辐抗肽在促肝细胞再生中的应用制造技术

本发明专利技术公开了辐抗肽蛋白CBLB502的新用途。本发明专利技术提供了辐抗肽蛋白CBLB502在制备用于促进肝细胞增殖的产品中的应用。本发明专利技术的辐抗肽蛋白CBLB502可促进肝细胞增殖和肝脏再生，具有潜在的临床应用价值。

Application of radiant peptide in hepatocyte regeneration

The invention discloses a new use of the radiolysis peptide protein CBLB502. The invention provides the application of radio peptide protein CBLB502 in preparing products for promoting hepatocyte proliferation. The radioantipeptide protein CBLB502 of the invention can promote the proliferation of hepatocytes and liver regeneration, and has potential clinical application value.

【技术实现步骤摘要】
辐抗肽在促肝细胞再生中的应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及辐抗肽蛋白在促进肝细胞增殖和肝再生中的新用途。
技术介绍
肝脏疾病是严重威胁人类生命健康的重要疾病之一，而肝脏移植是治疗终末期肝病唯一有效的方法。虽然肝脏本身具有极强的再生和功能代偿能力，但如何有效促进和调控肝细胞再生以代偿受损的肝功仍是临床亟需解决的问题。目前国内外的大多数学者认为，肝再生虽然是以肝实质细胞的增殖为主，但任何形式的肝再生过程都与炎症反应和免疫活化密切相关，因此对肝脏固有免疫功能的合理调控对促进肝脏再生修复将具有重要意义。肠道微生物及其代谢产物通过肠-肝轴与肝脏在解剖结构和功能上密切关联，肠道微生态的失衡是导致慢性肝病向终末期发展的重要诱因，而Toll样受体(TLRs)介导免疫应答反应对维持胃肠道稳态和肝脏健康至关重要。除了TLR3以外，目前发现的所有TLRs以及IL-1β、IL-18等细胞因子都要通过髓样分化因子88(MyD88)介导下游NF-κB信号通路的活化。TLR5作为目前已知的唯一一个配体为蛋白质(细菌鞭毛蛋白)的模式识别受体，其在组织损伤修复中的作用日渐受到关注。研究表明，细菌鞭毛蛋白对电离辐射、基因毒性药物、病原体感染、缺血-再灌注、移植物抗宿主病等导致组织损伤均具有明显的防护效果。Burdelya等人发现，肝脏是CBLB502蛋白(一种重组的沙门氏菌鞭毛蛋白)发挥辐射防护活性的主要靶器官，CBLB502蛋白能够从骨髓中募集大量免疫细胞(如T细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、中性粒细胞)入肝，显著活化肝脏特别是肝实质细胞NF-κB信号通路，诱导肝脏产生某些未知的促增殖因子参与辐射损伤后的造血重建。肝脏拥有两个独立的再生机制，即急性肝损伤(如肝切除、药物性肝损伤)时完全依靠肝实质细胞的再生和慢性肝损伤条件下依赖肝前体细胞(如肝卵圆细胞)的肝再生，但不论哪种形式下的肝再生都与骨髓细胞的动员和分化密切相关。近年来，骨髓细胞在肝再生中的重要作用逐渐受到重视。一方面，由骨髓细胞分化而来kupffer细胞以及肝窦内皮细胞的激活在肝再生启动和修复过程中扮演了重要角色；另外，骨髓细胞可以通过转分化为肝细胞或者与肝细胞发生融合生成新的肝细胞。最近研究表明肝切除后骨髓来源的造血干/祖细胞向肝内迁移并与肝实质细胞融合后快速增殖的新机制，提示骨髓细胞的动员、募集和分化在肝再生过程中的重要作用。由此不难想象，如果能在肝损伤前适当调整肝内免疫微环境(将骨髓干/祖细胞提前募集到肝内)，使肝脏处于一种特殊的“感受态”，就可以为后续的肝实质细胞增殖做好准备，从而达到促进肝脏再生修复的效果，而TLR5信号通路的活化则刚好能满足这一需求。除此之外，与其他TLRs的激动剂不同，细菌鞭毛蛋白在调控肝脏免疫方面有其独特的优势：首先，TLR5在肝内的表达水平相对较低且仅限于胆管上皮细胞，因而不会像LPS一样直接诱导kupffer细胞活化并分泌大量的TNF-α和IL-1β触发肝毒性；另外，鞭毛蛋白诱导肝内多种抗凋亡、抗感染因子表达，有利于肝脏损伤修复过程中外源性病原体的清除；第三，鞭毛蛋白诱导的肝内免疫活化反应本身并不会导致肝损伤，甚至在外源性促凋亡因子(如Fas抗体)刺激下也能保护肝实质细胞免于损伤；最后，CBLB502蛋白是经过人工改构的重组鞭毛蛋白，在保留天然生物学活性的同时其免疫原性大为降低(约为前者的1/50)，使其临床应用的安全性显著提高。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种辐抗肽蛋白在制备用于促进动物肝细胞增殖的产品中的应用。本专利技术提供了一种辐抗肽蛋白在制备用于促进动物肝细胞增殖和肝再生的产品中的应用，其中辐抗肽蛋白包括但不限于CBLB502，还可以包括氨基酸序列与CBLB502相似度不低于90％、具有类似活性的多肽；优选所述辐抗肽蛋白为CBLB502。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述应用是用于在肝损伤或疾病引起的损伤以后在肝脏中促进肝细胞增殖；进一步地，所述肝损伤或疾病引起的损伤起因于肝切除、肝硬化、肝恶性肿瘤，暴露于酒精、肝毒性药物、暴露于抗结核剂和化学治疗剂。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述应用是用于在肝切除以后在肝脏中促进肝细胞增殖。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述促进肝细胞增殖通过以下1)-5)中至少一种体现：1)提高动物的肝脏指数；2)提高肝细胞增殖速度；3)抑制动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量；4)促进肝细胞生长因子HGF的产生和分泌；5)促进肝细胞转化生长因子TGF-α的产生和分泌。本专利技术提供了辐抗肽蛋白在制备具有如下1)-5)中至少一种功能的产品中的应用：1)提高动物的肝脏指数；2)提高肝细胞增殖速度；3)抑制动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量；4)促进肝细胞生长因子HGF的产生和分泌；5)促进肝细胞转化生长因子TGF-α的产生和分泌；其中，所述辐抗肽蛋白为CBLB502。上述应用中，所述产品为药物。上述应用中，所述动物为哺乳动物，优选为人或鼠。本专利技术的另一目的是提供一种具有如下1)-5)中至少一种功能的产品，1)提高动物的肝脏指数；2)提高肝细胞增殖速度；3)抑制动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量；4)促进肝细胞生长因子HGF的产生和分泌；5)促进肝细胞转化生长因子TGF-α的产生和分泌。本专利技术提供了一种具有如下1)-5)中至少一种功能的产品，1)提高动物的肝脏指数；2)提高肝细胞增殖速度；3)抑制动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量；4)促进肝细胞生长因子HGF的产生和分泌；和5)促进肝细胞转化生长因子TGF-α的产生和分泌，其活性成分为辐抗肽蛋白CBLB502。在本专利技术的一个具体实施方案中，，所述产品为药物，所述动物为哺乳动物，优选为人。根据本专利技术，辐抗肽蛋白指的是CBLB502蛋白，其可以在市场上商购或按照现有技术已知的方法制备，其具体的制备方法可参见申请号201110257680.1的“一种重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽的制备和活性鉴定方法”的专利申请。根据本专利技术，术语“肝细胞增殖”是指来源于肝脏的原代培养的实质细胞、正常肝细胞系以及肝癌细胞系细胞分裂能力的增强，主要通过检测DNA合成来检测细胞的增殖能力。根据本专利技术，术语“肝再生”是指哺乳动物肝脏自发恢复的能力。本专利技术相对于现有技术具有如下特点：本专利技术的实验证明，本专利技术的辐抗肽蛋白CBLB502可以促进肝细胞增殖和肝脏再生，具体地，CBLB502蛋白可显著提高肝脏指数，提高肝脏切除后肝细胞的增殖速度，抑制动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST的表达量，以及促进肝细胞生长因子HGF和转化生长因子TGF-α的产生和分泌。附图说明图1为重组CBLB502蛋白的纯度与生物学活性示意图；其中，A为重组CBLB502蛋白SDS-PAGE银染纯度检测示意图，B为HEK-BlueTLR5NF-κB报告基因检测CBLB502蛋白生物学活性示意图；图2为小鼠肝切除情况下辐抗肽蛋白CBLB502对肝脏指数的影响；其中，PH为对照组，502PH为注射辐抗肽蛋白CBLB502实验组；图3为小鼠肝切除前1小时注射辐抗肽蛋白CBLB502对肝细胞增殖速度的影响；其中，PH为对照组，CBL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.辐抗肽蛋白在制备用于促进动物肝细胞增殖和肝再生的产品中的应用，其中辐抗肽蛋白包括但不限于CBLB502，还可以包括氨基酸序列与CBLB502相似度不低于90％、具有类似活性的多肽；优选所述辐抗肽蛋白为CBLB502。

【技术特征摘要】
1.辐抗肽蛋白在制备用于促进动物肝细胞增殖和肝再生的产品中的应用，其中辐抗肽蛋白包括但不限于CBLB502，还可以包括氨基酸序列与CBLB502相似度不低于90％、具有类似活性的多肽；优选所述辐抗肽蛋白为CBLB502。2.根据权利要求1所述的应用，用于在肝损伤或疾病引起的损伤以后在肝脏中促进肝细胞增殖。3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述肝损伤或疾病引起的损伤起因于肝切除、肝硬化、肝恶性肿瘤、肝毒性药物、暴露于抗结核剂和化学治疗剂。4.根据权利要求4所述的应用，其中，用于在肝切除以后在肝脏中促进肝细胞增殖。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述促进肝细胞增殖通过以下1)-5)中至少一种体现：1)提高动物的肝脏指数；2)提高肝细胞增殖速度；3)抑制动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量；4)促进肝细胞生长因子HGF的产生和分泌；5)促进转化生长因子TGF-α的产生和分泌。6.辐抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛常辉，杨刚刚，杨晓明，于淼，张全义，张文，詹轶群，王磊，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，河南新乡华星药厂，
类型：发明
国别省市：北京,11