一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法及其检测方法，包括：将茶叶粉末加入水进行预浸泡，向浸泡液中加入乙腈超声提取，过滤；向提取液中加入聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠，涡旋混合，离心得上清液Ⅰ；取上清液Ⅰ，加入强阳离子交换填料PCX，涡旋混合，离心，得沉淀物和上清液Ⅱ；将沉淀物依次用乙腈、5%氨水乙腈洗脱，收集5%氨水乙腈洗脱液；取上清液Ⅱ，加入PCX，涡旋混合，离心，得上清液Ⅲ，重复步骤1‑2次；合并5%氨水乙腈洗脱液和上清液Ⅲ，经有机滤膜过滤，得到待测样品。本发明专利技术可使茶多酚类物质吸附清除率达94%以上，咖啡碱物质吸附清除率达85%以上，大大提高了样品的前处理效果，具有操作简单、耗时短、溶剂消耗少、成本低等优点。

A pretreatment method for determination of pesticide residues in tea and its detection method

The invention discloses a pretreatment method and a detection method for determining various pesticide residues in tea, including: adding tea powder to water for pre-immersion, adding acetonitrile to the soaking solution for ultrasonic extraction, filtering, adding polyvinylpyrrolidone and sodium chloride to the extracting solution, whirling and mixing, centrifuging to obtain supernatant I; The supernatant I was prepared by adding strong cation exchange filler PCX, vortex mixing and centrifugation to obtain precipitate and supernatant II; the precipitate was eluted by acetonitrile and 5% ammonia acetonitrile in turn, and the 5% ammonia acetonitrile elution solution was collected; the supernatant II was taken and added PCX, vortex mixing and centrifugation to obtain supernatant III, and the steps were repeated 1_2 times; and 5% ammonia water was combined. Acetonitrile eluent and supernatant III were filtered by organic filtration membrane to get the samples to be tested. The invention can make the adsorption clearance rate of tea polyphenols up to 94% and caffeine up to 85%, greatly improve the pretreatment effect of the sample, and has the advantages of simple operation, short time-consuming, less solvent consumption and low cost.

【技术实现步骤摘要】
一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法及其检测方法
本专利技术属于属于食品安全检测领域，具体涉及一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法及其检测方法。
技术介绍
我国是茶叶生产与消费大国，茶作为健康饮品一直受到百姓的喜爱，但近年来六大茶类农残超标时有报道，引起了人们对茶叶安全的担忧，也不利于茶产业的发展。为应对越来越严苛的茶叶农残标准，质谱联用技术被广泛应用，尤其是高分辨质谱近年来受到较大关注。但是由于茶叶中茶多酚含量高达20-40％、咖啡碱含量也有2-5％，不仅严重影响了高分辨质谱在茶叶多农药残留的准确定量，而且还会污染离子源，对色谱柱、离子源、检测仪器造成极大的损害。现有的分析茶叶农药残留的方法多集中在单一类型农药，或者不同类型茶样使用不同处理方式，以克服基质效应的影响，方法较为复杂。CN201310056873公开了一种茶叶固相萃取柱及检测茶叶农药残留物的样品前处理方法，该方法操作步骤较多，费用和试剂消耗较高。CN201410226018公开了一种测定茶叶中多种烟碱农药残留的预处理及其检测方法，先用pvpp除去茶多酚，后使用多种混合材料如PSA/GCB/C18等进行吸附，最后要吹干复溶，操作步骤繁琐，应用范围仅用于烟碱类8种农药，比较局限。因此，有必要研究一种操作简单、耗时短、成本低、高效的适合六大茶类的茶叶多农残前处理方法。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，该方法操作简单，并可有效的去除茶叶中多酚类物质、咖啡碱等干扰基质，且对农药的回收率基本不受影响，大大提高了样品的前处理效果，适用于六大茶类的茶叶多农残的前处理。本专利技术是通过以下技术方案实现：一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，包括如下步骤：(1)将茶叶样品粉碎，得到茶叶粉末；(2)将步骤(1)所得的茶叶粉末加入水进行预浸泡，然后向浸泡液中加入乙腈超声提取，过滤，得到提取液；(3)向步骤(2)所得的提取液中加入聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠，涡旋混合，离心得上清液Ⅰ；(4)取步骤(3)所得上清液Ⅰ，加入强阳离子交换填料PCX，涡旋混合，离心，得沉淀物和上清液Ⅱ；(5)将步骤(4)所得的沉淀物依次用乙腈、5％氨水乙腈洗脱，收集5％氨水乙腈洗脱液；(6)取步骤(4)所得上清液Ⅱ，加入强阳离子交换填料PCX，涡旋混合，离心，得上清液Ⅲ，重复步骤1-2次；(7)合并步骤(5)中的5％氨水乙腈洗脱液和步骤(6)中的上清液Ⅲ，经有机滤膜过滤，得到待测样品。其中，强阳离子交换填料PCX，常用作吸附填料，对生物碱类物质具有较好的吸附作用，可通过市购得到。由于茶叶中含有大量的茶多酚(20-40％)和咖啡碱(2-5％)等基质成分，液相-高分辨质谱对基质干扰较为敏感，因此在进行仪器检测分析前，通常需要对采用合适的样品前处理方法避免基质对目标成分分析的干扰，以提高检测的准确性。基于此，本专利技术通过研究，优选了两种材料作为吸附填料，其中PVP主要吸附多酚类物质及氨基酸类、色素物质，PCX主要吸附生物碱类物质。本专利技术利用分散固相萃取技术，先加入PVP直接除去茶多酚、氨基酸类、色素物质等，可使茶多酚类物质吸附清除率达94％以上，接着先用少量的PCX萃取碱性农药，碱性农药可几乎完全吸附，吸附沉淀再采用洗脱溶剂解吸碱性农药备用，而此时对咖啡碱的吸附率小于10％，接着将吸附后的上清液再用大量PCX除去咖啡碱物质，对咖啡碱物质的吸附清除率可达到85％以上。通过上述方法，可将茶叶中茶多酚、咖啡碱等基质基本清除，而残留农药基本保留，大大提高了样品的前处理效果，保证了后续检测的准确性。优选的，步骤(2)中，所述茶叶粉末与水的质量比为1：1～5，预浸泡的时间为10-60min。优选的，步骤(2)中，所述乙腈的体积与茶叶粉末的质量的比例范围为5～20ml：1g，超声提取的时间为10-30min。现有的对茶多酚物质的吸附材料主要有PVP、PPVP、PSA、PAX、PCX等，本专利技术通过实验，比较了几种吸附材料对茶多酚的吸附效果的影响，具体方法为：将茶叶粉末1.0g加入2mL水进行预浸泡30min，然后向浸泡液中加入8ml乙腈超声提取15min，过滤，得到提取液；向提取液中加入按表1所示的各吸附填料和2g氯化钠，涡旋混合1min，5000rpm离心3min，得上清液Ⅰ，测试对茶多酚的吸附清除率，结果如表1所示：表1：PVPP/1gPSA/1gPAX/1gPCX/1gPVP/1g94％69％62％8％97％由表1结果可以看出，在加入量相同的情况下，PVP对茶多酚的吸附效果最优，因此，筛选出聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作为本专利技术的吸附材料。本专利技术进一步对聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的加入量进行了优化，具体结果如表2所示：表2：PVP/1gPVP/0.75gPVP/0.5gPVP/0.25g97％95％94％83％由表2结果可以看出，当聚乙烯吡咯烷酮(PVP)与茶叶粉末的质量比为0.25～1：1，对茶多酚的吸附效果可达到80％以上，当聚乙烯吡咯烷酮(PVP)入到一定量时，吸附达到饱和,优选的，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)与茶叶粉末的质量比为0.5～1：1。优选的，步骤(3)中，所述氯化钠与茶叶粉末的质量比为1～3：1。本专利技术选择PCX，目的主要是为了吸附咖啡碱等生物碱物质，减少基质干扰。本专利技术通过实验，比较了几种交换材料(COOH,SCX和PCX)对咖啡碱和茶碱的吸附效果的影响，具体操作方法为：将茶叶粉末1.0g加入2mL水进行预浸泡30min，然后向浸泡液中加入8ml乙腈超声提取15min，过滤，得到提取液；向提取液中加入PVP和2g氯化钠，涡旋混合1min，5000rpm离心3min，得上清液Ⅰ，将2ml上清液Ⅰ，加入按表3所示的各种交换填料，涡旋混合30s，5000rpm离心3min，得沉淀物和上清液Ⅱ，测试对咖啡碱和茶碱的吸附率，结果如表3所示：表3：PCX/100mgSCX/100mgCOOH/100mg咖啡碱65％29％11％茶碱65％42％20％由表3结果可以看出，PCX对茶叶生物碱的吸附效果最优，因此，筛选出PCX作为本专利技术的吸附茶叶生物碱材料。本专利技术进一步对PCX的加入量进行了优化，将2ml上清液Ⅱ(含茶叶粉末0.2g)，加入按表4所示的PCX量填料，涡旋混合30s，测试对咖啡碱和茶碱的吸附率，结果见表4：表4由表4结果可以看出，当PCX的质量与茶叶粉末的质量比为75mg：0.2g，再重复步骤1次时，对茶叶生物碱的吸附已较完全，优选的，步骤(6)中，所述强阳离子交换填料PCX与茶叶粉末的质量比为250～500mg：1g，优选为375～500mg：1g。PCX除了吸附茶叶生物碱外，也会吸附其它碱性物质，如碱性农药等，造成农药的损失，由表4也可以看出，当加入少量PCX时，对茶叶咖啡碱、茶碱的吸附较少(低于10％)，而对碱性农药几乎完全吸附，因此，优选的，步骤(4)中，所述强阳离子交换填料PCX与茶叶粉末的质量比为50～100mg：1g。优选的，步骤(3)、(4)和(6)中，所述涡旋混合的时间为30s～2min，离心的转速为3000～6000rpm，离心时间为1～5min。本专利技术还提供了一种测定茶叶中多种农药残留的检测方法，包括如下步本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将茶叶样品粉碎，得到茶叶粉末；（2）将步骤（1）所得的茶叶粉末加入水进行预浸泡，然后向浸泡液中加入乙腈超声提取，过滤，得到提取液；（3）向步骤（2）所得的提取液中加入聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠，涡旋混合，离心得上清液Ⅰ；（4）取步骤（3）所得上清液Ⅰ，加入强阳离子交换填料PCX，涡旋混合，离心，得沉淀物和上清液Ⅱ；（5）将步骤（4）所得的沉淀物依次用乙腈、5%氨水乙腈洗脱，收集5%氨水乙腈洗脱液；（6）取步骤（4）所得上清液Ⅱ，加入强阳离子交换填料PCX，涡旋混合，离心，得上清液Ⅲ，重复步骤1‑2次；（7）合并步骤（5）中的5%氨水乙腈洗脱液和步骤（6）中的上清液Ⅲ，经有机滤膜过滤，得到待测样品。

【技术特征摘要】
1.一种测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将茶叶样品粉碎，得到茶叶粉末；（2）将步骤（1）所得的茶叶粉末加入水进行预浸泡，然后向浸泡液中加入乙腈超声提取，过滤，得到提取液；（3）向步骤（2）所得的提取液中加入聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠，涡旋混合，离心得上清液Ⅰ；（4）取步骤（3）所得上清液Ⅰ，加入强阳离子交换填料PCX，涡旋混合，离心，得沉淀物和上清液Ⅱ；（5）将步骤（4）所得的沉淀物依次用乙腈、5%氨水乙腈洗脱，收集5%氨水乙腈洗脱液；（6）取步骤（4）所得上清液Ⅱ，加入强阳离子交换填料PCX，涡旋混合，离心，得上清液Ⅲ，重复步骤1-2次；（7）合并步骤（5）中的5%氨水乙腈洗脱液和步骤（6）中的上清液Ⅲ，经有机滤膜过滤，得到待测样品。2.根据权利要求1所述的测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，其特征在于，步骤（2）中，所述茶叶粉末与水的质量比为1：1~5，预浸泡的时间为10-60min。3.根据权利要求1所述的测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，其特征在于，步骤（2）中，所述乙腈的体积与茶叶粉末的质量的比例范围为5~20ml：1g，超声提取的时间为10-30min。4.根据权利要求1所述的测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，其特征在于，步骤（3）中，所述聚乙烯吡咯烷酮与茶叶粉末的质量比为0.25~1：1，优选为0.5~1：1；所述氯化钠与茶叶粉末的质量比为1~3：1。5.根据权利要求1所述的测定茶叶中多种农药残留的前处理方法，其特征在于，步骤（4）中，所述强阳离子交换填料PCX与茶叶粉末的质量比为50~100mg：1g。6.根据权利要求1所述的测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：李少华，陈达炜，陈荣冰，张渤，王飞权，
申请(专利权)人：武夷学院，
类型：发明
国别省市：福建,35