一种拟南芥高效培育的技术方法技术

本发明专利技术公开了拟南芥高效培育的技术方法，将油菜籽饼粕发酵10天后与培养拟南芥营养土及蛭石混合在高压灭菌锅进行高温高压消毒灭菌，室温放置冷却后播种春化处理的拟南芥种子，待拟南芥生长至现蕾期摘除主花序而抑制顶端优势，生长至盛花期即可用于拟南芥转化实验。由于在拟南芥培养基质营养土和蛭石中加入了发酵后的油菜籽饼粕，拟南芥生长所需营养更加丰富全面，生长更加旺盛，拟南芥植株更加健壮。现蕾期进行主花序的摘取有效的抑制了顶端生长优势，同时植株本身生长健壮，从而产生的花序较多，有利于进行拟南芥的转化实验。操作过程简单，技术要求程度低，环境因子要求不严，放置于一般的光照培养箱即可。

A technical method for efficient cultivation of Arabidopsis thaliana

The invention discloses a technical method for efficient cultivation of Arabidopsis thaliana. After 10 days of fermentation, rapeseed meal is mixed with cultivated Arabidopsis nutrient soil and vermiculite for high temperature and high pressure sterilization in a high-pressure sterilizing pot. Arabidopsis seeds treated by vernalization are placed at room temperature after cooling, and the main inflorescence is removed and the top is inhibited when Arabidopsis thaliana grows to budding stage. It can be used to transform Arabidopsis thaliana to the flowering stage. Because the fermented rapeseed meal was added into the nutrient soil and vermiculite of Arabidopsis thaliana culture medium, the nutrition needed for Arabidopsis thaliana growth was more abundant and comprehensive, the growth was more vigorous, and the Arabidopsis thaliana plant was more robust. Extraction of main inflorescences at budding stage effectively inhibited the apical growth advantage, while the plant itself grew strong, resulting in more inflorescences, which is conducive to the transformation of Arabidopsis. The operation process is simple, the technical requirements are low, and the environmental factors are not strictly required. It can be placed in a general light incubator.

【技术实现步骤摘要】
一种拟南芥高效培育的技术方法
本专利技术涉及生物技术研究领域，特别是一种拟南芥高效培育的技术方法。技术背景拟南芥属于十字花科植物，是最常见的模式植物，广泛用于遗传、生理生化及分子生物学研究的各个领域。拟南芥的植株高度较矮，只有30cm左右；基因组简单，只有5对染色体，虽然基因组简单，但是具有相对复杂的十字花科植物同源性较高的基因组信息；拟南芥生长周期短，只有6周左右即可收获下一代拟南芥种子；形态特征简单，但是具有完整的根、茎、叶、花、果实及种子常见组织器官；全基因组测序已经完成，基于上述原因，拟南芥在研究植物形态解剖、分子遗传、基因表达调控、生物信息等方面发挥了非常重要的作用。随着现代植物分子生物学的研究进展，大量的植物基因组序列信息被获得，如转录调控因子MYB、NAC、NAM、WRKY及重要的功能基因，在获取序列信息后为进一步阐释其生物学功能，有必要做遗传转化进行分析验证，而对于基因组复杂、生长周期长、分析验证相对困难的重要农作物，植物科学家往往首先把克隆获得的基因序列在模式植物拟南芥中进行分析验证，因此，拟南芥的遗传转化成为基因功能分析及验证常见的技术手段，拟南芥的培养是其非常关键的环节。而当前拟南芥培养过程中植株矮小、对环境因子要求严格、花序较少，难以满足拟南芥遗传转化实验的需求。基于以上原因，通过反复实验在科研实践中逐渐摸索一套技术方案，提供一种以油菜籽饼粕为基础的培养的技术方法，是有十分重大的意义的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：主要针对现有技术中拟南芥培养过程中植株矮小、对环境因子要求严格、花序较少，难以满足拟南芥转化实验的需求，提供一种以油菜籽饼粕为基础的培养的技术方法，该方法培养的拟南芥植株生长旺盛、植株高大、花序较多、对环境因子要求不严。为解决拟南芥培养过程中的主要问题，本专利技术所采用的技术方案为：油菜籽饼粕发酵10天后与培养拟南芥营养土及蛭石混合在高压灭菌锅进行高温高压消毒灭菌，室温放置冷却后播种春化处理的拟南芥种子，待拟南芥生长至现蕾期摘除主花序而抑制顶端优势，生长至盛花期即可用于拟南芥转化实验。上述方案实施的步骤为：1、油菜籽饼粕和水按照4:1混合均匀，在玻璃器皿放置于温室进行发酵10天。2、拟南芥种子用0.1％的HgCl2消毒灭菌后清水冲洗，然后用75％的酒精进行灭菌3次，灭菌水清洗后放置于4℃春化处理4天。3、发酵后的油菜籽饼粕：营养土：蛭石按照1:2:1的比例混合均匀，在高压灭菌锅进行高温高压灭菌，室温冷却后分装在拟南芥培养花钵。4、春化处理后的拟南芥种子均匀播种在上述花钵表面，放置在光照培养箱培养至现蕾期，摘取拟南芥顶端的主花序，抑制拟南芥顶端优势，继续在光照培养箱培养至盛花期即可用于拟南芥的转化实验。与现有技术相比，本专利技术所具有的有益效果为：1、由于在拟南芥培养基质营养土和蛭石中加入了发酵后的油菜籽饼粕，拟南芥生长所需营养更加丰富全面，生长更加旺盛，拟南芥植株更加健壮。2、现蕾期进行主花序的摘取有效的抑制了顶端生长优势，同时植株本身生长健壮，从而产生的花序较多，有利于进行拟南芥的转化实验。3、操作过程简单，技术要求程度低，环境因子要求不严，放置于一般的光照培养箱即可。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为对本专利技术的任何限制。实施例1：1、2017年2月10日称量甘蓝型油菜油菜籽饼粕5公斤放在玻璃容器，加水1.25公斤混合均匀，放置在20℃左右的温室发酵10天。2、2017年2月16日以0.1％的HgCl2对col生态型拟南芥种子进行消毒灭菌，清水冲洗后用75％的酒精消毒灭菌3次，用灭菌水清洗2次后在4℃冰箱进行春化处理4天。3、2017年2月21日称量营养土10公斤及蛭石5公斤，把发酵后的油菜籽饼粕：营养土：蛭石按照1:2:1的比例混合均匀，放置在高压灭菌锅进行高温高压灭菌处理，灭菌后放置在室温冷却再用花钵进行分装。4、步骤2中春化处理的拟南芥种子均匀播种在步骤3准备的花钵中，播种后放置在光照培养箱，每周浇水1次保持拟南芥培养基质湿润，培养至现蕾期。5、2017年3月9日col生态型拟南芥现蕾，摘掉拟南芥顶端花蕾抑制顶端生长优势，培养至盛花期即可用于拟南芥的转化实验。实施例2：1、2017年3月15日称量芥菜型油菜油菜籽饼粕5公斤放于玻璃器皿，加入1.25公斤自来水，放置在20℃左右的温室发酵10天。2、2017年3月21日以0.1％的HgCl2对RLD生态型拟南芥种子进行消毒灭菌，清水冲洗3次后以浓度为75％的酒精消毒灭菌3次，然后以灭菌水清洗2次后在温度为4℃冰箱进行春化处理4天。3、2017年3月26日天平称量营养土10公斤及蛭石5公斤，把发酵后的油菜籽饼粕：营养土：蛭石按照1:2:1的比例混合均匀，放置在高压灭菌锅进行高温高压灭菌处理，灭菌后放置在室温冷却再用花钵进行分装。4、2017年3月26日经过春化处理的拟南芥种子均匀播种在上述准备好的花钵，播种后移至光照培养箱，每个星期浇水1次保持拟南芥培养基质湿润，培养至现蕾期。5、2017年4月15日RLD生态型拟南芥现蕾，摘掉拟南芥顶端花蕾抑制顶端生长优势，培养至盛花期即可用于拟南芥的转化实验。说明：以上实施例子实验材料选择了RLD生态型拟南芥及col生态型拟南芥，实际对于其他生态型拟南芥均适用，油菜籽饼粕选择了甘蓝型油菜及芥菜型油菜，实际对于白菜型油菜也适用。以上只是本专利技术的具体应用范例，本专利技术还有其他的实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本专利技术所要求的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.根据权利要求1所述的拟南芥高效培育的技术方法，其特征在于：将油菜籽饼粕发酵10天后与培养拟南芥营养土及蛭石混合在高压灭菌锅进行高温高压消毒灭菌，室温放置冷却后播种春化处理的拟南芥种子，待拟南芥生长至现蕾期摘除主花序而抑制顶端优势，生长至盛花期即可用于拟南芥转化实验。

【技术特征摘要】
1.根据权利要求1所述的拟南芥高效培育的技术方法，其特征在于：将油菜籽饼粕发酵10天后与培养拟南芥营养土及蛭石混合在高压灭菌锅进行高温高压消毒灭菌，室温放置冷却后播种春化处理的拟南芥种子，待拟南芥生长至现蕾期摘除主花序而抑制顶端优势，生长至盛花期即可用于拟南芥转化实验。2.根据权利要求1所述的拟南芥高效培育的技术方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1、油菜籽饼粕和水按照4:1混合均匀，在玻璃器皿放置于温室进行发酵10天；步骤2、拟...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍林涛，奉斌，韩宏仕，徐春，曾章丽，
申请(专利权)人：贵州省油菜研究所，
类型：发明
国别省市：贵州,52