一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒，包括两条特异性引物，所述试剂盒还包括M‑MLV反转录酶、M‑MLV酶反应缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+和PCR反应缓冲液。本发明专利技术还提供一种鸽I型副粘病毒病的检测方法，其包括以下步骤：(1)提取待测样品总RNA，(2)设计并合成引物，(3)RT‑PCR，(4)电泳检测。本发明专利技术提供了一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒与检测方法，利用RT‑PCR方法检测鸽I型副粘病毒病，克服了分离鸽I型副粘病毒病核酸的繁琐步骤，节省时间，大大提高了检测的可操作性、灵敏性和可重复性，为鸽I型副粘病毒病的检测提供了有效方法。

Detection kit for pigeon I paramyxovirus disease and its detection method

The invention discloses a detection kit for pigeon paramyxovirus type I disease, which comprises two specific primers. The kit also includes M_MLV reverse transcriptase, M_MLV enzyme reaction buffer, dNTPs, Taq DNA polymerase, Mg2+ and PCR reaction buffer. The invention also provides a detection method for pigeon paramyxovirus disease type I, which comprises the following steps: (1) extracting total RNA from the sample to be tested, (2) designing and synthesizing primers, (3) RT_PCR, (4) electrophoresis detection. The invention provides a detection kit and a detection method for pigeon paramyxovirus disease type I. RT_PCR method is used to detect pigeon paramyxovirus disease type I, which overcomes the complicated steps of separating nucleic acid from pigeon paramyxovirus disease type I, saves time, greatly improves the operability, sensitivity and repeatability of detection, and is pigeon paramyxovirus type I. Disease detection provides an effective way.

【技术实现步骤摘要】
一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒及其检测方法
本专利技术属于病毒检测
，具体涉及一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
鸽I型副黏病毒病是由鸽副黏病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病，俗称“鸽瘟”，具有与新城疫病原类似的特性。各种品种、年龄、性别的鸽都易感，发病没有明显的季节性，一年四季都有发生。鸽被I型副黏病毒感染后，潜伏期1-10天，通常1-5天。病鸽表现扭头、曲颈、转圈，有的不能站立,有的翅下垂，有的蹲伏或侧卧。食欲下降，嗉囊空虚，充满液体或气体，倒提口流黏液。拉黄绿色稀便，鸽的羽毛、趾爪常被粪便污染为黄绿色。目前此病无有效的药品。由于该病的死亡率一般可达20％-80％，对养鸽业危害极大，故需一种专门针对鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒及其检测方法，及早发现快速诊断。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒与检测方法。技术方案：本专利技术所述的一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒，包括两条特异性引物：SPLVGV-1：5’-CACAGTCAAACCCGAACAAAGGATT-3’；SPLVGV-2：5’-GAAGCATAGCGTGCTAAACCCAGTT-3’。进一步的，所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+和PCR反应缓冲液。进一步的，所述试剂盒还包括标准阳性模板。本专利技术中还提供一种鸽I型副粘病毒病的检测方法，其包括以下步骤：(1)提取待测样品总RNA；(2)设计并合成引物；(3)RT-PCRa.反转录合成cDNA，以鸽I型副粘病毒总RNA为模板，以SPLVGV-2引物，通过反转录酶合成cDNAb.PCR扩增，以cDNA为模板，以SPLVGV-1和SPLVGV-2为引物，进行PCR反应；(4)电泳检测吸取2.5μLRT-PCR产物进行0.8-1.5％的琼脂糖凝胶电泳，经核糖染色Goldview，通过凝胶成像仪观察，在感染该鸽I型副粘病毒病的样品中有895bp的核酸条带。进一步的，所述步骤(1)中总RNA提取法采用的是多糖多酚组织的裂解法。进一步的，所述步骤(3)中PCR扩增阶段的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性1min；54℃退火1min；72℃延伸1min，共进行35个循环，72℃延伸7min，4℃保存。有益效果：本专利技术提供了一种在检测鸽I型副粘病毒病鉴别诊断的试剂盒与检测方法，利用RT-PCR方法检测鸽I型副粘病毒病，克服了分离鸽I型副粘病毒病核酸的繁琐步骤，节省时间，大大提高了检测的可操作性、灵活性和可重复性，为鸽I型副粘病毒病的检测提供了有效方法。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，该实施例仅用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术保护范围的限定。实施例(1)引物设计与合成根据鸽I型副粘病毒小RNA高通量测序分析结果，设计并合成该O型鸽I型副粘病毒的特异性引物：SPLVGV-1(CACAGTCAAACCCGAACAAAGGATT)和SPLVGV-2(GAAGCATAGCGTGCTAAACCCAGTT)；(2)总RNA提取多肽多酚组织裂解法(3)RT-PCRa.反转录合成cDNA以鸽I型副粘病毒总RNA为模板，以SPLVGV-2引物，通过反转录酶为MLV，合成cDNA，反转录体系为：模板RNA600ngSPLVGV-20.5μLRTaseM-MLV0.5μL5×M-MLVBuffer2μLdNTPMixture2μLRNaseInhibitor(40U·μL-1)0.25μLddH2O至10μL轻弹管壁混匀，稍离心后，42℃保温60min，然后置冰上待用；b.PCR扩增cDNA2μL2×TaqMix10μLSPLVGV-1(10μmol)2μLSPLVGV-2(10μmol)2μLddH2O至10μLPCR程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，54℃退火1min，72℃延伸1min，共进行35个循环，72℃延伸7min，4℃保存；(4)电泳检测吸取2.5μLRT-PCR产物进行0.8-1.5％的琼脂糖凝胶电泳，经核糖染色Goldview，通过凝胶成像仪观察，有895bp的核酸条带，为受鸽I型副粘病毒病侵染的样品，无条带为未受侵染样品。以上所述，仅是本专利技术的较佳实施例，并非对本专利技术作任何限制，凡是根据本专利技术技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本专利技术技术方案的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒，其特征在于，包括两条特异性引物：SPLVGV‑1：5’‑CACAGTCAAACCCGAACAAAGGATT‑3’；SPLVGV‑2：5’‑GAAGCATAGCGTGCTAAACCCAGTT‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒，其特征在于，包括两条特异性引物：SPLVGV-1：5’-CACAGTCAAACCCGAACAAAGGATT-3’；SPLVGV-2：5’-GAAGCATAGCGTGCTAAACCCAGTT-3’。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+和PCR反应缓冲液。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。4.一种鸽I型副粘病毒病的检测检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)提取待测样品总RNA；(2)设计并合成引物；(3)RT-PCRa.反转录合成cDNA，以甘薯总RNA为模板，以S...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘书勇，魏朋，陈国兴，解立洪，
申请(专利权)人：刘书勇，魏朋，陈国兴，解立洪，
类型：发明
国别省市：广东,44