一种生物样品的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种生物样品的检测方法，包括以下步骤：(1)对采集自受试者的生物样品进行分离，得到待测样品；和(2)在所述待测样品中检测免疫球蛋白IgA，检测结果作为判断所述受试者是否需要进行肾活检的初步依据。本发明专利技术提供的检测方法可以对IgA肾病进行初级筛查，为后期是否进行肾活检穿刺提供参考数据；而且该检测方法是非侵入性的，操作简便且检测费用相对较低。

A method for the detection of biological samples

The invention provides a method for detecting biological samples, which comprises the following steps: (1) separating the biological samples collected from the subjects to obtain the samples to be tested; and (2) detecting immunoglobulin IgA in the samples to be tested, and the detection results as a preliminary basis for judging whether or not the subjects need renal biopsy. The detection method provided by the invention can be used for primary screening of IgA nephropathy and provide reference data for later renal biopsy puncture; moreover, the detection method is non-invasive, easy to operate and relatively low detection cost.

【技术实现步骤摘要】
一种生物样品的检测方法
本专利技术涉及医学检验领域，具体涉及一种生物样品的检测方法。
技术介绍
IgA肾病是最为常见的一种原发性肾小球疾病，是指肾小球系膜区以IgA或IgA沉积为主，伴或不伴有其他免疫球蛋白在肾小球系膜区沉积的原发性肾小球病。病变类型包括局灶节段性病变、毛细血管内增生性病变、系膜增生性病变、新月体病变及硬化性病变等。其临床表现为反复发作性肉眼血尿或镜下血尿，可伴有不同程度蛋白尿，部分患者可以出现严重高血压或者肾功能不全。IgA肾病分为原发性IgA肾病和继发性IgA肾病两种类型。其中，原发性IgA肾病由肾脏本身疾病引起。继发性IgA肾病由肾脏以外的疾病引起，如紫癜性肾炎、HIV感染、血清阴性脊柱关节炎、肿瘤、麻风病、肝脏疾病、家族性IgA肾病等。目前临床常用的IgA肾病检测和诊断方法是直接进行肾脏活检，即肾穿刺检查。然而，肾穿刺检查是一项较为复杂的、技术含量较高的检查方法，一般需要在三级以上医院及其相关检测机构配合进行，普及性较差。另外，肾穿刺是一种侵入性检测手段，检测存在风险，受试者遭受身体上的痛苦的同时还有可能引发内出血。而且，受试者需要住院过夜以完成检查，因而难以成为慢性疾病治疗过程中明确疗效和预后所需的多次重复性检查手段。另外进行肾穿刺的费用也较高。在中国目前医疗资源较为匮乏的背景下，受试者不得不等待数天甚至更长的时间才能被安排进行此项检查。另外，若肾脏活检的结果是患者并未患有肾病，则患者在白白遭受穿刺带来的身体痛苦和承担高额花费的同时，还可能经历内出血的风险，对身体造成二次伤害。这对患者、家属、医院三方都是潜在的负担。因此，对疑似患有肾脏疾病的患者在进行肾穿刺之前进行前期、无创(非侵入性)、低费用、快速的可靠排查是有利的。基于现有技术的上述缺陷，亟需开发出一种针对IgA肾病的高效、简单、非侵入的检测方法。
技术实现思路
本专利技术人发现，IgA肾病患者尿液离心沉渣分离的免疫球蛋白IgA和/或含有IgA的免疫复合物检测呈阳性，并且二者的存在及分布情况与IgA肾病的严重程度相关。本专利技术人据此专利技术出一种针对IgA肾病相关标志物的无创检测方法，该检测结果作为判断所述受试者是否需要进行肾活检的初步依据。本专利技术提供的检测方法可以作为现有肾活检方法的前期或辅助手段和/或为肾活检提供参考数据。当然，在结合或不结合其他因素的前提下，若临床医生认为本专利技术检测方法的结果足以确定受试者患有IgA肾病或受试者基于此方法或用途的结果即确信其患有肾病，也可直接进行治疗或留待观察。根据本专利技术，提供一种生物样品的检测方法，包括以下步骤：(1)对采集自受试者的生物样品进行分离，得到待测样品；和(2)在所述待测样品中检测免疫球蛋白IgA，检测结果作为判断所述受试者是否需要进行肾活检的初步依据。其中，所述生物样品是尿液，所述待测样品是尿液经过离心处理得到的尿液沉淀物，所述待测样品包含以下中的一种或多种：细胞、细胞碎片、以及附着在细胞或细胞碎片上的免疫复合物。其中，步骤(2)中通过免疫荧光检测在所述待测样品中检测IgA。所述免疫荧光检测按照以下步骤进行：(A)将所述免疫组合物作为一抗与所述采集自受试者的生物样品接触，形成抗体-抗原复合物，洗涤除去未结合的一抗；(B)加入荧光标记的二抗进行染色，洗涤除去未结合的二抗；(C)制片，使用荧光显微镜观察荧光标记信号的位置及分布，其中，步骤(A)中的所述免疫组合物包括抗-IgA抗体。其中，根据所述荧光标记信号的位置及分布评估IgA的位置及分布。其中，所述IgA的分布包括颗粒状分布、块状分布、条状分布、丝状分布和纤维状分布中的一种或多种。其中，所述IgA的分布作为判断所述受试者是否需要进行肾活检的初步依据。步骤(2)中还可以通过免疫荧光检测在所述待测样品中检测IgA。所述免疫印迹检测包括在所述采集自受试者的生物样品中检测IgA的存在及其分子量。本专利技术提供的生物样品的检测方法具有如下有益效果：(1)该检测方法对尿液中的免疫标志物进行检测，得到关于免疫标志物存在、分布或含量的信息，利用免疫标志物的上述信息对IgA肾病进行初级筛查，为后期是否进行肾活检穿刺提供参考数据。当然，该方法并不直接获得受试者是否患有IgA肾病的诊断结果，免疫标志物的存在与否只是判断是否患有IgA肾病的一个中间结果，还需要进行后续或其他方法才能对IgA肾病进行确诊；当然，在结合或不结合其他因素的前提下，若临床医生认为本专利技术方法或用途的结果可信或者假设患者坚持以此方法为结论，也可直接进行治疗或留待观察。(2)该检测方法是非侵入性的，避免对受试者造成不必要的损伤，并且取样简便、检测快速简单、费用相对较低。(3)本专利技术提供的检测方法可以作为一种对IgA肾病进行无创性检查的常规项目，为部分拒绝接受肾穿刺活检或有肾穿刺禁忌症的病人、或者无条件开展肾穿刺活检的医疗单位提供一种颇具指导意义的参考检测方法。附图说明图1示出根据本专利技术一种实施方式的待测样品分离及检测方法流程图。图2示出根据本专利技术一种实施方式的IgA肾病患者的免疫荧光测试结果，其示出了IgG4与IgA的免疫荧光信号。图3示出正常健康受试者的IgA免疫荧光检测图像。图4示出患有不同严重程度IgA肾病患者的IgA免疫荧光检测图像，其中，图4A示出患有Lee分级II级IgA肾病患者的IgA免疫荧光检测图像；图4B示出患有Lee分级III级IgA肾病患者的IgA免疫荧光检测图像；图4C示出患有Lee分级IV级IgA肾病患者的IgA免疫荧光检测图像。图5示出IgA肾病患者、正常受试者和膜性肾病患者尿液的WesternBlot检测结果。具体实施方式下面通过附图和具体实施方式对本专利技术进一步详细说明。通过这些说明，本专利技术的特点和优点将变得更为清楚明确。本专利技术上下文所使用的术语“阳性”是指具有可检出的检测信号。本专利技术上下文所使用的“在一种实施方式中”和“在另一种实施方式中”可以指代相同的实施方式，也可以指代不同的实施方式。本专利技术提供一种针对受试者尿液细胞及细胞碎片等中IgA肾病生物标志物的检测方法，其检测结果可以作为判断受试者是否需要进一步进行肾活检的参考指标。本专利技术为IgA肾病的初步鉴别和愈后检验提供了一种快速而无创的检测方法，并为慢性肾病长期治疗所需的疗效观察提供随时可检测的手段，具有显著的临床实操价值。检测结果也具有极高的参考价值。但需注意，本专利技术检测出的免疫标志物不是或不必然是患有IgA肾病的终极诊断指标，而只是中间结果。根据本专利技术，提供一种生物样品的检测方法，包括以下步骤：(1)对采集自受试者的生物样品进行分离，得到待测样品；和(2)在所述待测样品中检测免疫球蛋白IgA，检测结果作为判断所述受试者是否需要进行肾活检的初步依据。在根据本专利技术的一种实施方式中，步骤(2)中通过免疫荧光检测在所述待测样品中检测IgA。所述免疫荧光检测按照以下步骤进行：(A)将所述免疫组合物作为一抗与所述采集自受试者的生物样品接触，形成抗体-抗原复合物，洗涤除去未结合的一抗；(B)加入荧光标记的二抗进行染色，洗涤除去未结合的二抗；(C)制片，使用荧光显微镜观察荧光标记信号的位置及分布，其中，步骤(A)中的所述免疫组合物包括抗-IgA抗体。根据本专利技术，所述免疫组合物可以与IgA特异性结合，生成免疫复合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物样品的检测方法，包括以下步骤：(1)对采集自受试者的生物样品进行分离，得到待测样品；和(2)在所述待测样品中检测免疫球蛋白IgA，检测结果作为判断所述受试者是否需要进行肾活检的初步依据。

【技术特征摘要】
1.一种生物样品的检测方法，包括以下步骤：(1)对采集自受试者的生物样品进行分离，得到待测样品；和(2)在所述待测样品中检测免疫球蛋白IgA，检测结果作为判断所述受试者是否需要进行肾活检的初步依据。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样品是尿液，所述待测样品是尿液经过离心处理得到的尿液沉淀物，所述待测样品包含以下中的一种或多种：细胞、细胞碎片、以及附着在细胞或细胞碎片上的免疫复合物。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中通过免疫荧光检测在所述待测样品中检测所述IgA。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述免疫荧光检测按照以下步骤进行：(A)将免疫组合物作为一抗与所述采集自受试者的生物样品接触，形成抗体-抗原复合物，洗涤除去未结合的一抗；(B)加入荧光标记的二抗进行染色，洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：苏庆宁，祝胜郎，
类型：发明
国别省市：广东,44