一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液制造技术

本发明专利技术公开了一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液,细胞凝胶制剂的配方为：按体积百分比，凝胶溶液为50％～90％：复方电解质和/或氨基酸注射液细胞重悬液为10％～50％，每毫升细胞凝胶制剂中含有0.5×105～2×107个细胞。凝胶溶液包括下述质量与体积组分1～50mg高分子材料稳定剂，40～160ul丙三醇，20～150mg人血白蛋白，20～120mg羟乙基淀粉，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。该凝胶制剂生物相容性好，不含有二甲基亚砜(DMSO)且能直接进行低温保存，制备操作简便，‑80℃储存能够长期稳定的维持细胞的高活性，可以作为皮肤损伤、瘘道和粘膜损伤等创面的治疗应用。

Cell gel preparation for treating tissue damage and its use and gel solution for maintaining cryopreservation of cell activity

The invention discloses a cell gel preparation for treating tissue damage and its uses and the gel solution used to maintain the cryopreservation of cell activity. The formula of the cell gel preparation is: in the volume percentage, the gel solution is 50% to 90%: the compound electrolyte and / or the Amino Acid Injection cell suspension are 10% ~ 50%, each milliliter fine. The cell gel preparation contains 0.5 x 105~2 x 107 cells. The gel solution consists of 1 to 50mg polymer material stabilizer, 40 to 160ul glycerol, 20 to 150mg Human Albumin, 20 to 120mg hydroxyethyl starch, Multiple Electrolytes Injection and / or Amino Acid Injection 0.84 to 0.96ml. The gel has good biocompatibility, does not contain two methyl sulfoxide (DMSO), and can be cryopreserved directly. The preparation is simple and convenient, and storing at 80 C can maintain the high activity of cells for a long time. It can be used as a treatment for skin injury, fistula and mucosal injury.

【技术实现步骤摘要】
一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液
本专利技术涉及生物技术和生物医药领域，特别涉及一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液。
技术介绍
皮肤是人体面积最大的器官，是人体的天然屏障，它直接与外界环境接触，是机体免于脱水和感染的第一道防线。创面修复是创伤修复的难点，而大面积难愈性创面的修复是临床治疗的一大难题。研究表明，干细胞可以通过复合机制(包括促进细胞分化，旁分泌细胞因子，并能促血管化)来影响局部组织微环境，促进血管形成和诱导肉芽组织生成从而更好的促进伤口愈合，有效地缩短治疗的时间。特定条件下，利用干细胞的可塑性，可以诱导分化出脂肪干细胞，表皮干细胞等，应用干细胞还可以重建皮脂腺，毛囊以及汗腺，减少瘢痕形成，从而形成皮肤功能的修复，表皮干细胞(ESC)在皮肤形成愈合过程中起着重要的作用，表皮干细胞能保持增殖分化能力，可以分化为表皮中的各种细胞，另外，毛囊干细胞不仅能转换成毛囊组织内的多种细胞类型，还能迁移到皮肤表面，形成表皮细胞。而单纯地细胞悬液在伤口处保持细胞活性的时间较短，不能保证尽可能多的活的干细胞发挥其作用，尽可能长时间维持干细胞在创面的活性使其发挥成为一个热点。除此皮肤表面的创伤，瘘是正常情况下不连接器官或动脉之间的异常链接或通道，可以发生在身体的多个部位，如肛瘘，子宫颈瘘，肠阴道瘘，子宫腹膜瘘等。克罗恩病和溃疡性结肠炎是形成直肠瘘，肠瘘，肠皮肤瘘的主要病因，克罗恩病中所报道的瘘发生率为17％至50％，但对此病中瘘的治疗是极具挑战性的问题，很多疗法对此类瘘的治疗效果不佳，且复发率较高，使得受累患者非常痛苦，显著降低了生活质量。寻找一种新的有效的治疗方法是目前临床上亟待解决的问题。间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是中胚层来源的具有高度自我更新能力和多项分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中。间充质干细胞是多能干细胞，具有“横向分化”或“跨系分化”的能力，能支持造血干细胞的生长，还可以在不同的诱导条件下，在体外分化为多种组织细胞，可以作为理想的种子细胞用于病变和衰老引起的组织器官损伤修复。间充质干细胞为贴壁细胞，在表面生长较好，能够释放促进多种生长因子，并且可以抑制炎症发生，并具有多项分化的能力，直接接触创面或瘘道可以最大程度的发挥干细胞的修复治疗作用，能更有效的减轻病人的痛苦，拥有广阔的经济效益和社会效益。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,冻存后细胞-196℃液氮中低温保存，可以长期稳定的保存细胞的特性，且适度的保存一定量细胞，可以防止因正在培养的细胞污染等使细胞丢种，起到保种的作用，目前所应用的常规细胞冻存保护剂是二甲基亚砜(DMSO),但是DMSO会调节细胞的水分代谢，通过调节渗透压影响细胞的生长状态，在一定程度上会诱发细胞凋亡，制备中需要尽可能的减少复苏后细胞与DMSO的接触，给制备过程增加的一定的难度。DMSO易挥发，对人体具有一定的毒性，对眼睛有刺激作用，使用过程中，对操作设备和环境的要求较高。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，提供了一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液。此凝胶溶液中不含有传统细胞冻存方法中常用的冻存保护剂DMSO,很大程度的减少了DMSO对于活细胞的伤害。在非液氮保存细胞的条件，-80℃能长期稳定高效的保持细胞的活性。本专利技术的另一个目的是提供了一种含有活细胞和凝胶制剂的细胞凝胶制剂，可以在使用前完成包括无菌在内的所有质量检测。解冻后可以立即使用，使用简便。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种保持冻存细胞活性的凝胶溶液，包括下述质量与体积组分：高分子材料稳定剂1～50mg，丙三醇40～160ul，人血白蛋白20～150mg，羟乙基淀粉20～120mg，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。所述高分子材料稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、胶原中的一种或几种的组合。所述高分子材料稳定剂、丙三醇、人血白蛋白、羟乙基淀粉、复方电解质注射液、氨基酸注射液都是药用级原辅料。一种含有上述保持冻存细胞活性的凝胶溶液的治疗组织损伤的细胞凝胶制剂，按体积百分比，凝胶溶液为50％～90％：复方电解质和/或氨基酸注射液细胞重悬液为10％～50％，每毫升细胞凝胶制剂中含有0.5×105～2×107个细胞。所述细胞为间充质干细胞、亚全能干细胞、表皮干细胞、内皮祖细胞、表皮细胞、内皮细胞、毛囊干细胞中的一种或多种。所述间充质干细胞来源于骨髓、脐带、脐血、胎盘、羊膜、牙髓或脂肪组织。上述细胞凝胶制剂在制备治疗组织损伤药物中的应用。所述组织损伤包括皮肤溃疡、烧伤、烫伤、褥疮、糖尿病足、肛瘘、溃疡性结肠炎、肠阴道瘘、子宫腹膜瘘。本专利技术的优点在于：1.本专利技术提供的细胞凝胶制剂中不含有二甲基亚砜(DMSO),简化了制备工艺，且能大大的减少制备过程中DMSO对细胞的伤害，更好的保持了细胞的活性。冻存细胞凝胶制剂复苏后放置4℃，8小时后细胞的活率能达到90％以上；且此不含有DMSO的凝胶制剂制备后-20℃冻存7天后复苏，细胞的活率能到达80％以上，远高于含DMSO的凝胶制剂。2.本专利技术的细胞凝胶制剂可以在-80℃保存能良好的保持细胞活性达2年以上。且摒弃了传统的液氮保存和运输，降低了存储成本和运输的危险性。3.本专利技术提供的细胞凝胶制剂的配方中不含有动物源性成分，不含有抗生素和防腐剂，复苏后的细胞凝胶制剂仍能够维持细胞的高活性和细胞的生物学特性和功能，可以作为皮肤损伤、烧伤、瘘道和粘膜损伤等创面的治疗应用，也可制备人造皮肤或细胞膜片。所述的组织损伤包括但是不限于肛瘘，溃疡性结肠炎，肠阴道瘘，子宫腹膜瘘，皮肤溃疡，烧伤，烫伤，褥疮和糖尿病足。附图说明图1是本专利技术脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(1:20:20)凝胶中的活率检测图。图2是本专利技术脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(1:20:20)凝胶中的得率检测图。图3是本专利技术脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(5:15:12)凝胶中的活率检测图。图4是本专利技术脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(5:15:12)凝胶中的得率检测图。图5是脐带间充质干细胞在不同高分子材料配制凝胶溶液中细胞活率检测图。图6是脐带间充质干细胞在不同高分子材料配制凝胶溶液中细胞得率的检测图。图7是细胞凝胶制剂在不同的温度储存下的细胞活率检测图图8凝胶对不同来源的干细胞的冻存保护稳定性。图9凝胶制剂长期冻存后，海藻酸钠钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(4:5:5)凝胶制剂中脐带间充质干细胞的活率曲线图(24个月)。图10脐带间充质干细胞凝胶制剂冻存24个月后细胞成脂成骨分分化图。图11是含有脐带间充质干细胞的海藻酸钠钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(4:5:5)凝胶制剂对大鼠皮损的治疗作用图。具体实施方式下面结合附图与具体实施方案对本专利技术进一步说明，其具体实施方案应该理解为仅为举例说明，不是限定性的，不能以下述举例说明来限定本专利技术的保护范围。本专利技术的保持冻存细胞活性的凝胶溶液，包括下述质量与体积组分：高分子材料稳定剂1～50mg，丙三醇40～160ul本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种保持冻存细胞活性的凝胶溶液，其特征在于，包括下述质量与体积组分：高分子材料稳定剂1～50mg，丙三醇40～160ul，人血白蛋白20～150mg，羟乙基淀粉20～120mg，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。

【技术特征摘要】
1.一种保持冻存细胞活性的凝胶溶液，其特征在于，包括下述质量与体积组分：高分子材料稳定剂1～50mg，丙三醇40～160ul，人血白蛋白20～150mg，羟乙基淀粉20～120mg，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。2.根据权利要求1所述保持冻存细胞活性的凝胶溶液，其特征在于，所述高分子材料稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、胶原中的一种或几种的组合。3.根据权利要求1所述保持冻存细胞活性的凝胶溶液，其特征在于，所述高分子材料稳定剂、丙三醇、人血白蛋白、羟乙基淀粉、复方电解质注射液、氨基酸注射液都是药用级原辅料。4.一种含有权利要求1-3任一项所述保持冻存细胞活性的凝胶溶液的治疗组织损伤的细胞凝胶制剂，其特征在于，按体积百分比，凝胶溶液为5...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩之波，贾红红，赵梦，赵钦军，冯影，韩忠朝，
申请(专利权)人：天津昂赛细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12