抗人CD47抗体及其用途制造技术

本申请公开了特异性结合人CD47的抗体或其抗原结合部分，编码所述抗体或其抗原结合部分的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体或其抗原结合部分的应用。

Anti human CD47 antibodies and their uses

The present application discloses an antibody specifically binding to human CD47 or its antigen binding portion, a polynucleotide encoding the antibody or its antigen binding portion, a carrier containing the polynucleotide, a host cell containing the polynucleotide or carrier, a method for preparing and purifying the antibody, and the antibody or its antigen binding portion. Application.

【技术实现步骤摘要】
抗人CD47抗体及其用途
本申请大体涉及基因工程和抗体药物领域；具体而言，涉及抗人CD47抗体领域及其用途。本申请开发了新的抗人CD47抗体，并提供了该抗体在治疗CD47介导的疾病中的用途。
技术介绍
CD47属于免疫球蛋白超家族成员，是I型跨膜糖蛋白，包括氨基端V型免疫球蛋白样细胞外结构域，由5个高度疏水的跨膜片段构成的跨膜结构域和亲水的羧基端细胞内结构域，分子量在47-55kD之间。最初，CD47因为与整合素αvβ3相互作用而为人们所认识，因此其又称为整合素相关蛋白(IAP)1。CD47通过细胞外结构域与整合素αvβ3或αIIbβ3的β3亚基相互作用，激活相应的整合素。SIRPα(信号调节蛋白α(Signalregulatoryproteinα))，又称SHPS-1(含Src同源2结构域蛋白酪氨酸激酶底物-1(Srchomology2domain-containingproteintyrosinephosphatasesubstrate-1))/BIT(具有酪氨酸的活化基序的脑免疫球蛋白样分子(brainimmunoglobulin-likemoleculewithtyrosine-basedactivationmotifs))/CD172a，也是跨膜糖蛋白，胞外区具有3个免疫球蛋白样结构域，细胞内结构域具有典型的免疫受体酪氨酸抑制性序列(ITIM)，具有4个酪氨酸残基，是潜在的磷酸化位点。CD47是SIRPα的配体，二者通过胞外结构域相互作用，形成细胞间的通讯复合物。CD47与SIRPα结合后，诱导SIRPα胞内ITIM磷酸化，磷酸化位点结合进而激活含有SH2(Src同源2(Srchomology2))结构域的酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2，引发信号传递的级联反应。SHP-1主要表达于造血细胞，负向调节这些细胞的功能2；而SHP-2表达非常广泛，调节小G蛋白Ras和Rho，正向控制细胞生长和增殖3。SIRPα在神经元以及髓系造血细胞(如巨噬细胞和树突细胞)中表达丰富4，而CD47则表达于多数细胞中。CD47-SIRPα信号系统对调节巨噬细胞对成熟血细胞的吞噬具有重要作用。正常健康细胞(如红细胞5或血小板6)表面的CD47分子与巨噬细胞上的受体SIRPα相互作用产生抑制性信号，抑制其吞噬活性，达到调节血细胞的生命周期及其在血液中的数量的目的。单核细胞上的SIRPα与红细胞上的CD47作用，通过肌球蛋白-IIA去磷酸化抑制Fcγ受体依赖的吞噬作用7。CD47-SIRPα信号系统抑制树突细胞激活，参与神经系统发育、中性粒细胞趋化激活和基质细胞支持的造血细胞生成等多种生理活动，同时在诱导T细胞免疫耐受、活化、凋亡等方面也发挥着多种调节作用8。近年来，CD47-SIRPα信号系统通过调节巨噬细胞的吞噬作用在肿瘤免疫监视中发挥的作用受到重视。CD47在许多恶性肿瘤，如卵巢癌9、急性骨髓性白血病(AML)10、B细胞淋巴瘤11和实体瘤12中的表达水平显著上调，其平均表达水平是对应正常细胞的3.3倍左右，而且这种上调与恶性肿瘤患者的不良预后直接相关13。在人髓性白血病细胞(低水平表达内源CD47，不能移植于Rag2-Il2rg-小鼠)中表达小鼠CD47，可以抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，促进肿瘤细胞成功移植14。可以推断，肿瘤细胞上的CD47与巨噬细胞上的SIRPα作用，抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的清除，促进肿瘤在体内的生长和转移，高表达CD47是肿瘤细胞逃避免疫监视的普遍机制，阻断CD47-SIRPα作用，可能是新的肿瘤免疫治疗策略。抗CD47抗体单独使用10,12,13或者与其它肿瘤抗原抗体联合应用11，在人急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)以及许多实体瘤的小鼠移植模型上都显示了很好的抑制肿瘤生长的作用。人源化抗CD47单克隆抗体诱导巨噬细胞对人原代AML细胞的吞噬作用，在体内彻底清除人AML细胞，使得移植小鼠长期无病生存；与利妥昔单抗联合作用，能清除NHL肿瘤，治愈异种移植小鼠15。而且，抗CD47抗体的安全性在猴体内得到证实。除了抗CD47抗体，高亲和力的SIRPα突变体(CD172a)也可以拮抗CD47进而阻断CD47-SIRPα信号通路，在AML模型上能显著增加巨噬细胞对AML细胞的吞噬作用，并抑制肿瘤的生长16。新的抗CD47抗体的开发和应用是本领域所需要的。专利技术概述第一方面，本申请提供了一种特异性结合人CD47的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区，其中所述HCDR1序列为NYWMH，所述HCDR2序列为VIAPSDNYTNYNQKFQG，所述HCDR3序列为GGKYSMDY，所述LCDR1序列为RSSQSIVHSNGNTYLE，所述LCDR2序列为KVSNRFS，所述LCDR3序列为FQGSHVPFT；或者所述HCDR1序列为SYWMH，所述HCDR2序列为TIDRSDSYISYNQKFKG，所述HCDR3序列为GGPYGSKMMDN，所述LCDR1序列为HASQNINVWLS，所述LCDR2序列为KASNLHT，所述LCDR3序列为QQGQSYPLT；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPSSGNTKYAQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSLLYSSNKKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为QQFYAYPIS；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPSSGNTKYAQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSVLYSSNQKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为GQYYAYPIT；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPGSGNTRYSQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSLLYSSNKKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为QQFYAYPIS；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPGSGNTRYSQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSVLYSSNQKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为GQYYAYPIT；其中HCDR和LCDR序列根据Kabat定义。在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：23、28、30、32或者33所示。在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：24、29、31、34或者35所示。在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：23所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：24所示；或者所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：29所示；或者所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：30所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合人CD47的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区，其中所述HCDR1序列为NYWMH，所述HCDR2序列为VIAPSDNYTNYNQKFQG，所述HCDR3序列为GGKYSMDY，所述LCDR1序列为RSSQSIVHSNGNTYLE，所述LCDR2序列为KVSNRFS，所述LCDR3序列为FQGSHVPFT；或者所述HCDR1序列为SYWMH，所述HCDR2序列为TIDRSDSYISYNQKFKG，所述HCDR3序列为GGPYGSKMMDN，所述LCDR1序列为HASQNINVWLS，所述LCDR2序列为KASNLHT，所述LCDR3序列为QQGQSYPLT；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPSSGNTKYAQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSLLYSSNKKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为QQFYAYPIS；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPSSGNTKYAQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSVLYSSNQKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为GQYYAYPIT；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPGSGNTRYSQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSLLYSSNKKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为QQFYAYPIS；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPGSGNTRYSQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSVLYSSNQKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为GQYYAYPIT；其中HCDR和LCDR序列根据Kabat定义。...

【技术特征摘要】
2017.09.01 CN 20171077797101.一种特异性结合人CD47的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区，其中所述HCDR1序列为NYWMH，所述HCDR2序列为VIAPSDNYTNYNQKFQG，所述HCDR3序列为GGKYSMDY，所述LCDR1序列为RSSQSIVHSNGNTYLE，所述LCDR2序列为KVSNRFS，所述LCDR3序列为FQGSHVPFT；或者所述HCDR1序列为SYWMH，所述HCDR2序列为TIDRSDSYISYNQKFKG，所述HCDR3序列为GGPYGSKMMDN，所述LCDR1序列为HASQNINVWLS，所述LCDR2序列为KASNLHT，所述LCDR3序列为QQGQSYPLT；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPSSGNTKYAQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSLLYSSNKKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为QQFYAYPIS；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPSSGNTKYAQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSVLYSSNQKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为GQYYAYPIT；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPGSGNTRYSQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSLLYSSNKKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为QQFYAYPIS；或者所述HCDR1序列为DYYMH，所述HCDR2序列为WIYPGSGNTRYSQKFKD，所述HCDR3序列为REEDYFDY，所述LCDR1序列为KSSQSVLYSSNQKNYLT，所述LCDR2序列为WASTRES，所述LCDR3序列为GQYYAYPIT；其中HCDR和LCDR序列根据Kabat定义。2.根据权利要求1所述的抗体，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：23、28、30、32或者33所示。3.根据权利要求1所述的抗体，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：24、29、31、34或者35所示。4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：23所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：24所示；或者所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：28所示，所述抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志刚，刘玉兰，郭晶晶，郝小勃，万姝南，胡俊杰，
申请(专利权)人：北京智仁美博生物科技有限公司，智翔上海医药科技有限公司，重庆智翔金泰生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11