一种特氏盐芽孢杆菌S61及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特氏盐芽孢杆菌(Halobacillus trueperi)S61及其应用，该菌株已于2016年9月12日保存在广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：60078。该菌株及其菌悬液或次级代谢产物对镰刀菌引起的病害具有显著拮抗作用，且材料来源广泛，成本低，对环境安全。

【技术实现步骤摘要】
一种特氏盐芽孢杆菌S61及其应用
本专利技术属于微生物
，其涉及一株来源于察尔汗盐湖的嗜盐菌及其生防应用，尤其涉及一种特氏盐芽孢杆菌S61及其应用。
技术介绍
马铃薯属于茄科茄属一年生草本植物，营养丰富，含有较高的蛋白质、维生素和无机盐。马铃薯种植面积不断扩大，病害的发生也越来越严重。其中，镰刀菌干腐病是一种重要的马铃薯贮藏期病害之一，常导致马铃薯块茎品质降低和商品薯率大幅下降，严重影响其食用价值和经济价值，成为限制马铃薯产业发展的主要因素。目前主要采用化学杀菌剂对其进行控制，但以化学防治为主的措施不但不能遏制土传病害上升的趋势，而且还会抑制土壤中的有益微生物；化学药剂的频繁使用会导致病原菌产生抗药性、污染环境和危害人类健康。生物防治因其对环境、生态和人类健康安全的优点，在世界各国得到了广泛的重视并发挥着越来越重要的作用。寻找生防菌资源，利用植物根际有益促生细菌的拮抗作用，探索控制土传病害的生物防治途径，对农业可持续发展具有重大意义。目前国内学者所研究获得的马铃薯干腐病生防菌株包括：萎缩芽胞杆菌(Bacillusatrophaeus)、多产色链霉菌1(Streptomycespolychromogenes1)、球孢链霉菌球孢亚种(Streptomycesglobisporussubsp.Globisporus)、锈赤蜡黄链霉菌(Streptomycesrubiginosohelvlus)、放线菌DO1、一株枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)、俄罗斯木霉(Trichodermarossicum)、球孢链霉菌(Streptomycesglobisporus)。此外，部分学者就马铃薯非亲和菌株粉红单端孢(Trichotheciumroseum)菌丝细胞壁提取物对马铃薯干腐病的拮抗作用进行了研究。同时，部分学者对拮抗马铃薯干腐病的机理机制进行了进一步的研究，研究表明寡雄蛋白处理能提高与马铃薯块茎组织苯丙烷代谢相关的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸脱氢酶(CAD)、肉桂酸羟化酶(C4H)和4－香豆酰－辅酶A连接酶(4CL)的活性及相关基因的表达；同时抗性物质总酚、类黄酮及木质素含量也因寡雄蛋白处理而提高。截至目前，关于特氏盐芽孢杆菌的研究屈指可数，许帅等人对天津海底吹填淤泥的研究表明：特氏盐芽孢杆菌对黑麦草种子的萌发无显著影响，但对黑麦草植物生长有促生作用。此外，陆文静等人所专利技术的一种可降解木质纤维的微生物复合菌剂中对特氏盐芽孢杆菌也有所涉及。在此基础上，本研究从盐湖湖泥极端环境中分离、纯化得到特氏盐芽孢杆菌，并将其运用于马铃薯窖藏病害的防治的突破，使得生物防治马铃薯窖藏病害成为可能，同时为盐湖等极端环境资源的利用提供了依据，奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株从察尔汗盐湖湖水中分离纯化得到的特氏盐芽孢杆菌(Halobacillustrueperi)S61及其生防应用，旨在解决的技术问题是针对目前马铃薯干腐病生物防治技术的不足。本专利技术具体通过以下技术方案实现：本专利技术提供的一种特氏盐芽孢杆菌(Halobacillustrueperi)S61，该菌株已进行保藏，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心；保藏地址：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼；保藏日期：2016年9月12日；保藏编号：GDMCCNO：60078。本专利技术特氏盐芽孢杆菌(Halobacillustrueperi)S61采用稀释平板富集培养法进行分离和纯化得到。革兰氏阳性菌，球形，有荚膜，周生鞭毛，大小为0.6-0.8μm×0.4-0.6μm。本专利技术特氏盐芽孢杆菌S61的16SrDNA的序列为：SEQIDNO：1。本专利技术所述的特氏盐芽孢杆菌S61在植物病害生物防治中的应用，所述的植物病害为镰刀菌引起的病害，所述的病害具体为干腐病、枯萎病、根腐病等，所述的植物为茄科或禾本科作物，优选为马铃薯。优选的，所述的特氏盐芽孢杆菌S61的菌悬液或次级代谢产物在植物病害生物防治中的应用也在本专利技术的保护范围内。所述的特氏盐芽孢杆菌S61菌悬液的制备方法为：在培养1d后的菌落边缘取少许菌苔接种到有100mlATCC213改良培养液的培养瓶中，每瓶接一菌针，37℃、200r/min-1培养2h，用血球计数板计数为：1.0×108cfu/ml。所述的特氏盐芽孢杆菌S61次级代谢产物的制备方法为：在培养1d后的菌落边缘取菌苔接种到有800mlATCC213改良培养液的培养瓶中，每瓶用培养液洗入一培养皿菌，37℃、200r/min-1培养5d，培养液经4000r/min离心15min得上清液，萃取有机相旋转蒸发得浸膏，用无菌水将浸膏配制为20mg/ml，用0.25μm微孔水性滤膜过滤得母液。所述的ATCC213改良培养液为：MgSO4·7H2O10g，CaCl2·2H2O0.2g，KCl5g，蛋白胨2.5g，酵母膏10g，NaCl30g，琼脂粉12g，蒸馏水至1000ml，pH7.2-7.4。本专利技术所述的特氏盐芽孢杆菌S61在作为制备防治作物病害药物中的应用，通过常规的液体或固体培养，获得包括细菌菌体培养物，通过常规的液体发酵生产，然后加入表面活性剂如分散剂、稳定剂、湿润剂、粘结剂、消泡剂、崩解剂、抗冻剂等中的一种或几种，或吸附载体按一定比例混合后，制备成可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮剂、悬乳剂、水乳剂或微乳剂；所述的作物包括茄科和禾本科作物，优选为马铃薯。当然本专利技术所述的特氏盐芽孢杆菌S61的菌悬液或次级代谢产物在作为制备防治作物病害药物中的应用也在本专利技术的保护范围内。本专利技术特氏盐芽孢杆菌S61防治作物病害的方法也属于本专利技术的保护范围，该方法是在植物生长过程中进行喷雾处理；所述喷雾为该特氏盐芽孢杆菌S61的菌悬液或发酵液或代谢产物或制备的农药制剂。本专利技术的有益效果为：本专利技术针对马铃薯收获后窖藏过程中严重影响马铃薯品质的干腐病为靶标，从察尔汗盐湖湖水中分离筛选到一种特氏芽孢杆菌属菌株S61，其本身可显著拮抗马铃薯干腐病病原菌，且菌悬液和次级代谢产物均对马铃薯干腐病病原菌有较好的防效，同时对马铃薯安全。本专利技术能够有效拮抗和控制马铃薯干腐病病原菌，且原料来源广泛，成本低，对环境安全。附图说明图1是本专利技术实施例特氏盐芽孢杆菌S61经Biolog系统鉴定后的结果；图2是本专利技术实施例特氏盐芽孢杆菌S61本身与马铃薯干腐病病原真菌的培养皿对峙培养结果；图3是本专利技术实施例特氏盐芽孢杆菌S61次级代谢产物氯仿萃取物拮抗病原真菌青9A-4-13的结果；图4是本专利技术实施例特氏盐芽孢杆菌S61次级代谢产物氯仿萃取物拮抗病原真菌青9A-5-2的结果；图5是本专利技术实施例特氏盐芽孢杆菌S61次级代谢产物氯仿萃取物拮抗病原真菌青9A-5-10的结果；图6是本专利技术实施例特氏盐芽孢杆菌S61次级代谢产物氯仿萃取物拮抗病原真菌65B-2-6的结果。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术技术方案作进一步的说明，以下所述，仅是对本专利技术的较佳实施例而已，并非对本专利技术做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更或改型为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与改型，均落在本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特氏盐芽孢杆菌S61，其特征在于，该菌株已于2016年9月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：60078。

【技术特征摘要】
1.一种特氏盐芽孢杆菌S61，其特征在于，该菌株已于2016年9月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNO：60078。2.根据权利要求1所述的一种特氏盐芽孢杆菌S61，其特征在于，所述的特氏盐芽孢杆菌S61的16SrDNA的序列为：SEQIDNO：1。3.权利要求1所述的特氏盐芽孢杆菌S61在植物病害生物防治中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的植物病害为镰刀菌引起的病害，所述的病害具体为干腐病、枯萎病或根腐病。5.权利要求1所述的特氏盐芽孢杆菌S61的菌悬液或次级代谢产物在植物病害生物防治中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的特氏盐芽孢杆菌S61菌悬液的制备方法为：在培养1d后的菌落边缘取少许菌苔接种到有100mlATCC213改良培养液的培养瓶中，每瓶接一菌针，37℃、200r/min-1培养2h，用血球计数板计数为：1.0×108cfu/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈硕，李玮，郭青云，王舰，
申请(专利权)人：青海省农林科学院，
类型：发明
国别省市：青海,63