一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法，本发明专利技术采用汞饱和法测定海参组织中金属硫蛋白含量，利用Hg‑MT在低pH值下的稳定性,采用三氯乙酸使非MTs蛋白变性沉淀,而MTs保留在上清液中并与Hg2+充分结合,多余游离的重金属离子由血红蛋白结合生成沉淀去除，通过测定结合于MTs上的Hg含量可间接计算MTs含量。使用全自动测汞仪检测上清液中汞浓度，省去了样品消解步骤，减少了检测过程中的误差来源，比镉饱和法更方便、快捷，结果更准确可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法
本专利技术涉及一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法。
技术介绍
目前国内已有专利技术“一种水生生物金属硫蛋白的检测方法”属于电化学领域，是采用汞电极检测溶液中的MTs，由于汞电极的机械强度差且容易产生表面污染，给应用带来不便。而我们采用全自动测汞仪则避免了此类问题，并且操作简便、有很高的灵敏度高、准确度和重现性，适用于海参组织中MTs的测定。海产品提取液中含有较多Cl-离子，会影响银饱和法的测定结果，因此银饱和法不适用于海产品。本方法采用汞饱和法测定海参组织中金属硫蛋白含量，使用全自动测汞仪检测上清液中汞浓度，省去了样品消解步骤，减少了检测过程中的误差来源，比镉饱和法更方便、快捷，结果更准确可靠。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法,本专利技术操作简便、有很高的灵敏度、准确度和重现性；同时本专利技术省去了样品消解步骤，减少了检测过程中的误差来源，比镉饱和法更方便、快捷，结果更准确可靠。为了解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法，其特征在于按照以下步骤进行：一实验所有药品的配制1）制备Tris-HCl缓冲液：缓冲溶液中三羟甲基氨基甲烷浓度是0.02mol/L，pH8.6，得Tris-HCl缓冲液；2）制备汞溶液：Hg2+50mg/L，含三氯乙酸10%，得汞溶液；3）制备牛血红蛋白溶液：牛血红蛋白质量份数为2%，得牛血红蛋白；二样品测定4）制备解冻样：将样品解冻，海参体壁剁碎，内脏、肌肉剪碎至不大于0.2cm3的小块，得解冻样；5）制备稀释液：称解冻样，按照1:4质量比加入Tris-HCl缓冲液，匀浆，在0℃，25000g条件下，离心20min；取上清液，加入Tris-HCl缓冲液稀释，上清液和Tris-HCl缓冲液的质量比是1:3，得稀释液1；6）制备汞反应液：取稀释液0.2mL于1.5mL离心管中，加汞溶液0.2mL，反应10min，得汞反应液；7）制备牛血红蛋白离心液：向汞反应液中加入牛血红蛋白溶液0.2mL，充分混匀，在80℃水浴中静置3min，在4℃，15000g条件下，离心10min，将上清液转入至另一个1.5mL离心管中，得上清液1；8）向上清液1中加入牛血红蛋白溶液0.2mL，充分混匀，在80℃水浴中静置3min，在4℃，15000g条件下，离心10min，将上清液转入至另一个1.5mL离心管中，得上清液2；9）重复步骤8），得上清液3；10）测汞浓度：取50μL上清液3，加入到全自动测汞仪中，测汞浓度。优选地，步骤1）中所述Tris-HCl缓冲液按照以下步骤进行：称取Tris（三羟甲基氨基甲烷）0.2423g，加水90mL溶解，用盐酸调至pH8.6，转移至100mL容量瓶并定容至标线。优选地，步骤2）中所述汞溶液按照以下步骤进行：称取TCA（三氯乙酸）20g，加水200mL溶解，再加0.0136g氯化汞（HgCl2）。优选地，步骤3）中牛血红蛋白溶液按照以下步骤进行：称取牛血红蛋白1g，加水50mL溶解。专利技术具有以下有益技术效果：1、本专利技术采用汞饱和法测定海参组织中金属硫蛋白含量，使用全自动测汞仪检测上清液中汞浓度，省去了样品消解步骤，减少了检测过程中的误差来源，比镉饱和法更方便、快捷，结果更准确可靠。2、本专利技术采用全自动测汞仪，操作简便、有很高的灵敏度、准确度和重现性，适用于海参组织中MTs的测定。附图说明图1为本专利技术中检测数据结果。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术做进一步详细描述：实施例1一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法，按照以下步骤进行：一实验所有药品的配制1）制备Tris-HCl缓冲液：缓冲溶液中三羟甲基氨基甲烷浓度是0.02mol/L，pH8.6，得Tris-HCl缓冲液；2）制备汞溶液：Hg2+50mg/L，含三氯乙酸10%，得汞溶液；3）制备牛血红蛋白溶液：牛血红蛋白质量份数为2%，得牛血红蛋白；二样品测定4）制备解冻样：将样品解冻，海参体壁剁碎，内脏、肌肉剪碎至不大于0.2cm3的小块，得解冻样；5）制备稀释液：称解冻样，按照1:4质量比加入Tris-HCl缓冲液，匀浆，在0℃，25000g条件下，离心20min；取上清液，加入Tris-HCl缓冲液稀释，上清液和Tris-HCl缓冲液的质量比是1:3，得稀释液1；6）制备汞反应液：取稀释液0.2mL于1.5mL离心管中，加汞溶液0.2mL，反应10min，得汞反应液；7）制备牛血红蛋白离心液：向汞反应液中加入牛血红蛋白溶液0.2mL，充分混匀，在80℃水浴中静置3min，在4℃，15000g条件下，离心10min，将上清液转入至另一个1.5mL离心管中，得上清液1；8）向上清液1中加入牛血红蛋白溶液0.2mL，充分混匀，在80℃水浴中静置3min，在4℃，15000g条件下，离心10min，将上清液转入至另一个1.5mL离心管中，得上清液2；9）重复步骤8），得上清液3；10）测汞浓度：取50μL上清液3，加入到全自动测汞仪中，测汞浓度。步骤1）中所述Tris-HCl缓冲液按照以下步骤进行：称取Tris（三羟甲基氨基甲烷）0.2423g，加水90mL溶解，用盐酸调至pH8.6，转移至100mL容量瓶并定容至标线。步骤2）中所述汞溶液按照以下步骤进行：称取TCA（三氯乙酸）20g，加水200mL溶解，再加0.0136g氯化汞（HgCl2）。步骤3）中牛血红蛋白溶液按照以下步骤进行：称取牛血红蛋白1g，加水50mL溶解。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法，其特征在于按照以下步骤进行：一实验所有药品的配制1）制备Tris‑HCl缓冲液：缓冲溶液中三羟甲基氨基甲烷浓度是0.02 mol/L，pH8.6，得Tris‑HCl缓冲液；2）制备汞溶液：Hg2+ 50 mg/L，含三氯乙酸10%，得汞溶液；3）制备牛血红蛋白溶液：牛血红蛋白质量份数为2%，得牛血红蛋白；二样品测定4）制备解冻样：将样品解冻，海参体壁剁碎，内脏、肌肉剪碎至不大于0.2cm3的小块，得解冻样；5）制备稀释液：称解冻样，按照1:4质量比加入Tris‑HCl缓冲液，匀浆，在0℃，25 000 g 条件下，离心20 min；取上清液，加入Tris‑HCl缓冲液稀释，上清液和Tris‑HCl缓冲液的质量比是1:3，得稀释液1；6）制备汞反应液：取稀释液0.2 mL于1.5 mL离心管中，加汞溶液0.2 mL，反应10 min，得汞反应液；7）制备牛血红蛋白离心液：向汞反应液中加入牛血红蛋白溶液0.2 mL，充分混匀，在80℃水浴中静置3 min，在4℃，15 000 g 条件下，离心10 min，将上清液转入至另一个1.5 mL离心管中，得上清液1；8）向上清液1中加入牛血红蛋白溶液0.2 mL，充分混匀，在80℃水浴中静置3 min，在4℃，15 000 g 条件下，离心10 min，将上清液转入至另一个1.5 mL离心管中，得上清液2；9）重复步骤8），得上清液3；10）测汞浓度：取50μL上清液3，加入到全自动测汞仪中，测汞浓度。...

【技术特征摘要】
1.一种利用汞饱和法检测海参组织中的金属硫蛋白的方法，其特征在于按照以下步骤进行：一实验所有药品的配制1）制备Tris-HCl缓冲液：缓冲溶液中三羟甲基氨基甲烷浓度是0.02mol/L，pH8.6，得Tris-HCl缓冲液；2）制备汞溶液：Hg2+50mg/L，含三氯乙酸10%，得汞溶液；3）制备牛血红蛋白溶液：牛血红蛋白质量份数为2%，得牛血红蛋白；二样品测定4）制备解冻样：将样品解冻，海参体壁剁碎，内脏、肌肉剪碎至不大于0.2cm3的小块，得解冻样；5）制备稀释液：称解冻样，按照1:4质量比加入Tris-HCl缓冲液，匀浆，在0℃，25000g条件下，离心20min；取上清液，加入Tris-HCl缓冲液稀释，上清液和Tris-HCl缓冲液的质量比是1:3，得稀释液1；6）制备汞反应液：取稀释液0.2mL于1.5mL离心管中，加汞溶液0.2mL，反应10min，得汞反应液；7）制备牛血红蛋白离心液：向汞反应液中加入牛血红蛋白溶液0.2mL，充分混匀，在80℃水浴中静置3min，在4℃，15000g条件下，离心10min，将上清液转...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫向红，田秀慧，李焕军，徐英江，孙国华，任利华，韩典峰，刘小静，黄会，
申请(专利权)人：山东省海洋资源与环境研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37