细胞分裂素氧化酶OsCKX 4表面展示体系及其构建方法和应用技术

本发明专利技术首先根据已经发表的OsCKX 4基因序(GeneBank，Accession NO.NC 029256)，提取日本晴的RNA，逆转录得到cDNA，并以此为模板通过聚合酶链式反应(PCR)扩增OsCKX 4。PCR扩增引物对包括上游引物和下游引物。紧接着，本发明专利技术提供了上述细胞分裂素氧化酶OsCKX 4基因的表面展示载体pMAL‑p2x‑INP‑CKX。本发明专利技术提供了一种水稻日本晴细胞分裂素氧化酶OsCKX 4表面展示体系，包括宿主大肠杆菌以及定向插入的表面展示载体pMAL‑p2x‑INP‑CKX。利用该体系构建细胞分裂素电化学生物传感器,对细胞分裂素异戊烯基腺嘌呤的含量进行检测。

【技术实现步骤摘要】
细胞分裂素氧化酶OsCKX4表面展示体系及其构建方法和应用
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及到水稻日本晴细胞分裂素氧化酶OsCKX4基因的克隆和细菌表面展示及其应用于细胞分裂素的电化学检测。
技术介绍
细胞分裂素作为植物生长调节类激素，参与调控植物的生长与发育，准确分析植物激素在植物体内的含量分布对研究植物生命活动、作物遗传育种等具有巨大的意义。水稻日本晴细胞分裂素氧化酶OsCKX4能不可逆地专一催化异戊烯细胞分裂素的降解，CKX活性与它的辅酶FAD密切相关，其反应机制是：细胞分裂素与OsCKX4结合并发生催化反应，使细胞分裂素生成亚胺化合物的中间产物，同时OsCKX4内部FAD被还原为FADH2，中间产物水解并最终生成不饱和醛和腺嘌呤。OsCKX4在热裂解石墨电极表面实现直接电化学，其辅酶FAD氧化还原特峰位于-0.42V和-0.48V，加入细胞分裂素底物后，FAD氧化还原峰电流发生变化，因此可根据FAD氧化还原峰值的变化作为电化学检测的信号。然而，目前本领域中并没有采用上述机理来检测细胞分裂素含量的相关报道。
技术实现思路
本专利技术解决了现有技术中不足，提供了一种水稻日本晴细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞分裂素氧化酶OsCKX 4基因的PCR扩增引物对，包括上游引物和下游引物，其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

【技术特征摘要】
1.一种细胞分裂素氧化酶OsCKX4基因的PCR扩增引物对，包括上游引物和下游引物，其中上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。2.一种细胞分裂素氧化酶OsCKX4基因的表面展示载体pMAL-p2x-INP-CKX。3.权利要求2中所述表面展示载体pMAL-p2x-INP-CKX的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、取水稻日本晴新鲜幼叶，用TriZol法提取总RNA，反转录，Actin引物检测反转产物cDNA，以该cDNA为模板进行目的片段CKX的PCR扩增，扩增所用引物如权利要求1所示，得到PCR产物；(2)、用XbaI和SalI双酶切步骤(1)中的PCR产物CKX和空载pMAL-p2x-INP，分别回收1520bp的目的条带和6700bp的载体条带，将回收产物目的条带和载体条带按摩尔比为3:1～10:1的比例混合，用T4连接酶以16℃、16h进行连接；连接产物热击转化大肠杆菌DH5α，重组质粒挑取单克隆，PCR扩增鉴定，用XbaI和SalI双酶切鉴定及测序鉴定。4.一种水稻日本晴细胞分裂素氧化酶OsCKX4表面展示体系，包括宿主大肠杆菌以及定向插入的权利要求2中所述的表面展示载体pMAL-p2x-INP-CKX...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴云华，李勇，龚斌，
申请(专利权)人：中南民族大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42