一种交叉淋巴毒实验的方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种交叉淋巴毒实验的检测方法，它包含如下步骤：(1)取移植供者静脉抗凝全血以及移植受者的血清，从移植供者静脉抗凝全血中分离供者淋巴细胞；(2)取供者淋巴细胞液，染色标记，调整细胞浓度；(3)取冻干补体，溶解；(4)取5支反应管，依次加入供者淋巴细胞、生理盐水、阳性血清、受者血清这4种试剂中的2种或者3种，混匀，静置，再加入第5种试剂兔补体，再混匀，静置；(5)染色，上样。本发明专利技术还公开了一种交叉淋巴毒实验的检测试剂盒。本发明专利技术方法和试剂盒的毒性低、成本低廉，检测准确度高，临床应用前景优良。

Method and kit for cross lymphatic toxicity test

The invention discloses a detection method for cross lymphatic toxicity experiment, which comprises the following steps: (1) taking the whole blood of the donor vein and the serum of the recipient, separating the donor lymphocytes from the whole blood of the donor vein; (2) taking the donor lymphocyte fluid, staining the marker, and adjusting the cell concentration; (3) taking the freeze-dried supplement. Body, dissolve; (4) Take five reaction tubes, in turn, add donor lymphocyte, saline, positive serum, recipient serum of two or three of these four reagents, mix, static, and then add the fifth reagent rabbit complement, then mix, static; (5) stain, sample. The invention also discloses a detection kit for cross lymphatic toxicity test. The method and the reagent box have the advantages of low toxicity, low cost, high detection accuracy and good clinical application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种交叉淋巴毒实验的方法和试剂盒
本专利技术涉及一种交叉淋巴毒实验的方法和试剂盒。
技术介绍
交叉淋巴细胞毒实验即补体依赖的细胞毒实验(CDC)，用于同种异体器官移植前，判断受者对供者有无预存抗体。受者体内预存抗体可能由于多次输血、妊娠、二次移植等原因产生。如果受者体内有细胞毒抗体，可能在移植后引起超急性排斥反应，造成移植失败，因此在移植前检查受者血清中有无抗供者淋巴细胞抗体，是预防超急性排斥反应所必需的实验。1969年,Patel和Terasaki专利技术了补体依赖的细胞毒实验技术,用于肾移植前急性和超急性排斥反应的筛查,直到今天,交叉淋巴细胞毒实验一直是移植前检查供体特异性抗HLA抗体的金标准。该实验技术也经历了许多改进，如抗人球蛋白-补体依赖性细胞毒法(AHG-CDC)以及除去血清中的IgM、利用流式细胞技术标记补体等方法改进实验的灵敏度和准确性。目前最常用的交叉淋巴细胞毒实验是荧光染色检测方法，其原理是：供者活性淋巴细胞与受者血清共同孵育时，如果受者血清含有针对供者活性淋巴细胞特异性抗HLA循环抗体，则抗体上的结合到淋巴细胞抗原上形成抗原抗体复合物，在加入兔补体后激活一系列补本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种交叉淋巴毒实验的检测方法，其特征在于：步骤如下：(1)取移植供者静脉抗凝全血以及移植受者的血清，从移植供者静脉抗凝全血中分离供者淋巴细胞；(2)取供者淋巴细胞液，染色标记，调整细胞浓度；(3)取冻干补体，溶解；(4)取5支反应管，按照下表依次加入前4种试剂中的2种或者3种，混匀，静置，再加入第5种试剂兔补体，再混匀，静置；

【技术特征摘要】
1.一种交叉淋巴毒实验的检测方法，其特征在于：步骤如下：(1)取移植供者静脉抗凝全血以及移植受者的血清，从移植供者静脉抗凝全血中分离供者淋巴细胞；(2)取供者淋巴细胞液，染色标记，调整细胞浓度；(3)取冻干补体，溶解；(4)取5支反应管，按照下表依次加入前4种试剂中的2种或者3种，混匀，静置，再加入第5种试剂兔补体，再混匀，静置；(5)染色，上样：每管加入台盼蓝染色液或者中性红染色液，反应，将染好色的反应产物加入定量分析板中，用光学显微镜观察结果。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，分离供者淋巴细胞的方法是：取移植供者静脉抗凝全血，加入生理盐水稀释，然后加入装有淋巴细胞分离液的试管内离心，吸取白膜层，加入PBS溶液混匀洗涤，离心，去上清，再加入PBS溶液混匀洗涤，离心，去上清，加入PBS溶液悬浮，即可。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述生理盐水以及前两次PBS溶液用量与抗凝全血等体积；最后一次PBS溶液为抗凝全血体积的0.05倍；所述离心的转速是1500～1800RPM。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述染色采用台盼蓝染色液或者中性红染色液染色；所述染色液的用量与细胞液等体积；调整细胞液中的细胞浓度为2×109个/L。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨正林，刘小琦，
申请(专利权)人：四川省人民医院，
类型：发明
国别省市：四川,51