一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖‑壳聚糖微球及其制备方法与应用。本发明专利技术采用EDC/NHS的方法合成透明质酸寡糖‑壳聚糖偶联产物，制备过程简单，成本较低；通过乳化交联法制备微球，制备过程简单，微球表面光滑，获得形态好、无黏连、粒径分布均匀的微球，可以实现微球制备的批量化生产。本发明专利技术对包载多西紫杉醇的微球进行了包括载药率、包封率、药物释放以及相关的细胞实验等，为临床应用奠定基础，制备的DTX‑OHAS‑CTS微球对抑制肿瘤细胞有良好的效果，可作为治疗肿瘤的靶向药物载体。

Hyaluronic acid oligosaccharide chitosan microspheres loaded with docetaxel and preparation method and application thereof

The invention relates to a hyaluronic acid oligosaccharide chitosan microsphere coated with docetaxel, a preparation method and application thereof. The invention adopts EDC/NHS method to synthesize hyaluronic acid oligosaccharide chitosan coupling product, the preparation process is simple and the cost is low; the preparation process is simple, the surface of the microspheres is smooth, and the microspheres with good morphology, non-adhesion and uniform particle size distribution are obtained by emulsion cross-linking method, which can realize the batch production of microspheres preparation. . The microspheres encapsulated with docetaxel were prepared including drug loading rate, encapsulation rate, drug release and related cell experiments, which lay a foundation for clinical application.

【技术实现步骤摘要】
一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种包载多西紫杉醇(Docetaxel,DTX)的透明质酸寡糖-壳聚糖微球及其制备方法与应用，属于药物载体制备领域。
技术介绍
近年来，天然高分子材料制备的药物载体被广泛应用于疾病的治疗中，如透明质酸(Hyaluronicacid,HA)和壳聚糖(Chitoan,CTS)。透明质酸是一种由葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖的双糖单位重复连接构成的酸性粘多糖，是细胞外基质的主要成份之一，发挥着一定的生理功能，如在皮肤中储存水分而起保湿作用，经研究发现，在实体肿瘤的边缘组织富集HA，同时肿瘤细胞表面高度表达HA受体CD44，HA通过受体介导信号传导途径对肿瘤的生长、粘附、转移起着重要的作用。壳聚糖是一种天然的高分子阳离子聚合物，具有良好的生物相容性、壳透气性好，并且无毒，可以提高药物的稳定性。但是，HA作为药物载体的稳定性差，易被降解，CTS作为药物载体的载药率较低；因此，将HA和CTS交联，既可以增加载体稳定性，提高载药率，又可以保留HA对肿瘤细胞的靶向性，以及CTS缓释的作用。中国专利文献CN104840428A(申请号201410050110.9)公开了一种载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球及其制备方法和应用，该专利技术所提供的载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球，通过在保护剂作用下离子聚合、离心沉淀、纯化、冻干而得，使用的透明质酸分子量为60000Da或120000Da。中国专利文献CN105694120A(申请号201410699380.2)公开了一种壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的制备方法，采用壳寡糖和透明质酸作为原料，通过聚合物凝聚法合成壳寡糖透明质酸复合纳米微粒，该方法中使用的透明质酸的分子量为10000-50000Da。已报道透明质酸-壳聚糖微球大都采用大分子透明质酸，但是大分子的透明质酸作为肿瘤药物载体的靶向材料时靶向性弱，原因是细胞表面CD44受体与相对分子质量大的透明质酸是多价结合，会掩盖CD44受体的结合位点，导致CD44受体失活。透明质酸寡糖(OHAS)是相对分子质量＜5000Da、单糖残基数量为2～30(一般为4～16)的透明质酸分子片段，属于小分子多糖，其性质与普通透明质酸有很大的不同，甚至具有完全相反的作用。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球及其制备方法。本专利技术的透明质酸寡糖-壳聚糖微球靶向性强，制备方法过程简单，成本较低，制备的微球产品形态好、无黏连、粒径分布均匀。本专利技术还提供所制备的包载多西紫杉醇的透明质酸-壳聚糖微球的应用。术语说明：MES缓冲液：由2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物配制的酸性缓冲液，浓度为0.05mol/L，pH在4左右。二级水：25℃时电阻率>1MΩ*cm的水，用于制备常用试剂溶液、制备缓冲液。本专利技术的技术方案如下：一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球，所述透明质酸寡糖的分子量为700～5000Da，所述包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球的粒径为5～20μm。进一步优选的，所述包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球的粒径为6～15μm。一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球的制备方法，包括步骤：(1)向MES缓冲液中依次加入透明质酸寡糖、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌30min后加入壳聚糖，室温下反应，反应结束后，收集沉淀，经洗涤冷冻干燥后得透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1～3；(2)按比例称取步骤(1)制备的透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物和多西紫杉醇，所述透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物和多西紫杉醇的质量比为3～7:1；以HAc溶液为水相，液体石蜡为油相，三聚磷酸钠溶液为交联剂，将透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物溶于HAc溶液中，多西紫杉醇溶于甲醇中，两者混合，依次加入液体石蜡和三聚磷酸钠溶液，乳化交联后，经洗涤冷冻干燥制得包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，MES缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH为4。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述透明质酸寡糖的分子量为700-5000Da。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述透明质酸寡糖溶解后的浓度为1～5mg/mL。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述壳聚糖的黏度为30mpa.s，分子量为50000Da，脱乙酰度大于90％。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述透明质酸寡糖和壳聚糖的质量比为1:1～3。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶解后的浓度为4～8mg/mL。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1～2。根据本专利技术优选的，步骤(1)中透明质酸寡糖、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺均在前一种试剂完全溶解后再加入。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述室温下反应的过程包括：室温下反应15～20h，收集上清，调节pH至7.10，继续反应4h后，调节pH至7.50，5500rpm/min离心5min，收集沉淀。根据本专利技术优选的，步骤(1)中，所述洗涤采用的是二级水。根据本专利技术优选的，步骤(2)中，所述透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物溶于HAc溶液中的浓度为30～40mg/mL，所述多西紫杉醇溶于甲醇中的浓度为20～50mg/mL。根据本专利技术优选的，步骤(2)中，所述透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物和多西紫杉醇的质量比为4～6:1。根据本专利技术优选的，步骤(2)中，所述液体石蜡的质量分数为2～5％，所述HAc溶液的质量分数为1～5％，所述三聚磷酸钠溶液的质量分数为3～7％。根据本专利技术优选的，步骤(2)中，所述洗涤采用的是石油醚和异丙醇交替洗涤。本专利技术制备的包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球在制备肿瘤靶向性药物中的应用。本专利技术的有益效果：1.本专利技术采用透明质酸寡糖作为靶向识别材料，透明质酸寡糖不仅能够完全与细胞表面的CD44受体结合，而且还会与内源性大分子HA竞争性的结合受体CD44，因此，可以提高对肿瘤细胞的靶向性。而大分子的HA作为药物载体的靶向材料时靶向性弱，原因是细胞表面CD44受体与相对分子质量大的HA是多价结合，会掩盖CD44受体的结合位点，导致CD44受体失活。2.本专利技术采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)的方法合成透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物，制备过程简单，成本较低；通过乳化交联法制备载药微球，制备过程简单，微球表面光滑，获得形态好、无黏连、粒径分布均匀的微球，可以实现微球制备的批量化生产。3.本专利技术采用的透明质酸寡糖是来自机体组织本身的纯天然材料，无毒，无刺激，性质稳定，具有很好的生物相容性，并且可识别肿瘤细胞表面的CD44受体，具有靶向性。所用的壳聚糖是自然界存在的唯一的碱性多糖，无毒，具有体内生物降解性和生物相容性。4.本专利技术对载药微球进行了包括载药率、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖‑壳聚糖微球，其特征在于，所述透明质酸寡糖的分子量为700～5000Da，所述包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖‑壳聚糖微球的粒径为5～20μm。

【技术特征摘要】
1.一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球，其特征在于，所述透明质酸寡糖的分子量为700～5000Da，所述包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球的粒径为5～20μm。2.一种包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，包括步骤：(1)向MES缓冲液中依次加入透明质酸寡糖、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌30min后加入壳聚糖，室温下反应，反应结束后，收集沉淀，经洗涤冷冻干燥后得透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1～3；(2)按比例称取步骤(1)制备的透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物和多西紫杉醇，所述透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物和多西紫杉醇的质量比为3～7:1；以HAc溶液为水相，液体石蜡为油相，三聚磷酸钠溶液为交联剂，将透明质酸寡糖-壳聚糖偶联产物溶于HAc溶液中，多西紫杉醇溶于甲醇中，两者混合，依次加入液体石蜡和三聚磷酸钠溶液，乳化交联后，经洗涤冷冻干燥制得包载多西紫杉醇的透明质酸寡糖-壳聚糖微球。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，MES缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH为4。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述透明质酸寡糖、壳聚糖包括以下条件中任一项或多项：i.透明质酸寡糖的分子量为700-5000Da；ii.透明质酸寡糖溶解后的浓度为1～5mg/mL；iii.壳聚糖的黏度为30mpa.s，分子量...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈宗刚，邹凤娟，顾国峰，郭忠武，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37