of watermelon varieties. It is popularized and applied in the production, breeding and distribution enterprises of \huigua 16\.

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的方法及引物
本专利技术属于农业的瓜菜育种与应用
，涉及西瓜杂交种纯度鉴定方法及引物，具体涉及一种快速鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的方法及引物。
技术介绍
西瓜(Citrulluslanatus(Thunb.)Matsum.&Nakai)是一种重要的经济作物。我国每年西瓜种植面积和产量均居世界第一位。因此，西瓜品种种子纯度对种植者来说是必需保证的。‘鄂西瓜16号’是由武汉市农业科学院作物所(原武汉市农业科学研究所)培育的高产优质杂交西瓜品种，具有优秀的田间农艺性状。该品种在杂交制种的过程中，母本和父本分别种植在不同的区域，雌花开花前，母本需要人工去雄，开花期再授以父本花粉来完成杂交过程，从而产生杂交种。如果母本去雄不彻底或漏去雄，花粉就可能落到雌花柱头上产生自交种，都将会极大地影响制种纯度。因此，西瓜杂交种必需进行种子纯度鉴定。传统的西瓜杂交种纯度鉴定方法是将杂交种种植后，通过对成株进行形态学的比较来鉴定，‘鄂西瓜16号’的全生育期需要98-102天左右，该方法鉴定一般需要1至2个月，其周期长、工作量大、难度大本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的引物，其特征在于，包括以下引物序列：正向引物序列为EXGF:5’‑CATTTCCGTTTCCATTTTCTTCAC‑3’；反向引物序列为EXGR:5’‑AAGTAACATCAAGCGATTCGCCAT‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的引物，其特征在于，包括以下引物序列：正向引物序列为EXGF:5’-CATTTCCGTTTCCATTTTCTTCAC-3’；反向引物序列为EXGR:5’-AAGTAACATCAAGCGATTCGCCAT-3’。2.一种快速鉴定西瓜品种‘鄂西瓜16号’杂交种子纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)西瓜基因组SSR引物的开发：设计出跨越SSR位点的PCR引物，其正向引物序列为EXGF:5’-CATTTCCGTTTCCATTTTCTTCAC-3’和反向引物序列为EXGR:5’-AAGTAACATCAAGCGATTCGCCAT-3’；(2)西瓜品种基因组DNA的提取：提取西瓜新品种‘鄂西瓜16号’样品的幼嫩叶片基因组DNA，并对提取的DNA样品进行质量检测；(3)PCR扩增反应体系及程序：在PCR管内加入SSR引物、TaqDNA聚合酶、缓冲液(含Mg2+)、‘鄂西瓜16号’样品基因组DNA和灭菌双蒸水，利用DNA分析仪检测时使用荧光标记的引物，混匀后置于PCR仪上进行扩增；(4)PCR扩增产物的毛细管电泳荧光检测分析：将步骤(3)中6-FAM和HEX荧光标记的PCR产物用超纯水稀释30倍，TAMRA和ROX荧光标记的PCR产物稀释10倍；分别取等体积的上述4种稀释后溶液混合，从混合液中吸取1μL加入到DNA分析仪专用深孔板中；板中各孔分别加入0.1μLLIZ500分子量内标和8.9μL去离子甲酰胺；将样品在PCR仪上95℃变性5min，取出，立即置于碎冰上，冷却10min以上；瞬时离心10s后置放到DNA分析仪上；使用DNA分析仪的片段分析软件，读出每个样品的等位变异大小数据；将EXGF/EXGR引物的亲本和杂交F1毛细管电泳数据制成指纹图谱；(5)待测样品种子纯度鉴定：利用EXGF/EXGR引物，将待测样品种子按步骤(4)制备出指纹图谱后，以父母本样品DNA的特异峰作为...

【专利技术属性】
技术研发人员：程维舜，曾丹黎，张安华，李煜华，祝菊红，蔡翔，王萍，阳永学，赵志远，
申请(专利权)人：武汉市农业科学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42