一株生防芽孢杆菌鉴定及应用制造技术

本发明专利技术公开了一株生防芽孢杆菌鉴定及应用，属于农业微生物技术领域。本发明专利技术的生防芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)YJC‑9，该菌株已于2018年04月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M 2018196；该生防菌可防治小麦纹枯病、小麦赤霉病、油菜菌核病、草莓灰霉病、辣椒根腐病、菜豆枯萎病、烟草赤星病菌，是一种具有广谱抗性的生防细菌，在农业病害防治中具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株生防芽孢杆菌鉴定及应用
本专利技术属于农业微生物
，主要涉及一株贝莱斯芽孢杆菌及其快速鉴定方法和在防治小麦纹枯病等方面的应用。
技术介绍
小麦是我国主要粮食作物，每年的种植面积在3-4亿亩之间，总产量超过1亿吨，位居全球首位。近年来，随着小麦面积不断扩大，商品全球化、品种更新放缓、农业耕作方式及高产栽培技术推广等因素，小麦纹枯病在我国小麦种植区发生程度日益严重，尤以小麦主产区华北平原、长江流域和川贵等地发生频繁并呈逐年加重趋势，严重时病苗可达50％以上，产量损失30-40％，发生面积有数千万亩之多，给我国的粮食生产安全造成了很大影响。小麦纹枯病是一种土传病害，该病主要由土传病原真菌禾谷丝核菌(Rhizoctoniacerealis)和立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起，在小麦整个生育期的各个阶段均可造成危害，小麦受侵染后出现烂芽、病苗枯死、花秆烂茎、枯株白穗等症状。该病危害广泛，除危害小麦外，还可危害大麦、黑麦、高粱、水稻、玉米、棉花、烟草、大豆、花生、小白菜、芝麻等多种农作物。目前，化学药剂仍是生产上防治小麦纹枯病最有效的手段，主要通过药剂拌种和内吸性杀菌剂喷洒来解决问题。但是化学药剂的常年施用，弊端和问题日益凸显，病原菌出现了抗药性不但进一步加剧化学农药用量的风险，而且化学药剂造成环境污染和土壤板结酸化，且对人类健康的危害也已大大超出了预期。因此，筛选并研究高活性的环境友好型生防菌剂来防治生物或非生物胁迫，是解决化学农药用量长期居高不下、农产品农药残留的有效途径，也是我国保障粮食质量安全、生态环境安全和降低面源污染及保护生物多样性的有效途径，是实现“双减”等行之有效的研究方向。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一株对禾谷丝核菌等病原菌具有强拮抗的生防菌。为了实现本专利技术的目的，专利技术人经过大量实验和不懈努力，终于获得了一株生防芽孢杆菌，该菌株从小麦健康植株根际土壤分离纯化而得，根据其菌落形态特征、16srDNA、gryA和rpoB分子鉴定和系统进化树分析，快速准确鉴定其为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)，该菌株对小麦纹枯病等病害具有很好的抑制作用。本专利技术分离得到的贝莱斯芽孢杆菌与已经报道的贝莱斯芽孢杆菌不同的是，本专利技术是从健康小麦根际土壤分离的一种广谱生防菌，其对多种农业致病菌具有很好的抑制作用，包括小麦纹枯病菌、小麦赤霉病菌、油菜菌核病菌、草莓灰霉病菌、辣椒根腐病菌、菜豆枯萎病菌、烟草赤星病菌。本专利技术人将分离得到的生防芽孢杆菌命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)YJC-9，该菌株已于2018年04月11日保藏于中国湖北省武汉市洪山区武汉大学中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO：M2018196。需要说明的是，本专利技术分离得到的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)YJC-9具有如下形态学特征(图6)：形态学特征：贝莱斯芽孢杆菌YJC-9为乳白色，半透明，边缘光滑规则，菌体分泌物可呈云雾状扩散，油镜下观察，革兰氏染色为阳性，杆状，菌体聚在一起呈链状排列，芽孢椭圆形，中生。另外，本专利技术的第二个目的在于提供一株生防芽孢杆菌的应用，即上述的生防芽孢杆菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)YJC-9在防治农业病害中的应用。以及，上述生防芽孢杆菌在制备防治农业病害的生物农药和/或生物有机肥中的应用。优选地，所述的农业病害包括小麦纹枯病、小麦赤霉病、油菜菌核病、草莓灰霉病、辣椒根腐病、菜豆枯萎病和烟草赤星病菌。最后，本专利技术的第三个目的在于提供一株生防芽孢杆菌的快速鉴定方法，该方法通过16srDNA结合gryA和rpoB基因对贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)YJC-9进行PCR扩增鉴定；其中16srDNA引物为：27bf5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；1492br5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’；gyrA引物为：gyrA-42f*5’-CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT-3’；gyrA-1066r*5’-CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT-3’；rpoB引物为：rpoB-2292f5’-GACGTGGGATGGCTACAACT-3’；rpoB-3354r5’-ATTGTCGCCTTTAACGATGG-3’；PCR条件为：94℃3min；94℃45s，55℃30s，72℃2min，35个循环；72℃延伸5min，4℃停止。与现有技术相比，本专利技术的优点和显著进步性在于：1、贝莱斯芽孢杆菌YJC-9对包括禾谷丝核菌在内的7种病原真菌有不同程度的抑制效果，是一种具有广谱抗性的生防细菌，在农业病害防治中具有良好的应用前景。2、贝莱斯芽孢杆菌YJC-9盆栽试验对抑制小麦纹枯病有很好的防治效果，相对防效达到86.15％，病害减轻了65.67％，可应用于小麦纹枯病的防治，利于我国的粮食——小麦的安全生产。附图说明图1为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9对小麦纹枯病菌平板抑菌效果，左边为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9对小麦纹枯病菌平板抑菌效果，右边为对照。图2为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9的16SrDNA基因序列系统发育树。图3为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9的gryA基因序列系统发育树。图4为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9的rpoB基因序列系统进化树。图5为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9的对6种病原真菌的抑制效果，其中A、C、E、G、I、K分别为YJC-9对Fusariumgraminearum、Sclerotiniasclerotiorum、Botrytiscinerea、Fusariumsolani、Fusariumoxysporum、Alternariaalternata拮抗效果；B、D、F、H、J、L依次为上述对照病原菌。图6为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9的形态学特征，左图为贝莱斯芽孢杆菌YJC-9在NA培养基上生长的菌落形态，右图为油镜下观察的形态。具体实施方式以下是本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案做详细描述，但是不用来限制本专利技术的保护范围。实施例1：菌株的分离和拮抗作用检测收集健康十堰市六里坪镇岳家川村小麦根际土壤10g,用灭过菌的研钵研碎后放入装有90ml无菌去离子水的三角瓶中震荡悬浮10min，从三角瓶中吸取1ml悬液放入装有9ml无菌去离子水的灭菌管中继续震荡悬浮5min，然后将悬液按10倍梯度进一步稀释浓度为10-4、10-5、10-6三个浓度。将这三个浓度的悬液放入烘箱中设置80℃，15min来选择可以产生芽孢的细菌。将三个浓度的液体分别吸取0.1ml放入加了环乙酰亚胺(50μg/ml)的1/10TSA平板上用涂布棒涂抹均匀，每个浓度各涂三个平板。将涂好的平板放入恒温培养箱中30℃培养3d。禾谷丝核菌在PDA培养基培养5天后，长满9mm培养皿，用5mm灭菌打孔器在培养好的病原菌培养基上打孔，将菌饼挑入新PDA平板中心位置，然后选择形态颜色不同的细菌菌落在距离菌饼3cm处接种，在PDA培养基上进行对峙培养，以仅接种纹枯病菌的PDA平板为对照，筛选具有拮抗活性较好的细菌(图1)，命名为YJC-9。实施例2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株生防芽孢杆菌，其特征在于：该生防芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)YJC‑9，其保藏号为CCTCC NO：M 2018196。

【技术特征摘要】
1.一株生防芽孢杆菌，其特征在于：该生防芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)YJC-9，其保藏号为CCTCCNO：M2018196。2.权利要求1所述的生防芽孢杆菌在防治农业病害中的应用。3.如权利要求2所述的生防芽孢杆菌在防治农业病害中的应用，其特征在于：所述的农业病害包括小麦纹枯病、小麦赤霉病、油菜菌核病、草莓灰霉病、辣椒根腐病、菜豆枯萎病和烟草赤星病。4.权利要求1所述的生防芽孢杆菌在制备防治农业病害的生物农药和/或生物有机肥中的应用。5.如权利要求4所述的生防芽孢杆菌在制备防治农业病害的生物农药和/或生物有机肥中的应用，其特征在于：所述的农业病害包括小...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凡，蔡高磊，江爱明，柯尊伟，赵昌松，王锋尖，胡学明，彭敏，彭宣和，刘慧鸣，欧阳友香，
申请(专利权)人：十堰市农业科学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42