一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于微生物应用技术领域，尤其涉及一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂及其制备方法。一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂，其特征在于，所述的生防菌剂的主要成份是由菌株16029和菌株16098两种细菌混合发酵的发酵液组成。本发明专利技术的生防菌剂能同时对烟草青枯病、烟草黑胫病和烟草根黑腐病3种主要根茎类病害的病原菌具有较强的抑制作用，可作为烟草根茎类病害的生防菌剂加以利用。本发明专利技术菌剂作为生防菌剂在防治烟草根茎类病害上显示出良好的应用前景。

Biocontrol agent for controlling tobacco rhizome diseases and preparation method thereof

The invention belongs to the field of microbial application technology, in particular to a biocontrol agent for preventing and controlling tobacco rhizome diseases and a preparation method thereof. A biocontrol agent for controlling tobacco rhizomatous diseases is characterized in that the main composition of the biocontrol agent is a fermentation broth of mixed fermentation of strain 16029 and strain 16098. The biocontrol agent of the invention can simultaneously inhibit the pathogens of three main rhizomatous diseases, namely, bacterial wilt of tobacco, black shank of tobacco and black rot of tobacco root, and can be used as a biocontrol agent for tobacco rhizomatous diseases. The microbial agent of the invention, as a biocontrol agent, has a good application prospect in preventing and controlling tobacco rhizomatous diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂及其制备方法
本专利技术属于微生物应用
，尤其涉及一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂及其制备方法。
技术介绍
烟草是一种重要的叶用经济作物，是烟区农民脱贫致富的主要经济来源，但是烟草生长受到根茎类病害青枯病、黑胫病和根黑腐病的严重影响，烟草根茎类病害在热带和亚热带烟区的发生尤为严重，是威胁世界烟草生产的毁灭性病害。3种主要根茎类病害常混合发病，加重危害程度，许多重病区的老病田或旱地烟田，全田发病和绝产无收的现象每年都发生，导致烟叶产量和质量下降而造成的直接产值损失非常严重。烟草青枯病是由茄科拉尔氏菌Ralstoniasolanacearum引起的一种细菌性维管束病害。该病在我国南方主要烟区如广西、广东、福建、湖南、浙江等省(自治区)普遍发生，发病面积较大，为害严重，近年来还有向北方烟区扩展的趋势，如山东、河南、陕西及辽宁等省都己有该病的分布和造成为害的记载，局部烟区还相当严重。烟草黑胫病是烟草生产上最具毁灭性的病害之一，又称烟草疫病，中国各主要产烟区均有不同程度发生，其中安徽、山东、河南省为历史上的重病区，该病常与烟草青枯病混合发生，故危害更为严重。由于近年来连作烟田面积扩大，此病为害有明显上升之势。烟草黑胫病病原为寄生疫霉烟草致病型(Phytophtoraparasiticavar.nicotianaeTucker)，为卵菌纲真菌。该病主要为害茎杆，感病植株茎基部初呈水渍状黑斑，后向上下及髓部扩展，绕茎一周时，植株萎蔫死亡，纵剖病茎，可见髓部黑褐色坏死并呈叠片状，长满白色絮状菌丝。烟草根黑腐病也是世界性的病害，在我国云南、贵州、湖北、广西等省区发生较重，严重地块发病率可达30％以上，近年亦有加重危害的趋势。烟草根黑腐病病原thielaviopsisbasicola为基生根串株霉，属半知菌亚门真菌。该病在苗床期以及大田种植时均会发生为害，幼苗期发病，病菌首先从幼苗的土表部位侵入，病斑环绕茎部，并向上入侵子叶，引起腐烂，毁掉烟苗；大田期发病，烟株初期地上部分表现生长停滞，易于萎蔫，拔根可见根尖变褐，黑褐腐烂，严重者病根全部成特异的黑色，须根往往难以拔出，残留在土壤中。3种烟草根茎类病害的主要侵染源均来源于土壤，特别是历年发病田块，防治上存在较大的困难。特别是烟草青枯病，由于该病属于细菌性病害，植株感病属系统性浸染，因而防治十分困难；烟草黑胫病和根黑腐病属于真菌性病害，目前化学防治上虽有一些相对比较有效的药剂，但对根治病原菌的为害还存在较大的困难，大田植株一旦感病，病情难以控制。此外，化学药剂对烟草根茎类病害的防治还存在诸多不足之处，病菌对化学农药易产生抗药性，大量使用化学农药会造成环境污染和生产成本的上升。近年来，研究比较多的是生物防治和诱导抗病性。生物防治具有无公害、无污染等优点，是在防治烟草根茎类病害上的一种经济、有效和可持续发展途径。利用生防菌防治青枯病是近年来做得较多的研究之一，如罗宽等用拮抗的Pseudomonasspp.在温室防治烟草青枯病取得较好防效，但未应用于大田；印度的Anuratha和Gnanamanick用P.fluorescens进行多种作物青枯病的防效试验，均取得良好防效。Hayward等在菲律宾的研究发现菌根菌可以减轻青枯病的发生，Suresh等发现泡襄丛枝菌根提取物对青枯菌的生长繁殖有强烈的抑菌作用。目前生物防治方法可在一定程度上减轻青枯病的为害，但目前实际应用中还存在防效不稳定等局限性。由于田间由发生多种根茎类病害混合发生为害的现象，因此，如何筛选可同时抑制3大根茎类病害的生防菌剂及其最佳使用方法，是烟草根茎类病害防治上亟待解决的问题。洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderiacepacia)是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的革兰氏阴性杆菌，因其可以产生多种抗菌成分而成为生物防治中的主要成员。近年来的研究表明，洋葱伯克霍尔德氏菌不是一个种，而是一组表型相近但基因型不同的复合物，称为洋葱伯克霍尔德氏菌群(Burkholderiacepaciacomplex，简称BCC)，至今已发现BCC包括20个不同的基因型，由于这些基因型之间有很低的DNA杂交率，因此可代表不同的种。上个世纪80年代初，人们在研究中发现部分BCC菌株可降解农药和除草剂中一些长期存在且对人有潜在致癌作用的化学物质，还可净化污水，具有非常好的生态和经济价值；同时还发现有些BCC菌株具有防治植物病虫害和促进植物生长的作用，被制成生物杀虫剂和生物杀菌剂，在农业生产中起着重要作用。但是，与此同时，人们又发现该菌的一些菌株是人体条件致病菌。欧美一些国家因其部分菌株为条件致病菌而放弃或者限制BCC生物农药的使用，但目前仍有不少国家在生产和使用以它为原料制成的生物农药，我国也于1996年注册了该类产品。BCC由20个种(或基因型)构成，包括B.cepacia、B.multivorans、B.cenocepacia、B.stabilis、B.vietnamiensis、B.dolosa、B.ambifaria、B.anthina、B.pyrrocinia、B.ubomensis、B.latens、B.diffusa、B.arboris、B.seminalis、B.metallica、B.contaminans、B.lata、B.pseudomultivorans、B.stagnalis和B.territorii。这些种在自然界普遍存在，尤其与植物关系密切。目前已研究发现，BCC致病菌株与特定的毒力基因(BCESM基因)存在相关性。BCESM基因被认为是BCC菌中一种与人体致病性/毒性连锁的遗传标记，对已经注册的洋葱伯克霍尔德氏菌株，一旦发现该类标记的存在，则撤销注册。因此，通过致病因子BCESM基因的检测，可以区分BCC的致病菌株和非致病菌株。当然，为了确保BCC生防菌株使用的安全性，利用动物模型(小白鼠)或植物模型来进一步检测菌株是否有致病性也是必要的。苜蓿一般用于医院呼吸道感染细菌致病性测定的模式植物。人们研究发现，苜蓿可以代替老鼠作为模式植物测定BCC菌群对哺乳动物的毒性，苜蓿模型甚至表现出了比老鼠模型更高的灵敏度。因此，用苜蓿模型可简单快捷地检测出BCC菌株对哺乳动物是否具有致病性，为安全利用BCC菌株奠定了基础。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种生防菌剂及其制备方法，该生防菌剂能有效控制烟草青枯病、黑胫病和根黑腐病3种病害，且该生防菌剂对烟草生长有显著促进作用。本专利技术提供的技术方案如下：一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂，所述的生防菌剂的活性成分是由菌株16029和菌株16098两种细菌混合发酵的发酵液组成。作为优选，菌株16029的分类学命名为Burkholderiaanthina，于2018年01月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.15165。作为优选，菌株16098的分类学命名为Burkholderiacenocepacia，于2018年01月10日保藏于中国微生物菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂，其特征在于，所述的生防菌剂的活性成分是由菌株16029和菌株16098两种细菌混合发酵的发酵液组成的。

【技术特征摘要】
1.一种防治烟草根茎类病害的生防菌剂，其特征在于，所述的生防菌剂的活性成分是由菌株16029和菌株16098两种细菌混合发酵的发酵液组成的。2.根据权利要求1所述的防治烟草根茎类病害的生防菌剂，其特征在于，菌株16029的分类学命名为Burkholderiaanthina，于2018年01月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.15165。3.根据权利要求1所述的防治烟草根茎类病害的生防菌剂，其特征在于，菌株16098的分类学命名为Burkholderiacenocepacia，于2018年01月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.15166。4.根据权利要求1所述的防治烟草根茎类病害的生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)种子液制备：将菌株16029和菌株16098分别接种在营养肉汁培养基NA上独立培养，30℃摇床振荡培养20-24h，将两菌株培养液等量...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡春锦，曾泉，史国英，岑贞陆，农泽梅，叶雪莲，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45