体外生物瓣抗钙化处理方法、钙化评价方法技术

本发明专利技术涉及一种体外生物瓣抗钙化处理方法、钙化评价方法。包括步骤：将生物瓣膜浸入抗钙化因子溶液中，抗钙化因子溶液为醇类、碱溶液、油脂及其衍生物、缓冲溶液组成的混合液；以及加热，使得抗钙化因子的化学物质与生物瓣膜中游离的基团进行化学结合，封闭生物瓣膜中游离的醛基和羧基，得到抗钙化的生物瓣膜。再将得到的抗钙化的生物瓣膜浸入血浆含钙溶液中，使得抗钙化的生物瓣膜与血浆含钙溶液中的钙离子反应，钙离子通过化学键结合到抗钙化的生物瓣膜中；取反应后的抗钙化的生物瓣膜进行原子吸收光谱钙含量测定，与标准对照样进行对比，得到抗钙化的生物瓣膜的钙含量。该方法快速有效，评价周期短，同时减少了工序，节省了评价费用。

Calcification treatment and calcification evaluation of bioprosthetic valve in vitro

The invention relates to an external biological valve anti calcification treatment method and a calcification evaluation method. The steps include: immersing the biovalve in the anti-calcification factor solution, the anti-calcification factor solution is a mixture of alcohols, alkali solution, oil and its derivatives, buffer solution; and heating, which makes the anti-calcification factor chemicals chemically combine with the free groups in the biovalve to seal the free groups in the biovalve. The aldehyde and carboxyl groups are biocalcified. Then the anti-calcification biovalve was immersed in the calcium-containing solution of plasma, which made the anti-calcification biovalve react with calcium ion in the calcium-containing solution of plasma. Calcium ion was bonded to the anti-calcification biovalve by chemical bond. After the reaction, the anti-calcification biovalve was taken for determination of calcium content by atomic absorption spectrometry. The calcium content of anti calcified bioprosthetic valves was compared. The method is fast and effective, with short evaluation cycle, and reduced process cost.

【技术实现步骤摘要】
体外生物瓣抗钙化处理方法、钙化评价方法本申请是名称为：体外生物瓣钙化评价的方法及抗钙化因子溶液，申请号为：201510434781.X的专利技术专利的分案申请，母案申请日为2015年7月22日。
本专利技术涉及生物瓣膜领域，具体涉及一种体外生物瓣抗钙化处理方法、钙化评价方法。
技术介绍
目前年龄超过65岁老年人中，由于主动脉瓣钙化所致的主动脉瓣狭窄发生率达2％～7％，随着年龄增长主动脉瓣狭窄比例越来越高。严重主动脉瓣狭窄的病人左心功能严重受损，病人生活质量下降且生存时间明显缩短，必须进行有效的治疗。针对外科手术适应症的严重主动脉瓣病人，外科人工主动脉瓣置换术(无论选用机械瓣或生物瓣)仍然是首选治疗，置换后主动脉瓣口面积常大于1.5cm2。然而，对于那些高龄、主动脉瓣狭窄终末期、全身多发的严重合并症的病人，外科主动脉瓣置换术后死亡和其它严重并发症的发生率大大增加。经皮球囊主动脉瓣成形术治疗老年主动脉瓣狭窄的方法，由于术中、手术后产生死亡、中风、主动脉破裂、主动脉瓣严重关闭不全等严重并发症的发生率高，术后短期(3～12个月)内主动脉瓣又明显狭窄，所以已不作为严重主动脉瓣狭窄的治疗方法。另外，严重主动脉瓣狭窄的高龄老年病人，无外科手术适应症时，临床治疗十分困难。现有技术中，在进行动物试验前，选取适龄的猪或者羊，经过医生超声以及健康状况观察，评价手术风险和匹配度，确定瓣架和主肺动脉口径的吻合度，要求瓣架尺寸与主动脉或者肺动脉口径相匹配，防止瓣周漏或移位等情况发生。然后根据动物临床的要求开展动物临床，将经过处理后的生物瓣植入到猪或者羊体内，经超声影像观察瓣膜正常工作，通过饲养半年到一年的观察期，解剖取出生物瓣后经原子吸收光谱法检测生物瓣组织的含钙量，从而判定生物瓣的抗钙化性能。通过动物临床来评价生物瓣钙化的方法具有一定的局限性，对临床手术和临床医生的技术依存度要求高、对动物选择也有相应要求，同时饲养周期长、受饲养环境和个体差异的影响较大，可能出现其它症状，比如生物瓣表皮化、生长赘生物等，不能准确有效的反映生物瓣化学处理后与钙离子的化学作用。现有技术方法不仅仅在技术上增加了难度，而且时间和成本上都大幅的增加，同时在生物瓣的钙化性能评价上，受到多种因素的影响。
技术实现思路
基于此，有必要针对上述问题，提供一种体外生物瓣抗钙化处理方法和钙化评价方法。所述的抗钙化因子英文全称为：ReducingCalciumIngredient，简称为：RCI。一种体外生物瓣抗钙化处理方法，包括步骤：将生物瓣膜浸入抗钙化因子溶液中，所述抗钙化因子溶液为醇类、碱溶液、油脂及其衍生物、缓冲溶液组成的混合液；以及加热，使得所述抗钙化因子的化学物质与所述生物瓣膜中游离的基团进行化学结合，封闭所述生物瓣膜中游离的醛基和羧基，得到抗钙化的生物瓣膜。在其中一个实施例中，所述加热为在30℃～40℃的恒温水浴锅中以120rpm～130rpm转速温浴67h～72h。在其中一个实施例中，每配制1L所述抗钙化因子溶液包括：150mL～300mL的试剂A，所述试剂A为醇类；10mL～100mL的试剂B，所述试剂B为碱溶液；0.5g～9.0g的试剂C，所述试剂C为油脂及其衍生物；690mL～820mL的试剂D，所述试剂D为缓冲溶液，pH值8.5～9.5。在其中一个实施例中，所述试剂A包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种。在其中一个实施例中，所述试剂B包括KOH、NaOH中的任意一种。在其中一个实施例中，所述试剂C包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种。在其中一个实施例中，所述试剂D包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种。在其中一个实施例中，所述抗钙化因子溶液经预加热处理，所述预加热处理为在30℃～40℃的恒温水浴锅中以5rpm～10rpm转速温浴18h～24h。对抗钙化因子溶液进行预热，让有效成分充分均匀，达到一个稳定有效的工作环境溶液。在其中一个实施例中，所述生物瓣膜经过前处理，所述前处理为将所述生物瓣膜浸入戊二醛溶液中，使所述生物瓣膜的基因配对。具体过程为：取切割好的瓣膜，放置换于空瓶中，用戊二醛溶液完全浸泡，室温静置18h～24h。通过戊二醛浸泡所述生物瓣膜，达到饱和过交联的作用，使所述生物瓣膜的基团充分配对。在其中一个实施例中，所述戊二醛溶液的浓度为0.25％～5.0％。在其中一个实施例中，每配制5L所述戊二醛溶液包括：1.0g～3.0g的硫酸镁，1.0g～3.0g的氯化钾，3.0g～5.0g的磷酸氢二钠，0.6g～1.2g的磷酸二氢钾，15g～30g的氯化钠，150mL～250mL的25％戊二醛，500mL～1000mL的异丙醇。在其中一个实施例中，经过前处理的所述生物瓣膜使用硼酸盐缓冲溶液清洗。具体过程为：将前处理的液体倒去，倒入硼酸盐缓冲溶液浸没，晃动清洗一次或数次，倒去液体。在其中一个实施例中，每配制1L所述硼酸盐缓冲溶液包括：3.0g～15.0g的氯化钠，2.0g～5.0g的四硼酸钠。在其中一个实施例中，所述硼酸盐缓冲溶液的pH值8.5～9.5。上述通过抗钙化因子溶液的配合对生物瓣膜在体外进行化学处理，封闭生物瓣膜中游离的醛基和羧基，减小生物瓣膜与钙离子的结合力，从而降低生物瓣膜的挂钙量，增强生物瓣膜的抗钙化能力。本专利技术还提供一种体外生物瓣钙化评价方法，包括步骤：将上述得到的所述抗钙化的生物瓣膜浸入血浆含钙溶液中，使得所述抗钙化的生物瓣膜与所述血浆含钙溶液中的钙离子反应，所述钙离子通过化学键结合到所述抗钙化的生物瓣膜中；取反应后的所述抗钙化的生物瓣膜进行原子吸收光谱钙含量测定，与标准对照样进行对比，得到所述抗钙化的生物瓣膜的钙含量。在其中一个实施例中，所述抗钙化的生物瓣膜在浸入所述血浆含钙溶液之前保存于生理盐水溶液中。在其中一个实施例中，所述的保存温度为2℃～8℃。在其中一个实施例中，所述生理盐水溶液为0.9％生理盐水，每配制10L所述生理盐水包括：90g±0.1g的氯化钠。在其中一个实施例中，所述血浆含钙溶液中的血浆是人工代血浆，每配制1L所述人工代血浆含钙溶液包括：10mL～15mL的10％CaCl2溶液，900mL～1000mL的羟乙基淀粉氯化钠注射液。上述体外生物瓣膜钙化评价方法可以快速有效的判断抗钙化处理后的生物瓣膜的抗钙化性能，评价周期短，同时减少了工序，节省了评价费用。具体实施方式以下将对本专利技术的较佳实施例作详细说明。具体方案如下：1.钙化评价液配制本专利技术的整个方案中需用到5种溶液，0.25～5.0％戊二醛溶液、0.9％生理盐水溶液、BBS溶液、RCI溶液、人工代血浆含钙溶液。其成分及含量如下所示：上述试剂中：试剂A为醇类，包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种；试剂B为碱溶液，包括KOH、NaOH中的任意一种；试剂C为油脂类及其衍生物，包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种；试剂D为缓冲溶液，包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。2.RCI溶液预加热取RCI溶液于30～40℃的恒温水浴锅中以5～10rpm转速温浴18本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外生物瓣抗钙化处理方法，其特征在于，包括步骤：将生物瓣膜浸入抗钙化因子溶液中，所述抗钙化因子溶液为醇类、碱溶液、油脂及其衍生物、缓冲溶液组成的混合液；以及加热，使得所述抗钙化因子的化学物质与所述生物瓣膜中游离的基团进行化学结合，封闭所述生物瓣膜中游离的醛基和羧基，得到抗钙化的生物瓣膜。

【技术特征摘要】
1.一种体外生物瓣抗钙化处理方法，其特征在于，包括步骤：将生物瓣膜浸入抗钙化因子溶液中，所述抗钙化因子溶液为醇类、碱溶液、油脂及其衍生物、缓冲溶液组成的混合液；以及加热，使得所述抗钙化因子的化学物质与所述生物瓣膜中游离的基团进行化学结合，封闭所述生物瓣膜中游离的醛基和羧基，得到抗钙化的生物瓣膜。2.根据权利要求1所述的体外生物瓣抗钙化处理方法，其特征在于，所述加热为在30℃～40℃的恒温水浴锅中以120rpm～130rpm转速温浴67h～72h。3.根据权利要求1所述的体外生物瓣抗钙化处理方法，其特征在于，每配制1L所述抗钙化因子溶液包括：150mL～300mL的试剂A，所述试剂A为醇类；10mL～100mL的试剂B，所述试剂B为碱溶液；0.5g～9.0g的试剂C，所述试剂C为油脂及其衍生物；690mL～820mL的试剂D，所述试剂D为缓冲溶液，pH值8.5～9.5。4.根据权利要求3所述的体外生物瓣抗钙化处理方法，其特征在于，所述试剂A包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种。5.根据权利要求3所述的体外生物瓣抗钙化处理方法，其特征在于，所述试剂B包括KOH、NaOH中的任意一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：邝大军，邵南，
申请(专利权)人：杭州启明医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33