肝病NK细胞功能的检测评估方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种肝病NK细胞功能的检测评估方法。该检测评估方法包括以下步骤：(1)利用单个细胞通过流式细胞仪，使用不同的抗细胞因子或NK细胞表面受体的抗体与细胞表面或胞内特定标记组合，检测相应的细胞因子分泌或表面受体水平；(2)利用大数据生物统计学分析技术，对每一个免疫因子造成整体免疫功能的贡献、作用及影响进行判读，对所用免疫因子对免疫功能的作用形成最终对NK细胞整体免疫功能判读。本发明专利技术还提供了一种肝病NK细胞功能检测试剂盒，其包含以下多种表面分子抗体：CD56、NK‑IFN‑γ、NK‑TNF‑α、NK‑G2D、NK‑p46、NK‑p30、NK‑p44、NK‑KIRs、NK‑LAIRs、NK‑Perforin、NK‑GrazymeB、NK‑G2A、NK‑PD‑1、NK‑Tim3。本发明专利技术的检测评估方法和试剂盒能够有效检测NK细胞总体功能。

Method and kit for detecting and evaluating NK cell function in liver diseases

The invention discloses a method for detecting and evaluating the function of NK cells in liver diseases. The assay consists of the following steps: (1) detection of cytokine secretion or surface receptor levels using a single cell through flow cytometry using a combination of antibodies against cytokines or NK cell surface receptors and specific cell surface or intracellular markers; (2) detection of the corresponding cytokine secretion or surface receptor levels using large data biometric analysis techniques, The contribution, function and influence of each immune factor on the overall immune function were interpreted. The function of each immune factor on the immune function was interpreted as the final result of the overall immune function of NK cells. The invention also provides a liver disease NK NK NK cell function detection kit, which comprises the following surface molecular antibodies: CD56, NK IFN 820gam, NK 820TNF 820alpha, NK 820G2D, NK 820p46, NK 820p30, NK 820p44, NK 820KIRs, NK 820LAIRs, NK 820LAIRs, NK 820Perforin, NK 820GrazymeB, NK G2A, G2A, NK NK NK 820A, NK 820NK 820NK 820NK 820p44, NK 820p46, NK 820p30, NK 820p44, NK 820KKIRs, NK 820KKKIRs, NK 820perfororiTim 3. The detection and evaluation method and kit of the invention can effectively detect the overall function of NK cells.

【技术实现步骤摘要】
肝病NK细胞功能的检测评估方法及试剂盒
本专利技术属于生物医学和免疫检验领域，涉及一种肝脏疾病相关的自然杀伤细胞(NK)总体功能检测和评估方法，以及用于该方法的试剂盒。
技术介绍
肝病严重危害人类健康，免疫途径是肝病诊疗最重要的策略之一。我国是肝病大国，目前有接近2亿肝病，包括乙型肝炎、丙型肝炎、酒精肝、脂肪肝、药物性肝炎、自身免疫性肝炎；从肝炎－肝硬化－肝癌的疾病三部曲严重威胁人类健康，我国每年因为肝病死亡达60万，每年用于肝病相关的医药费用高达2千亿，造成严重的经济社会负担和医疗资源的耗竭。免疫系统在人体健康维护、抗衰老、抗肿瘤起着关键作用，其功能包括：(1)免疫防御：识别和清除外来入侵和已经入侵的病原体，包括病毒、细菌、污染物质及疾病的攻击。(2)免疫监视：识别和清除体内自身来源的突变细胞，这些突变细胞是潜在的肿瘤细胞；识别和清除体内衰老细胞、死亡细胞或其他有害成分或异己成分。(3)免疫调节：保持免疫系统内环境稳定，通过修补免疫细胞来修补受损器官和组织。免疫系统由免疫细胞组成，包括：1)以自然杀伤细胞(NK)为主的天然免疫；2)以T细胞和B细胞为主的适应性免疫。NK细胞在清除肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝病NK细胞功能的检测评估方法，其特征在于，其包括：(1)利用单个细胞通过流式细胞仪，使用不同的抗细胞因子和NK细胞表面受体的抗体与细胞表面或胞内特定标记组合，检测出相应的细胞因子分泌或表面受体，根据不同的标记获取结果；所述抗体为以下多种：CD56、NK‑IFN‑γ、NK‑TNF‑α、NKG2D、NK‑p46、NK‑p30、NK‑p44、NK‑KIRs、NK‑LAIRs、NK‑Perforin、NK‑GrazymeB、NKG2A、NK‑PD‑1、NK‑Tim3；(2)利用大数据生物统计学分析技术，对每一个免疫因子对形成整体免疫功能的贡献、作用及影响进行判读，根据数据模型，对所用细胞因子...

【技术特征摘要】
1.一种肝病NK细胞功能的检测评估方法，其特征在于，其包括：(1)利用单个细胞通过流式细胞仪，使用不同的抗细胞因子和NK细胞表面受体的抗体与细胞表面或胞内特定标记组合，检测出相应的细胞因子分泌或表面受体，根据不同的标记获取结果；所述抗体为以下多种：CD56、NK-IFN-γ、NK-TNF-α、NKG2D、NK-p46、NK-p30、NK-p44、NK-KIRs、NK-LAIRs、NK-Perforin、NK-GrazymeB、NKG2A、NK-PD-1、NK-Tim3；(2)利用大数据生物统计学分析技术，对每一个免疫因子对形成整体免疫功能的贡献、作用及影响进行判读，根据数据模型，对所用细胞因子和NK细胞表面受体对免疫功能的作用形成最终对NK细胞整体免疫功能判读；其中，利用流式细胞技术对肝病大样本中总体NK细胞群以及NK细胞亚群数量和功能进行鉴定，获得每个免疫因子的具体数值，并利用生物大数据分析，得到此系列每一个NK免疫因子对NK细胞免疫总体功能的综合贡献，最终获得准确体现NK细胞免疫功能的指标，从而检测NK细胞的总体功能。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：PBMC分离培养；流式细胞术检测NK细胞表面和胞内分子或受体。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PBMC分离培养包括以下步骤：1)采EDTA抗凝血20ml；离心，500g，8min，升9，降9，分离血浆，标记，血浆-80℃保存待用，血细胞层留用；将血细胞移至50ml离心管，加PBS至约30ml，并吹打均匀；2)取4支15ml离心管，每管加4.5ml淋巴细胞分离液，然后将离心管倾斜45度角，用巴氏吸管将血液在距淋巴细胞分离液界面1cm处沿试管壁缓慢加至分离液上面；3)无刹车密度梯度离心，25℃，450g，25min，升5，降0；取出试管，见其分为以下四层，上层为PBS及部分剩余血浆，下层为红细胞及粒细胞，中层为淋巴细胞分离液，在分离液与血浆层之间可见白膜层，吸管小心吸取白膜层细胞，以1：5体积比，用PBS洗涤细胞2次，500g，8min；4)沉淀细胞加入培养基重悬，用2％的苔盼蓝染色，证实活细胞数在95％以上；调密度为1*107/ml。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述流...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾首杰，
申请(专利权)人：璞晞广州生物免疫技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44