一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法技术

本发明专利技术涉及一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其包括以下步骤：步骤一：从乳鼠中提取原代成骨细胞，将原代成骨细胞在含10％FBS的α‑MEM培养基中培养，直至得到第三代成骨细胞；步骤二：提取pcDNA3.1(+)‑phb2质粒，pcDNA3.1(+)‑phb2为含抗增殖蛋白2片段的pcDNA3.1(+)真核表达载体；步骤三：将第三代成骨细胞在37℃下以及5％CO2的条件下孵育；当细胞汇合度≥90％时，用脂质体将pcDNA3.1(+)‑phb2质粒进行瞬时转染；步骤四：转染后，除去旧的培养基，加入新鲜的无抗生素的含10％FBS的α‑MEM培养基，继续培养。本发明专利技术提供的转染方法能够有效地将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中，对绝经后骨质疏松症治疗方法和药物的研究有重要意义。

A method for transfection of anti proliferative protein 2 into osteoblasts

The invention relates to a method for transfecting antiproliferative protein 2 into osteoblasts, which comprises the following steps: first, extracting primary osteoblasts from suckling mice, culturing primary osteoblasts in a 10% FBS-containing alpha_MEM medium until the third generation of osteoblasts is obtained; second, extracting pcDNA3.1 (+) phb2 plasmid; PcDNA3.1 (+) phb2 is a pcDNA3.1 (+) eukaryotic expression vector containing an anti-proliferative protein 2 fragment; step 3: the third generation osteoblasts were incubated at 37 C and 5% CO 2; when the confluence degree of cells was more than 90%, the pcDNA3.1 (+) phb2 plasmid was transfected by liposome; step 4: after transfection, the old medium was removed A fresh, antibiotic free 10%FBS containing MEM medium was further cultured. The transfection method provided by the invention can effectively transfect anti-proliferative protein 2 into osteoblasts, and has important significance for the research of treatment methods and drugs for postmenopausal osteoporosis.

【技术实现步骤摘要】
一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法。
技术介绍
绝经后骨质疏松症(PMOP)是中老年妇女常见的代谢性骨病，而且其发生率随着年龄的增大而不断的升高。随着人们生活条件的日益提升、寿命的不断延长使得老龄化口呈现出不断上升的趋势，PMOP已日益突出地成为社会关注和人类健康问题。绝经后成骨细胞的异常凋亡是引起骨质疏松的又一重要机制。线粒体在细胞生命活动过程以及细胞凋亡过程中承担着重要角色，而线粒体内膜中含有一种膜蛋白叫抗增殖蛋白(Prohibitin，PHB)，该蛋白能够维持线粒体的结构和功能，并且在细胞的分化和凋亡活动中有着重要的地位。成骨细胞和骨细胞中存在PI3K/Akt信号通路，该信号通路与成骨细胞增殖、分化和凋亡的活动有关。Akt包括了Akt1、Akt2、Akt3三种亚型，其中Akt1和Akt2对骨代谢有重要作用，且Akt2是成骨细胞增殖分化所必需的，激活PI3K/Akt信号通路可增加成骨细胞的分化。PHB与PI3K/Akt信号通路相关，而药物或因子也可以引起成骨细胞中PHB表达的变化。PHB是由抗增殖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：从乳鼠中提取原代成骨细胞，将所述原代成骨细胞在含10％FBS的α‑MEM培养基中培养，直至得到第三代成骨细胞；步骤二：提取pcDNA3.1(+)‑phb2质粒，所述pcDNA3.1(+)‑phb2为含抗增殖蛋白2片段的pcDNA3.1(+)真核表达载体；步骤三：将第三代成骨细胞在37℃下以及5％CO2的条件下孵育；当细胞汇合度≥90％时，用脂质体将pcDNA3.1(+)‑phb2质粒进行瞬时转染；步骤四：转染后，除去旧的培养基，加入新鲜的无抗生素的含10％FBS的α‑MEM培养基，继续培养。

【技术特征摘要】
1.一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：从乳鼠中提取原代成骨细胞，将所述原代成骨细胞在含10％FBS的α-MEM培养基中培养，直至得到第三代成骨细胞；步骤二：提取pcDNA3.1(+)-phb2质粒，所述pcDNA3.1(+)-phb2为含抗增殖蛋白2片段的pcDNA3.1(+)真核表达载体；步骤三：将第三代成骨细胞在37℃下以及5％CO2的条件下孵育；当细胞汇合度≥90％时，用脂质体将pcDNA3.1(+)-phb2质粒进行瞬时转染；步骤四：转染后，除去旧的培养基，加入新鲜的无抗生素的含10％FBS的α-MEM培养基，继续培养。2.根据权利要求1所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：步骤一中，所述乳鼠为1至3日龄的Sprague-Dawley大鼠。3.根据权利要求1所述的一种将抗增殖蛋白2转染到成骨细胞中的方法，其特征在于：步骤二中，使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：周志昆，傅健英，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44