The present invention provides a method for simultaneous determination of 5 kinds of fat-soluble vitamins and its application. The method comprises the following steps: (1) analyzing the pretreated samples by liquid chromatography-mass spectrometry; (2) calculating the concentration of 5 kinds of fat-soluble vitamins in the samples to be measured according to the standard curve; and the fat-soluble vitamins are described in detail. The biotin comprises retinol, alpha tocopherol, beta tocopherol, gamma tocopherol and delta tocopherol. The chromatographic column in the liquid chromatography/mass spectrometer adopts gradient elution method, and the gradient elution mobile phase adopts ammonium formate/acetonitrile mixture. The recovery rate, detection limit, precision and other technical indexes of the method of the invention meet the requirements, and the isotope marker is used as the internal standard, so that the target compound has strong recognition specificity, high sensitivity, good accuracy, short analysis time, and the method of the invention has good reproducibility and small error.
【技术实现步骤摘要】
一种同时检测5种脂溶性维生素的方法及应用
本专利技术属于分析检测
，涉及一种同时检测5种脂溶性维生素的方法及应用。
技术介绍
维生素A和维生素E是人体必需的脂溶性维生素，主要来源于食物，维生素A和维生素E的缺乏会对人体的生长发育造成影响。维生素A主要为视黄醇，参与合成视紫质，对人体的生长、繁殖、造血和免疫等多种生理功能的多效性行为具有作用(AlbarhaniAA,CollierF,GreavesRF,etal.VitaminsDandAcanbesuccessfullymeasuredbyLC-MS/MSincordblooddilutedplasma.ClinicalBiochemistry,2015,48:1105；VillamorE,FawziWW.EffectsofvitaminAsupplementationonimmuneresponsesandcorrelationwithclinicaloutcomes.ClinicalMicrobiologyReviews,2005,18:446.)，缺乏维生素A可能导致幼童失明、麻疹和腹泻，同时与孕妇高妊...
【技术保护点】
1.一种同时检测5种脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将预处理的样品采用液相色谱‑质谱联用仪进行分析；(2)根据标准曲线，计算得到待测样品中5种脂溶性维生素的浓度；其中，所述脂溶性维生素包括视黄醇、α‑生育酚、β‑生育酚、γ‑生育酚和δ‑生育酚；所述液相色谱‑质谱联用仪中的色谱柱采用梯度洗脱方式，所述梯度洗脱的流动相采用甲酸铵‑乙腈混合液。
【技术特征摘要】
1.一种同时检测5种脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将预处理的样品采用液相色谱-质谱联用仪进行分析；(2)根据标准曲线，计算得到待测样品中5种脂溶性维生素的浓度；其中，所述脂溶性维生素包括视黄醇、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚；所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱采用梯度洗脱方式，所述梯度洗脱的流动相采用甲酸铵-乙腈混合液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱采用岛津C18柱，规格为5μm×2.1μm×50mm；优选地，所述色谱柱的温度为24-26℃，优选为25℃；优选地，所述梯度洗脱的时间为5-7min，优选为6min；优选地，所述梯度洗脱过程中甲酸铵与乙腈的体积比为1:(1-49)；优选地，所述流动相的流速为0.4-0.6mL/min，优选为0.5mL/min；优选地，所述色谱柱的进样量为6-8μL，优选为7μL。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述液相色谱-质谱联用仪中的质谱采用多反应监测模式；优选地，所述质谱的气帘气压为32-38psi，优选为35psi；优选地，所述质谱的碰撞气压为5-10psi，优选为8psi；优选地，所述质谱的离子源喷雾电压为5200-5800V，优选为5500V。4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述质谱的离子源喷雾气压为45-55psi，优选为50psi；优选地，所述质谱的离子源辅助加热气压为45-55psi，优选为50psi；优选地，所述质谱的加热温度为500-600℃，优选为550℃；优选地，所述质谱的入口电压为8-12V，优选为10V。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述预处理具体包括以下步骤：(1’)将内标工作液加入待测样品，稀释后加入有机溶剂，离心去除蛋白质；(2’)加入萃取剂，离心取上清液；(3’)将步骤(2’)所述上清液氮气吹干，加入复溶溶液，混匀离心，得到的上清液即为预处理的样品。6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1’)所述内标工作液为五氘代视黄醇和六氘代α-生育酚的混合液；优选地，所述五氘代视黄醇的浓度为0.1-0.15μg/mL，优选为0.125μg/mL；优选地，所述六氘代α-生育酚的浓度为1-1.5μg/mL，优选为1.25μg/mL；优选地，步骤(1’)所述有机溶剂包括乙醇、甲醇或乙腈中的任意一种或至少两种的组...
【专利技术属性】
技术研发人员：王玲，申童，王凯，张莉，周亚琼，
申请(专利权)人：北京爱普益医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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