一种可溶性CD38浓度的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种可溶性CD38浓度的检测方法。筛选出能够同时结合CD38的单域抗体对，即单域抗体1053和551，其中单域抗体551作为捕获抗体，单域抗体1053和萤火虫萤光素酶突变体Fluc2的融合蛋白作为检测抗体。将单域抗体551包被在ELISA板底来捕获溶液中的CD38，检测抗体中的Fluc2催化萤光素的发光信号来评估CD38的浓度，开发出一种特异性超高灵敏度的可溶性CD38检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种可溶性CD38浓度的检测方法
本专利技术属于生物医学或生物制药
，涉及一种可溶性CD38浓度的检测方法。
技术介绍
CD38是一个单次跨膜的糖蛋白，常被用作细胞分化的标记分子。1996年，首次发现可溶性CD38(solubleCD38，sCD38)，它被认为是全长CD38分子的膜外结构域被切割释放的产物。它们存在于多种生理及病理体液和肿瘤细胞培养上清中，保留了CD38的抗原特性和催化活性1。随后的研究发现，可溶性CD38能够作为一种信号分子，具有诱导细胞增殖和迁移2、延长记忆抗体寿命3和调节母胎耐受等4等功能。CD38在多种血液癌细胞，例如多发性骨髓瘤细胞表面呈现异常高表达5，而在正常淋巴细胞、骨髓细胞以及一些非造血细胞上处于低表达状态。因此，CD38被认为是一个治疗多发性骨髓瘤的靶标，多个针对其的治疗性单克隆抗体正在研发过程中6。细胞表面CD38的表达量是多发性骨髓瘤的一个诊断指标，但是病人骨髓瘤细胞的获取需要做骨髓穿刺，具有入侵性，而且骨髓的局部抽取并不能反映病人整体骨髓瘤的负荷，所以血液诊断具有优越性。由于病人血浆是一个复杂体系，可溶性CD38含量很低，需要高灵敏方法才能进行精确检测。目前市场上检测灵敏度最高的一款CD38检测ELISA试剂盒，采用传统抗体进行固相夹心酶联免疫吸附，其检测灵敏度标称93.75pg/mL。缺点：1)检测灵敏度仍然有限；2)检测特异性不强，不适合检测复杂样本；3)成本高，一个试剂盒5000元仅能做96个样品/测试。参考文献1Funaro,A.etal.IdentificationandcharacterizationofanactivesolubleformofhumanCD38innormalandpathologicalfluids.Internationalimmunology8,1643-1650(1996).2Deaglio,S.etal.CD38/CD31interactionsactivategeneticpathwaysleadingtoproliferationandmigrationinchroniclymphocyticleukemiacells.Molecularmedicine16,87-91,doi:10.2119/molmed.2009.00146(2010).3Liu,X.Q.,Hart,D.N.,MacPherson,G.G.,Good,M.F.&Wykes,M.N.SolubleCD38significantlyprolongsthelifespanofmemoryB-cellresponses.Immunology125,14-20,doi:10.1111/j.1365-2567.2008.02914.x(2008).4Kim,B.J.etal.SeminalCD38isapivotalregulatorforfetomaternaltolerance.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica112,1559-1564,doi:10.1073/pnas.1413493112(2015).5Lin,P.,Owens,R.,Tricot,G.&Wilson,C.S.Flowcytometricimmunophenotypicanalysisof306casesofmultiplemyeloma.Americanjournalofclinicalpathology121,482-488,doi:10.1309/74R4-TB90-BUWH-27JX(2004).6vandeDonk,N.,Richardson,P.G.&Malavasi,F.CD38antibodiesinmultiplemyeloma:backtothefuture.Blood131,13-29,doi:10.1182/blood-2017-06-740944(2018).
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种超高灵敏度、特异性的检测可溶性CD38的方法，而且能够高通量检测。为实现上述目的，本专利技术的第一方面，提供了可溶性CD38的检测方法，即三明治夹心法，包括捕获抗体、检测抗体。本专利技术第二方面，提供了一种捕获抗体、一种检测抗体，即CD38单域抗体和CD38单域抗体萤光素酶融合蛋白，包括CD38单域抗体部分和萤火虫萤光素酶部分。本专利技术第三方面，提供了两种DNA分子，它编码本专利技术所述的捕获抗体和检测抗体，或本专利技术所述的CD38单域抗体萤光素酶融合蛋白。本专利技术第四方面，提供了两种表达载体，它包含CD38单域抗体基因序列和萤火虫萤光素酶突变体的基因序列。本专利技术第五方面，提供了两种宿主细胞，它含有前文所述的表达载体。本专利技术所述CD38单域抗体1053的编码基因的CDS序列，其cDNA序列全长为546bp(序列1)，具体序列如下：ATGAAATACCTATTGCCTACGGCAGCCGCTGGATTGTTATTACTCGCGGCCCAGCCGGCCATGGCCGATGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGAGGAGGCTTGGTGCAGGCTGGGGGCTCTCTGAGACTCTCCTGTACAGGCTCAGGACGCACCTTCAGGAACTATCCCATGGCCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGAGCGTGAGTTTGTAGCAGGTATTACCTGGGTCGGTGCTAGCACACTCTATGCAGACTTCGCGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCGTTTATAGTTGTGCAGCAGGTCGCGGTATAGTGGCTGGTAGGATCCCAGCTGAGTATGCCGACTGGGGCCAGGGCACCCAGGTCACCGTCTCCTCAGAACCCAAGACACCAAAACCACAACCAGCGGCCGCACATCATCATCACCATCACGGGGCCGCAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTGAATGGGGCCGCATAG编码产生长度为181个氨基酸(末端终止子未计入，即序列中***号未计入)的蛋白质序列(序列2)，具体序列如下：本专利技术所述CD38单域抗体551的编码基因的CDS序列，其cDNA序列全长为558bp(序列3)，具体序列如下：ATGAAATACCTATTGCCTACGGCAGCCGCTGGATTGTTATTACTCGCGGCCCAGCCGGCCATGGCCGATGTGCAGCTGCAGGAGTCAGGAGGAGGATTGGTGCAGGCTGGACACTCTCTGAGACTCTCCTGTGTAGGCTCCGGTAGCAGATTCGATAACTATGCCATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGTGAATTTGTAGCCGCTATTAGCTGGAGTAGTGGCACTACGCGCTATTTAGACACCGTGAAGGGC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、使用单域抗体551作为捕获抗体，包被在ELISA板底来捕获样本溶液中的CD38；S2、使用单域抗体1053和萤光素酶的融合蛋白作为检测抗体，特异性结合CD38；S3、检测萤光素酶催化萤光素的发光信号来评估CD38的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、使用单域抗体551作为捕获抗体，包被在ELISA板底来捕获样本溶液中的CD38；S2、使用单域抗体1053和萤光素酶的融合蛋白作为检测抗体，特异性结合CD38；S3、检测萤光素酶催化萤光素的发光信号来评估CD38的浓度。2.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述萤光素酶为萤火虫萤光素酶突变体Fluc2。3.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述单域抗体551的氨基酸序列如序列表中序列4所示，其编码基因如序列表中序列3所示。4.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述单域抗体1053的氨基酸序列如序列表中序列2所示，其编码基因如序列表中序列1所示。5.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述检测抗体的氨基酸序列如序列表中序列6所示，其编码基因如序列表...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永娟，李汉璋，黎婷，
申请(专利权)人：北京大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：广东,44