适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法技术

本发明专利技术属于植物科学技术领域，公开了一种适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法,包括：称取香蕉叶片0.2g，液氮速冻并研磨成粉末，加入预冷的80％甲醇溶液6ml，4℃冰箱浸提过夜；加80％甲醇2mL洗涤残渣，重复操作2次，合并上清液；上清液过0.22um微孔滤膜，80％甲醇2mL冲洗微孔滤膜残渣，过滤后的上清液转入旋转蒸发瓶中，在36℃、弱光下减压蒸发至水相约2mL，取水相并用纯水2mL洗涤旋转蒸发瓶2次，合计大概6ml；‑80℃冷藏10min后冻干，得干粉；pH3.0磷酸缓冲液4mL溶解，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，留酯相，40℃、弱光下减压蒸干，用A泵流动相溶解，过Pak‑ODS‑C18小柱；在进行HPLC分析前样品过0.22μm的微孔滤膜，作为供试液。本发明专利技术采用现有提取工艺不但操作简单，耗时短，省时省工，并且回收率得到了提高。

An effective method for the determination of endogenous hormones in Musa and Herba plants.

The invention belongs to the field of plant science and technology, and discloses an efficient extraction method suitable for the determination of endogenous hormones of banana and Hebana plants, including: weighing banana leaves 0.2g, freezing and grinding liquid nitrogen into powder, adding pre-cooled 80% methanol solution 6ml, soaking in refrigerator at 4 C overnight, adding 80% methanol 2mL washing residue, and weighing The supernatant was washed with 0.22 um microporous membrane and 80% methanol 2 mL. The filtered supernatant was transferred to a rotary evaporator. The supernatant was decompressed and evaporated to about 2 mL of water phase at 36 C and under weak light. The water phase was taken and the rotary evaporator was washed with pure water 2 mL twice, totaling about 6 ml. Freeze-dried powder was obtained; pH 3.0 phosphate buffer was dissolved in 4mL, extracted three times with the same volume of ethyl acetate, the ester phase was retained, decompressed and steam-dried at 40 C and low light, dissolved in A-pump mobile phase, and passed through Pak_ ODS_ C18 column; the sample was filtered through a microporous membrane of 0.22 micron before HPLC analysis as the test solution. The present extraction process has the advantages of simple operation, short time-consuming, time-saving and labor-saving, and the recovery rate is improved.

【技术实现步骤摘要】
适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法
本专利技术属于芭蕉属与赫蕉属植物
，尤其涉及一种适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：高效液相色谱(HPLC)具有高效、高灵敏度的特点，成为植物内源激素较理想的分析方法。当前最常用的提取方法是用80％的冰甲醇来提取，浸提过夜，收集滤液，旋转蒸干，用少量水溶解残液，冻融过夜，溶化后，离心取上清液，调节pH，加乙酸乙酯萃取，取有机相，然后再旋转蒸发，最后用流动相溶解，上样测定。芭蕉属与赫蕉属植物具有内含物、干扰物质相对较少的特点，采用现有提取工艺不但操作复杂，耗时长，而且一次只能检测一种目标物，峰位重迭、过度密挤、双峰、拖尾等问题严重，还费时费工，并且回收率一般低于80％。综上所述，现有技术存在的问题是：该方法的工艺流程依照当前改良的前处理方法、分析纯化仪器的进步来说是落后的。主要表现在浸提液经过简单的离心处理，收集上清液过程中，存在以下缺陷：1、上清液与沉淀交界处普遍存在悬浊液体，如果收集悬浊液并入上清液，可提高样品回收率，但后面的操作会出现沉淀干扰现象；2、如果舍弃上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法，其特征在于，所述适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法包括：称取香蕉叶片0.2g，液氮速冻并研磨成粉末，加入预冷的80％甲醇溶液6ml，4℃冰箱浸提过夜；加80％甲醇2mL洗涤残渣，重复操作2次，合并上清液；上清液过0.22um微孔滤膜，80％甲醇2mL冲洗微孔滤膜残渣，过滤后的上清液转入旋转蒸发瓶中，在36℃、弱光下减压蒸发至水相约2mL，取水相并用纯水2mL洗涤旋转蒸发瓶2次，合计大概6ml；‑80℃冷藏10min后冻干，得干粉；pH3.0磷酸缓冲液4mL溶解，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，留酯相，40℃、弱光下减压蒸干...

【技术特征摘要】
1.一种适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法，其特征在于，所述适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法包括：称取香蕉叶片0.2g，液氮速冻并研磨成粉末，加入预冷的80％甲醇溶液6ml，4℃冰箱浸提过夜；加80％甲醇2mL洗涤残渣，重复操作2次，合并上清液；上清液过0.22um微孔滤膜，80％甲醇2mL冲洗微孔滤膜残渣，过滤后的上清液转入旋转蒸发瓶中，在36℃、弱光下减压蒸发至水相约2mL，取水相并用纯水2mL洗涤旋转蒸发瓶2次，合计大概6ml；-80℃冷藏10min后冻干，得干粉；pH3.0磷酸缓冲液4mL溶解，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，留酯相，40℃、弱光下减压蒸干，用A泵流动相溶解，过Pak-ODS-C18小柱。2.如权利要求1所述的适用于芭蕉属与赫蕉属植物内源激素测定的高效提取方法，其特征在于，所述高效提取芭蕉属与赫蕉属植物内源激素的配置步骤如下：步骤一，称取赫蕉叶片0.2g，液氮速冻并研磨成粉末，加入冷却的80％甲醇溶液6ml，放置4℃冰箱中浸提过夜；加80％甲醇2mL洗涤残渣，重复操作2次，合并上清液；步骤二，上清液过滤；步骤三，取水相并用纯水洗涤旋转蒸发瓶2次，合计大概6ml；-80℃冷藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨俊杰，牛先前，林金水，曹明华，王龙平，蔡坤秀，
申请(专利权)人：福建省热带作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35