高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，该试剂盒由第一试剂和第二试剂组成，并且第一试剂的体积是第二试剂体积的3倍，该试剂盒包括表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、无水乙醇和硫磷铁试剂，第一试剂中，血清样品中非高密度脂蛋白胆固醇在表面活性剂的作用下与胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶反应而被消除；第二是试剂中，剩余高密度脂蛋白胆固醇的血清经无水乙醇提取，其中蛋白质变性，溶解度降低而产生沉淀，胆固醇则溶解在乙醇中，在磷硫铁试剂作用下，胆固醇与磷硫铁试剂反应检测出其含量。试验结果表明，本发明专利技术试剂盒线性范围较宽、准确度和精密度较高，并且抗干扰能力较强。

【技术实现步骤摘要】
高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒
本专利技术涉及生化检测领域，具体是一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。
技术介绍
胆固醇等脂质在血清中与脱辅蛋白质配合生成脂蛋白，根据物理性质的不同，脂蛋白分为乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等等。高密度脂蛋白(HDL)接受来自于包括动脉壁的各组织的胆固醇，通过直接逆转运或间接逆转运，将胆固醇运入肝脏，再清除出血液。流行病学和临床研究表明，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与动脉硬化类疾病冠心病的发生率成负相关，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是动脉硬化类疾病冠心病的预防因子。因此测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量在动脉硬化类疾病发病方面有重要的预测作用，这在临床上具有重要的意义。高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的测定方法有很多，目前主要的测定方法是匀相测定法，包括聚乙二醇(PEG)修饰酶法、选择抑制法和清除法等。聚乙二醇(PEG)修饰酶法是用聚乙二醇(PEG)修饰改性胆固醇酯酶(CEH)和胆固醇氧化酶(COD)，修饰酶对脂蛋白的结构具有选择性；另外葡聚糖、α-环糊精硫酸盐(α-SCD)和Mg2+与非高密度脂蛋白形成复合物，可以避免修饰酶对非高密度脂蛋白的作用，因此在葡聚糖、Mg2+、α-环糊精硫酸盐和修饰酶作用下可以直接测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量。选择抑制法(PPD法)是在R1(第一试剂)中含表面活性剂I(HDL-C的反应抑制剂)、多聚阴离子和某种盐，乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)在多聚阴离子—盐环境下发生凝聚，同时表面活性剂Ⅰ与凝聚的脂蛋白的疏水基团有高度亲和力，能吸附在凝聚的脂蛋白的颗粒表面形成遮蔽，抑制非高密度脂蛋白胆固醇的反应；同时，高密度脂蛋白(HDL)上也有表面活性剂I，但由于亲和力较弱，反应是可逆的；R2(第二试剂)中含有对高密度脂蛋白(HDL)亲水基团有高度亲和力的表面活性剂II(HDL-C的反应促进剂)，其对高密度脂蛋白(HDL)的吸附不仅置换出第一反应中与高密度脂蛋白(HDL)亲和力较弱的表面活性剂I，还能使高密度脂蛋白(HDL)形成可溶性复合物，使高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)参与反应，从而测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量。清除法是目前被认为最理想和最有效的测定方法，该方法包括两种类型，一是反应促进剂过氧化物酶清除法(SPD法)，二是过氧化氢酶清除法(CAT法)。过氧化物酶清除法(SPD法)的测定原理是基于脂蛋白与表面活性剂的亲和性差异。试剂1中，在反应促进剂的作用下，血清中乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)形成可溶性复合物，其表层的游离胆固醇在胆固醇氧化酶(CHOD)作用下生成H2O2，在过氧化物酶(POD)的作用下被最终清除；试剂2包含特殊表面活性剂，作用于高密度脂蛋白(HDL)，使其发生裂解，释放出高密度脂蛋白中的胆固醇，与酶试剂反应并显色，从而测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量。过氧化氢酶清除法(CAT法)在反应过程中不会形成可溶性复合物，而是在特殊表面活性剂的作用下，乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)中的胆固醇与酶试剂反应生成H2O2，H2O2被过氧化氢酶(CAT)分解为H2O和O2而被清除，试剂2中应加入叠氮钠，抑制过氧化氢酶(CAT)的活性，同时，另一表面活性剂使高密度脂蛋白(HDL)颗粒发生解离，使其胆固醇暴露，与胆固醇酶试剂反应并显色，从而测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量。聚乙二醇(PEG)修饰法需要对酶进行修饰，成本较高；清除法和选择抑制法关键是表面活性剂的选择，但表面活性剂的使用比较困难，对非高密度脂蛋白的掩蔽抑制不完全，同时对高密度脂蛋白(HDL)的释放不彻底。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，以解决现有技术中的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，该试剂盒包括作用于非高密度脂蛋白胆固醇的表面活性剂、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、无水乙醇和硫磷铁试剂，血清样品中非高密度脂蛋白胆固醇在表面活性剂的作用下与胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶反应而被消除；剩余高密度脂蛋白胆固醇的血清经无水乙醇提取，其中的蛋白质变性，溶解度降低而产生沉淀，胆固醇则溶解在乙醇中，在磷硫铁试剂作用下，胆固醇与磷硫铁试剂反应检测出其含量。该试剂盒包括第一试剂和第二试剂，第一试剂的体积是第二试剂体积的3倍。(1)第一试剂各组分的浓度如下：(2)第二试剂各组分的浓度如下：作为优化，表面活性剂选自聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯油酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐和烷基苯磺酸盐中的一种或多种。作为优化，缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和Good’s缓冲剂中的一种或多种。作为优化，硫磷铁试剂为取1.5ml10％三氯化铁溶液于100ml棕色容量瓶中加浓硫酸至刻度配制而成。作为优化，10％三氯化铁溶液为10gFeCl3·6H2O溶于分析纯的磷酸中，定容至100ml配制而成。本专利技术试剂盒第一试剂和第二试剂的制备采用常规方法混合搅匀即可。本专利技术一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒中第一试剂和第二试剂的原料选择依据是：表面活性剂作用于非高密度脂蛋白胆固醇，使其所含的胆固醇暴露。胆固醇氧化酶和过氧化物酶起氧化高密度脂蛋白胆固醇的作用。无水乙醇用于提取高密度脂蛋白胆固醇中的胆固醇。硫铁磷试剂作为显色剂，与胆固醇反应生成紫红色物质，该物质的显色程度与与胆固醇的含量成正比。缓冲液(PH：6.0-7.0)利于试剂中各种成分的分散，可提高试剂的稳定性。氯化钠用于模拟人体内血液环境，保证反应的进行是在体外相同条件下进行的，从而保证检测的真实性和可靠性。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，该试剂盒第一试剂中的表面活性剂作用于血清样品中的非高密度脂蛋白胆固醇，使其胆固醇释放，由于该表面活性剂选自聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯油酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐和烷基苯磺酸盐中的一种或多种，这些物质作为表面活性剂，能够使非高密度脂蛋白胆固醇当中的胆固醇彻底释放，被彻底释放出来的胆固醇与胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶反应生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下生成氧气和水，从而使非高密度脂蛋白胆固醇彻底被消除；该试剂盒第二试剂中的无水乙醇提取血清中的高密度脂蛋白胆固醇，无水乙醇使血清中的蛋白质变性，变性后的蛋白质溶解度降低而形成沉淀，胆固醇则溶解在无水乙醇中，在硫磷铁试剂作用下，胆固醇与硫磷铁试剂反应生成紫红色物质，硫磷铁试剂与胆固醇反应迅速，在10秒之内反应就可结束，并且反应充分，能够快速方便地检测血清样品中的高密度脂蛋白胆固醇，反应产物为紫红色物质，紫红色便于观察，该物质的显色程度与胆固醇的含量成正比，该物质在560nm波长处有最大吸收，可用比色法定量测定胆固醇的含量，本专利技术试剂盒能够高效、准确、特异性地检测血清样品中的高密度脂蛋白胆固醇，本专利技术试剂盒第一试剂和第二试剂的制备采用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括第一试剂和第二试剂，(1)所述第一试剂包含的组分及各组分的浓度如下：

【技术特征摘要】
1.一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括第一试剂和第二试剂，(1)所述第一试剂包含的组分及各组分的浓度如下：(2)所述第二试剂包含的组分及各组分的浓度如下：。2.根据权利要求1所述的一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂选自聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯油酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐和烷基苯磺酸盐中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和Good’s缓冲剂中的一种或多...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨守雷，林高昂，陈汉水，石敏，诸燕，徐雯，
申请(专利权)人：临安卡尔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33