一种返魂草酚酸成分及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种返魂草酚酸成分及其制备方法与应用。所述返魂草提取物是返魂草水提物经D101大孔树脂分离得到的醇洗部分，其总酚酸纯度为70.42‑76.43％。通过化学与生物学方法评价返魂草酚酸成分的抗氧化、抗炎、抗菌能力，结果显示，返魂草酚酸成分在人支气管上皮细胞的氧化损伤模型中治疗作用显著。该返魂草酚酸成分可用于人或动物的各种细菌性疾病、肺内感染、癌症以及各种原因引起的机体炎症、氧化应激等多种疾病的治疗或辅助治疗，具有广阔的应用前景。

A phenolic acid composition of rethymol and its preparation and Application

The invention provides a reflux phenolic acid composition and a preparation method and application thereof. The total phenolic acid purity of the extract is 70.42_76.43%. Chemical and biological methods were used to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and antimicrobial activities of the constituents. The results showed that the constituents had a significant therapeutic effect on the oxidative damage model of human bronchial epithelial cells. It can be used in the treatment or adjuvant therapy of various bacterial diseases, pulmonary infections, cancers, inflammation, oxidative stress and other diseases in human or animal, and has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种返魂草酚酸成分及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种返魂草酚酸成分，并提供其在机体抗氧化、抗炎、抗菌领域的用途，属于生物医药领域。
技术介绍
返魂草(SenecionisCannabifoliiHerba，SCH)又名青菀、紫倩等，为菊科千里光属多年生草本植物。返魂草中主要包括黄酮类化合物、酚酸类化合物、生物碱类化合物、挥发油类化合物及微量元素等，其中，酚酸具有抗氧化，抗肿瘤，抗炎和杀菌等生物功能。返魂草已被报道具有抗病毒、抗菌、抗急性肺损伤、抗炎、调节免疫、解热抗胃溃疡等活性，因此被广泛应用于止咳平喘、肺部急性炎症、慢性炎症的治疗。返魂草颗粒是由返魂草为原料经水提得到的的单方制剂，如中国专利技术专利(CN200810051281.8)所公开的方法得到的提取物成分复杂且酚酸浓度低，其水溶液具有一定粘稠性，影响对抗氧化活性成分及部位和其作用机理的探讨。而利用D101大孔树脂分离返魂草水提物中的醇洗部分可以达到富集酚酸类物质的目的，并去除返魂草水提物中分子量较大且水溶性较强的物质，为返魂草酚酸成分抗氧化、抗炎和抗菌活性研究提供可行性。支气管炎、肺损伤和肺内感染是临床上最常见的呼吸系统疾病，可由细菌、病毒、真菌、寄生虫等致病微生物，以及放射线、吸入性异物等理化因素引起，如果不及时治疗会呈现反复加重的现象甚至会转变成肺结核、呼吸衰竭或肺坏死，并且肺内炎症、支气管炎症中往往伴随着氧化应激现象的发生，并且二者互相促进从而加重病情。目前，在临床上治疗肺内感染主要采用阿奇霉素和头孢左氧氟沙星等抗生素进行消炎治疗，长期使用会引起机体耐药性增加并过敏反应、机体菌群失调和继发性感染等副作用，打破机体的免疫系统和抗氧化系统平衡。因此，筛选和研究具有抗氧化、抗炎和抗菌功能的天然提取物，在支气管炎症和肺内感染等疾病的治疗中具有重要的意义。另外，氧化应激参与细胞及机体的炎症、凋亡、免疫调节等一些类生理活动，特别是免疫系统细胞更易因氧化应激遭受损伤，导致机体稳态平衡的破坏，氧化应激反应是炎症反应的一部分，其会导致中性粒细胞炎性浸润，进而诱导局部炎症。因此筛选和研究同时具有抗氧化、抗炎功能的天然植物提取物在炎症治疗中具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一种返魂草酚酸成分及在抗氧化、抗炎和抗菌中的应用。所述的返魂草提取物是返魂草水提物经D101大孔树脂分离得到的醇洗部分，其总酚酸纯度为70.42-76.43％，可以达到分离并富集返魂草中的酚酸类成分的效果。并且通过化学与生物学方法评价返魂草酚酸成分的抗氧化、抗炎、抗菌能力。本专利技术技术方案如下：一种返魂草酚酸成分，是将返魂草水提液用截流分子量为5000-30000的膜滤过滤后所得滤液上D101大孔树脂，采用50-80％乙醇(优选55-65％乙醇，更优选60％乙醇)洗脱所得的醇洗部分。进一步地，所述返魂草酚酸成分其总酚酸纯度为70.42-76.43％。进一步地，对返魂草酚酸成分进行成分分析，鉴定出21种酚酸类成分，分别为：没食子酸、同型原儿茶酸、原儿茶酸、绿原酸、对羟基苯乙酸、尿苷、咖啡酸、(异)柠檬酸、2-(1,4-二羟基环己烯)乙酸、咖啡酰奎宁酸甲酯、芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、异绿原酸A、丁烯二酸、单羟基琥珀酸、5-亚乙基-2-羟基-2-羟甲基-3-甲基-己稀二酸水杨酸、2-(4-羟苯基)乙酸甲酯、芥子酸、4,4-二甲基-1,7-庚二酸、4-(吡咯烷-2-酮基)-苯基乙酸。本专利技术还提供上述返魂草酚酸成分的制备方法，包括：返魂草加水煎煮得煎煮液，将煎煮液用截流分子量为5000-30000的膜滤过滤，再将滤液(例如用纳滤)浓缩成稠膏，最后将稠膏干燥并粉碎，得返魂草水提物(药用干粉)；取上述返魂草水提物，加蒸馏水适量溶解，注入稀释液至装有大孔树脂D101的柱子中，先用蒸馏水洗脱至溶液澄清，得到返魂草D101-水洗部分，再用50-80％乙醇洗脱(优选采用55-65％乙醇，更优选采用60％乙醇)大孔树脂柱，至溶液澄清得到返魂草D101-醇洗部分(50-80％乙醇)；或者进一步地，再用95％乙醇洗脱大孔树脂柱，至溶液澄清得到返魂草D101-95％醇洗部分，将上述洗脱液浓缩，冻干。其中，返魂草D101-60％醇洗部分收率为20.4-25.2％，返魂草原料中酚酸含量为6.46-10.25％，D101-60％醇洗部分中酚酸含量为70.42-76.43％。本专利技术还包括上述返魂草酚酸成分在制备抗氧化、抗炎、抗菌药物中的应用；进一步地，所述菌包括肺炎链球菌、化脓性链球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌。以本专利技术所述返魂草酚酸成分为活性成分，可制成药物学上的任何制剂。本专利技术提供了一种返魂草酚酸成分，它是由返魂草水提物通过D101大孔树脂去掉提取物中水溶性部分，得到溶于50-80％乙醇(优选55-65％乙醇，更优选60％乙醇)的酚酸类成分，采用LC-MS分析了酚酸部分的物质基础，研究了该返魂草酚酸成分对人支气管上皮氧化损伤治疗作用、对炎性巨噬细胞的治疗作用和对感染性细菌的抑制作用。本专利技术的有益效果在于：1、分离并富集返魂草提取物中酚酸类组分，大幅度降低杂质含量，其纯度提升到70.42-76.43％。2、对返魂草酚酸成分进行成分分析，鉴定出21种酚酸类成分，分别为：没食子酸、同型原儿茶酸、原儿茶酸、绿原酸、对羟基苯乙酸、尿苷、咖啡酸、(异)柠檬酸、2-(1,4-二羟基环己烯)乙酸、咖啡酰奎宁酸甲酯、芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、异绿原酸A、丁烯二酸、单羟基琥珀酸、5-亚乙基-2-羟基-2-羟甲基-3-甲基-己稀二酸水杨酸、2-(4-羟苯基)乙酸甲酯、芥子酸、4,4-二甲基-1,7-庚二酸、4-(吡咯烷-2-酮基)-苯基乙酸。3、研究返魂草酚酸成分的抗氧化能力，结果证明其DPPH自由基清除作用较强，并在人支气管上皮细胞的氧化损伤治疗中作用显著，在同等剂量下，其自由基清除率的IC50和SOD活力分别是返魂草水提物的70.7％和2.98倍。4、研究返魂草酚酸成分的抗炎活性，结果证明该酚酸成分在体外可以抑制由LPS诱导的小鼠巨噬细胞的炎性转变，在体内可以缓解角叉菜胶引起的足趾肿胀程度。返魂草酚酸主要通过抑制促炎性因子如NO、iNOS、IL-1β、NF-κB和TNF-α等释放来发挥抗炎作用5、研究返魂草酚酸成分的抗菌活性，结果显示返魂草酚酸能抑制院外感染性细菌如肺炎链球菌、化脓性链球菌及院内感染性细菌如表皮葡萄球菌、肠球菌的菌落形成及生长。附图说明图1返魂草酚酸成分粒子流图。图2为21种酚酸类物质LC-MS图。图3没食子酸标准曲线图。图4表示返魂草酚酸成分对高温诱导的16HBE细胞活力的影响。图5表示返魂草酚酸成分角叉菜胶致炎小鼠足肿胀度的影响。图6表示返魂草酚酸成分体外抑菌作用。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。下述实验用于进一步说明本专利技术。1.返魂草酚酸的提取返魂草加水煎煮，得煎煮液，将煎煮液用截流分子量为5000-30000的膜滤过，再将滤液用纳滤浓缩成稠膏，最后将稠膏干燥并粉碎，得返魂草水提物(药用干粉)，取上述返魂草水提物，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种返魂草酚酸成分，是将返魂草水提液用截流分子量为5000‑30000的膜滤过滤后所得滤液上D101大孔树脂，采用50‑80％乙醇洗脱所得的醇洗部分。

【技术特征摘要】
1.一种返魂草酚酸成分，是将返魂草水提液用截流分子量为5000-30000的膜滤过滤后所得滤液上D101大孔树脂，采用50-80％乙醇洗脱所得的醇洗部分。2.根据权利要求1所述的返魂草酚酸成分，其特征在于，采用55-65％乙醇洗脱，更优选采用60％乙醇洗脱。3.根据权利要求1或2所述的返魂草酚酸成分，其特征在于，所述返魂草酚酸成分其总酚酸纯度为70.42-76.43％。4.根据权利要求1-3任一项所述的返魂草酚酸成分，其特征在于，所述返魂草酚酸成分含有21种酚酸类成分，分别为：没食子酸、同型原儿茶酸、原儿茶酸、绿原酸、对羟基苯乙酸、尿苷、咖啡酸、(异)柠檬酸、2-(1,4-二羟基环己烯)乙酸、咖啡酰奎宁酸甲酯、芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、异绿原酸A、丁烯二酸、单羟基琥珀酸、5-亚乙基-2-羟基-2-羟甲基-3-甲基-己稀二酸水杨酸、2-(4-羟苯基)乙酸甲酯、芥子酸、4,4-二甲基-1,7-庚二酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪圣君，郭晶，李艳茹，金英，贾东旭，王春驰，周婷婷，赵昱伟，高其品，
申请(专利权)人：吉林益民堂制药有限公司，吉林省吉测检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22