多功能靶向性基因载体及制备方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种多功能靶向性基因载体及制备方法及用途，多功能靶向性基因载体，是用P(LA‑co‑GA)‑PEI‑PEG‑NLS‑G‑TAT‑G‑REDV所示的聚合物；本发明专利技术的多功能靶向性基因载体，具备穿膜功能和核定位功能、对内皮细胞的靶向功能，通过REDV肽与内皮细胞表面的整合素受体的特异性识别，以及TAT的穿膜作用，提高多功能靶向性多肽修饰的基因载体制备的基因复合物的细胞摄取。通过核定位信号NLS与核膜的相互作用，促进基因的核内在化，从而提高基因递送效果，实现提高转染效率和促进细胞迁移增殖的目的。以解决目前非病毒载体面临的问题。

【技术实现步骤摘要】
多功能靶向性基因载体及制备方法及用途
本专利技术属于生物材料
，具体涉及到多功能靶向性基因载体及制备方法及用途。
技术介绍
基因治疗是很有前景的治疗先天和后天心血管疾病的方法。它是通过载体将治疗性基因有效地传递到靶细胞内，通过基因的表达，调节细胞的行为，从而达到治疗的目的。基因疗法对于治疗心血管疾病的核心问题在于如何提高治疗性基因在内皮细胞的表达效率，而基因载体则在基因传递系统中起着重要的作用。为促进基因复合物在内皮细胞中的传递，增强目的基因的表达，研究表明，Arg-Glu-Asp-Val(REDV)是纤维粘连蛋白衍生的四肽，能特异性的被内皮细胞表面的α4β1整合素识别。而此类整合素在内皮细胞表面表达丰富，但在平滑肌细胞上几乎没有表达。因此，REDV多肽经常用于修饰人工血管表面，实现对内皮细胞的特异性识别和粘附。但是基因复合物实现基因在细胞内的表达需要经历复杂的胞内运输途径，例如在内涵体逃逸和核内在化等方面会存在一定的障碍。聚阳离子基因载体，例如聚乙烯亚胺(PEI)，含有大量氨基，正电荷较多，进入细胞后可以通过质子海绵效应促进载体实现内涵体逃逸的能力，提高转染效率。然而，较高的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多功能靶向性基因载体，其特征是用P(LA‑co‑GA)‑PEI‑PEG‑NLS‑G‑TAT‑G‑REDV所示的聚合物；其中，P(LA‑co‑GA)‑PEI为聚(丙交酯‑co‑乙交酯)‑聚乙烯亚胺的简称；PEG为聚乙二醇的简称；REDV‑G‑TAT‑G‑NLS为多肽，所述多肽的序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.多功能靶向性基因载体，其特征是用P(LA-co-GA)-PEI-PEG-NLS-G-TAT-G-REDV所示的聚合物；其中，P(LA-co-GA)-PEI为聚(丙交酯-co-乙交酯)-聚乙烯亚胺的简称；PEG为聚乙二醇的简称；REDV-G-TAT-G-NLS为多肽，所述多肽的序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1的多功能靶向性基因载体的制备方法，其特征是包括如下步骤：(1)将1,8-辛二醇、LA和GA放入干燥的聚合管中，加入辛酸亚锡作为催化剂，密封；对聚合管抽真空，充氮气，重复8-12次，升温至140-150℃反应24-28小时，得到P(LA-co-GA)粗品；精制，得到P(LA-co-GA)；LA为丙交酯的简称；GA为乙交酯的简称；P(LA-co-GA)为聚(丙交酯-co-乙交酯)的简称；所述1,8-辛二醇、LA、GA和辛酸亚锡的摩尔比为5：140-560：43-132：1-2；(2)按摩尔比为1：10-20：10-20的比例，将P(LA-co-GA)、丁二酸酐和二甲氨基吡啶，以及三乙胺溶解在干燥的1，4-二氧六环中，在25-30℃、氮气保护下反应20-25小时，得到溶液1，将溶液1滴加入搅拌下的0-10℃的乙醇中，有沉淀生成；固液分离，固体溶解到三氯甲烷中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤2-3次，稀盐酸洗涤3-4次，饱和氯化钠水溶液洗涤4-5次，向油相中加入无水硫酸钠干燥至恒重，得到端基为羧基的P(LA-co-GA)，所述三乙胺为P(LA-co-GA)质量的1-3倍；(3)按摩尔比为1：15-30：15-30的比例，将端基为羧基的P(LA-co-GA)、EDC和NHS溶解在DMS...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯亚凯，李茜，郝雪芳，任相魁，郭锦棠，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津,12